醫(yī)院藥學(xué):第四十八章　醫(yī)院藥品檢驗(yàn)

一、醫(yī)院藥品檢驗(yàn)的基本條件與要求

醫(yī)療單位制劑室必須設(shè)立藥檢室，直屬藥劑科領(lǐng)導(dǎo)。并按制劑室規(guī)模高立化學(xué)分析間、儀器間、無菌間、留樣觀察定,動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室等。

（一)藥檢室應(yīng)配備藥師以上的人員從事藥檢工作。

（二)藥檢室必須配備與所配制的制劑相適應(yīng)的檢驗(yàn)設(shè)備。如分析天平、酸度計(jì)、紫外分光亮度計(jì)、自動(dòng)旋光儀、顯微鏡、干燥箱、恒溫培養(yǎng)箱、霉菌培養(yǎng)箱、冰箱、不溶性微粒檢查裝置、凈化工作臺(tái)、澄明度檢測(cè)裝置等。

（三)動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室必須清潔衛(wèi)生，通風(fēng)良好，室溫國(guó)差應(yīng)符合實(shí)驗(yàn)要求，應(yīng)有排水、污、采光、調(diào)溫等設(shè)施。并應(yīng)有專人管理。按編號(hào)掛牌、定期淘汰、更新，并有使用記錄。

（四)制劑的成品要按規(guī)定進(jìn)行全檢，合格后方可使用。

（五)藥檢室必須有完整的檢驗(yàn)卡。檢驗(yàn)記錄應(yīng)編號(hào)歸檔，內(nèi)容包括;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)來源，鑒別試驗(yàn)、測(cè)試數(shù)據(jù)；數(shù)據(jù)處理。結(jié)論等原始資料。

（六)根據(jù)檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)出具檢驗(yàn)報(bào)告書，檢驗(yàn)人、復(fù)核人簽字后送藥檢室負(fù)責(zé)人審核簽字（檢驗(yàn)報(bào)告書一式二聯(lián)，第一聯(lián)存根、第二報(bào)告書)。全部的原始記錄、檢驗(yàn)報(bào)告單，按批號(hào)裝訂成冊(cè)保存三年。檢驗(yàn)記錄應(yīng)字跡清楚，內(nèi)容真實(shí)完整并簽字，不得撕毀和任意涂改。如需要更正時(shí)，應(yīng)有更改人簽字，并須使被更正的部分可以辨認(rèn)。

（七)藥檢室對(duì)所配的制劑必須建立留樣觀察制度，指令專人管理，制劑在儲(chǔ)存條件下的南量變化規(guī)律。留樣數(shù)量，大輸液每批4瓶。針劑（眼藥制劑)每批20支。其它制劑品種視其質(zhì)量穩(wěn)定情況酌情留樣。留樣時(shí)間：滅制劑品種在本批號(hào)制劑用完后，留樣留半年后可撤去。其它制劑品種可酌情而定。留樣觀察：在觀察期內(nèi)選取適當(dāng)?shù)呐鷶?shù)進(jìn)行規(guī)定項(xiàng)目的檢驗(yàn)，大輸液每月檢查一次，其它制品種每月檢查一次，認(rèn)真填定記錄，并保存三年。

（八)對(duì)制品種必須建立質(zhì)量檔案。內(nèi)容包括原輔料情況、工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、檢驗(yàn)方法的改進(jìn)、留樣觀察結(jié)果及質(zhì)量事故返工等。

（九)對(duì)質(zhì)量事故和藥物不良反應(yīng)，應(yīng)及時(shí)向醫(yī)院藥事管理委員會(huì)、院長(zhǎng)和衛(wèi)生行政部門匯報(bào)。

二、藥品檢驗(yàn)步驟

藥品分析前，應(yīng)對(duì)其外形特征如：色、嗅、味、批號(hào)、包裝等情況進(jìn)行說細(xì)觀查。藥品檢驗(yàn)操作可作檢品采取、鑒別、檢查及含量測(cè)定等幾個(gè)步驟。

（一)檢品采取

1.檢品采取要隨機(jī)抽樣。

2.乳濁液、混懸液等藥品。要搖勻后采取。

3.散劑或顆粒狀固體的檢品，在采取前要經(jīng)過粉碎、縮分。

4.檢品取量。

（二)檢品最低取樣量，取決于下列條件：

1.顆粒愈大，最低取樣量應(yīng)愈大。

2.藥品均勻度愈差，最低取樣量應(yīng)愈大。

3.分析要求準(zhǔn)確愈高，允許誤差愈小，最低取樣量應(yīng)愈大。

（三)鑒別

1.感官檢查檢查外形特征如色、臭、昧等。

2.物理常數(shù)測(cè)定及光諳分析如比重、折光率、比旋度及紫外、紅外光譜分析等。

3.化學(xué)特性試驗(yàn)是根據(jù)檢品化學(xué)反結(jié)構(gòu)特征與試劑產(chǎn)生反應(yīng)，以示鑒別。常采用的方法有：試管法、點(diǎn)滴反應(yīng)、顯微結(jié)晶反應(yīng)、及熒光反應(yīng)法等。

(四)檢查

一般檢查其氯化物、硫酸鹽、鐵鹽、重金屬、砷鹽、水分、鞣質(zhì)、草酸鹽及蛋白質(zhì)等。常用的制劑則可按不同劑型做規(guī)定項(xiàng)目的檢查。

(五)含量測(cè)定

藥品經(jīng)鑒別及檢查后，方可按各有關(guān)項(xiàng)下規(guī)定的方法做含量測(cè)定。

(六)注意事項(xiàng)

1.檢驗(yàn)人員操作時(shí)須謹(jǐn)慎仔細(xì)，并隨時(shí)詳細(xì)、真實(shí)而整潔地做好檢驗(yàn)記錄。

2.記錄的內(nèi)容可按不同需要而定，一般包括：檢品名稱、規(guī)格、制造日期、批號(hào)，檢驗(yàn)?zāi)康�、送檢數(shù)量，包裝。并記錄檢驗(yàn)方法，檢驗(yàn)者校對(duì)者等項(xiàng)。

3.檢驗(yàn)人員每當(dāng)檢驗(yàn)完畢，要經(jīng)詳細(xì)校對(duì)，填寫檢驗(yàn)報(bào)告。并注明“可供藥用”，“可供注射用”或、“檢驗(yàn)不合格”等字樣。

報(bào)告單需有檢驗(yàn)者，校對(duì)者的簽署，文字均應(yīng)書定清晰不得涂改。

三、藥品的一般鑒別試驗(yàn)

（一)鉀鹽

（1)取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無色炎焰中燃燒，火焰即顯紫色。但有少量鈉混合時(shí)，須隔藍(lán)色玻璃透視方能辨認(rèn)。

2K⁺＋[PtCI₆]^2-→K₂PtCI₆

(2)取供試品溶液，加亞硝酸鈷鈉試液與醋酸，即發(fā)生黃色沉淀。

2K⁺＋Na⁺＋[Co（NO₂)₆]^3-→K₂Na[C（NO₂)₆]↓（黃色)

該反應(yīng)在中性或微酸性溶液中進(jìn)行，因而堿和酸均能分解試劑中的[Co（NO₂)₆]^－3離子，妨礙鑒定。

在堿性中：

[Co（NO₂)₆]^3-＋3OH^－→Co（NH)₃↓＋6NO^－₂

在酸性中：

[Co（NO₂)₆]^3-＋6H^＋→Co+3NO↑+3NO₂↑+3H₂O

NH⁺₄能干擾反應(yīng)，NH的存在能與NH⁺₄[Co（NO₂)₆]作用，生成生成（NH₄)Na[Co（NO₂)₆]沉淀。在鑒定K前應(yīng)除NH（可用灼燒法除去)，I也有干擾作用（可在蒸發(fā)皿中加NHO₃蒸發(fā)至干而除去)。

(3)取供試品，加熱除去可能雜有的鹽，放冷后，加水溶解，再加深.1%四苯硼鈉溶液與醋權(quán)即生白色沉淀。

NaB（C₆H₅)₄＋K⁺→KB（C₄H₅)₆↓＋Na⁺

反應(yīng)條件須在酸笥（PH2－6.)中進(jìn)行。

（二)鈣鹽

（1)取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯磚紅色。Ca²⁺＋[PtCI₆]^2-→CaPtCI₆

（2)取供試品的中性或堿性溶液，加草酸銨試液，即發(fā)白色沉淀；分離，所得的沉不溶于醋酸，但溶于酸。

Ca²⁺＋（NH₄)₂C₂O₄→CaC₂O₄↓(白色)＋2NH₄^＋

CaC₂O₄＋2HCI→CaCI₂＋HC₂O₄

（三)鈉鹽

取鉑絲，用鹽權(quán)濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。

s 2Na⁺＋[PtCI₆]^2-→Na₂PtCI₆

取供試品的中性溶液，加醋酸鈾鋅試液，即發(fā)生黃色沉淀。

Na⁺+Zn(C₂H₃O₂)₂+3UO₂(C₂H₃O₂)₂+CH₃COOH+9HO₂→NaZn(UO₂)₃(CH₃COO^-)₉·9H₂O↓9(黃色＋H^＋（醋酸鈾酰鋅鈉)

（若為鈉鹽之稀溶液，宜在水浴上濃的后再檢查，如氯化鈉注射液)。

（四)鐵鹽

1.亞鐵鹽（二價(jià)鐵鹽)

(1)取供試品溶液，加鐵氰化鉀試液，即發(fā)生深藍(lán)色沉淀。分離,沉淀在稀鹽中不溶，但氫氧化鈉試液，即分解成色棕色沉淀。

(2)取供試品溶液，加強(qiáng)團(tuán)結(jié)％鄰二氮菲的乙醇溶液數(shù)滴，即顯桔紅色。

鐵鹽（三價(jià)鐵鹽)

取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即發(fā)生深藍(lán)色沉淀，分離，沉離，沉淀在稀鹽酸不溶，但加氫氧化鈉試液，即分解成棕色沉淀。

4Fe³⁺＋3K₄Fe（CN)₆→Fe₄[F(CN)₆]₃↓（深藍(lán)色)＋12K^＋

Fe₄[Fe(CN)₆]₃+12N₂OH→3Na₄Fe(CN)₃+4Fe(OH)₃↓

(2) 取供試品溶液，加硫氰酸銨試液，即成血紅色。

Fe³⁺＋NH₄SCN→Fe（SCN)^2＋（血紅色)

（五)銨鹽

（1)取供試品，加過量的氫氧化鈉試液后，加熱，即分解，發(fā)出氨臭，遇顯潤(rùn)的紅色石蕊試紙，能使變藍(lán)色，并能使硝酸亞汞試液濕潤(rùn)的濾紙變?yōu)楹谏��?/p>

（2)取供試品溶液，加堿性碘化汞鉀試液壓滴，即產(chǎn)生紅色沉淀。

（六)鋅鹽

（1)取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即發(fā)生白色沉淀，分離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。

3Zn²⁺＋2K₄[Fe(CN)₆]→K₂Zn[Fe(CN)₆]₂↓(白色)＋6K^＋

(2)取供試品溶液，以鴰硫酸酸化，加深.1%硫酸銅溶液1及硫氰酸汞銨度液數(shù)滴，即發(fā)生紫色沉淀，繼續(xù)滴加硫氰酸汞銨試液，沉淀由紫色變?yōu)榫G色。

　Zn²⁺與Cu²⁺同時(shí)存在，則Zn²⁺能促使Cu²⁺的反應(yīng)立即共同沉淀出來。隨著Zn²⁺與Cu²⁺的濃度不同，沉淀顯淺紫色、深紫色至綠色。

（七)鎂鹽

（1)取供試品溶液，加碳酸銨試液，即發(fā)生白色沉淀，滴化氯化銨試液，沉淀溶解，再加磷酸氫二鈉試液，振搖，即發(fā)成白色沉淀。分離，沉淀在氨試液中不溶。

Mg²⁺＋（NH₄)₂CO₃→MgCO₃↓（白色)＋2NH₄⁺

Mg CO₃2NH₄CI→MgCL₂+(NH₄)CO₃→2NH₃↑+H₂O+CO₂↑

MgCL₂+Na₂HPO₄+NH₄CI→MgNH₄PO₄↓(白色)+2NaCI+HCI

（2)取供試品溶液,咖氫氧化鈉試液，即發(fā)生白色沉淀，分離，沉淀分成兩聳，一份加過量氫氧化鈉試液，沉淀不溶；另一份中加碘試液，沉淀顯紅棕色。

Mg²⁺＋2NaOH→Mg（OH)₂↓（白色)＋2Na⁺

(3)取供試品溶液2滴，加氫氧化鈉試液1滴，然后加對(duì)硝基苯偶氮間苯二酚試液（鎂試液)數(shù)滴，顯天藍(lán)色沉淀所生成的沉淀，溶于氯化銨試液中。

Mg²⁺＋2NaOH→Mg（OH)₂↓＋2Na⁺

該反應(yīng)系一種有機(jī)染料吸附Mg（OH)₂↓而產(chǎn)生的沉。如下溶液過酸，呈黃色，可再滴加適量的氫氧化鈉試液。

Mg²⁺（OH)₂＋2NH₄CI→MgCI₂+2NH₃↑+2H₂O

(八)鋇鹽

(1)取鉑絲，用鹽酸濕潤(rùn)后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯黃綠色，自綠色玻璃中透視，火焰顯藍(lán)色。

(2)取供試品溶液，加稀硫酸，即發(fā)生白色沉淀，分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。

Ba⁴＋H₂SO₄→BaSO₄↓＋2H^＋

(3)與硫酸及高錳酸鉀反應(yīng) 取供試品溶液1滴，加高錳酸試液及2N硫酸溶液各1滴生成紫色沉淀，加熱2－3分鐘，再加過氧化氫溶液1滴，紫色不褪。

Ba⁴與SO₄^＋反應(yīng)生成BaSO₄白色沉淀，但在KMnO₄存在時(shí)即生成紫色沉淀。如KMnO₄換以NaMnO₄則BaSO₄不染色。由于K^＋與Ba^2＋的離子半徑（1.33A和藹.35A)差不多，K^－誘導(dǎo)MnO₄^－進(jìn)入BaSO₄晶格形成混晶而成紫色。

（九)銀鹽

(1)取供品溶液，加稀鹽酸，即后成白色凝乳狀沉淀。分離，沉淀能在氨試液中溶解而形成[Ag（NH₃)₂]⁺絡(luò)離子，繼加硝酸，沉淀復(fù)生成。

Ag^＋＋HCI→Ｈ⁺＋AgCI↓（白色)

(2)取供品溶液，加鉻酸鉀試液，即生成磚紅色沉淀。分離，沉淀能在硝酸中溶解。

2Ag^＋＋K₂CrO₄→Ag₂CrO↓+2K⁺

Ag₂CrSO₄＋2HNO₃→2AgNO₃+H₂CrO₄↓

(十)銅鹽

(1)取供試品溶液,滴加氨度,即生成淡藍(lán)色沉淀物, 再加守量的氨試液,沉淀即溶解,生成深藍(lán)色溶液。

2CuSO₄+2OH_-→Cu(OH)₂SO₄↓+SO₄^2-

(藍(lán)色堿式銅鹽)

Cu(OH)₂SO₄+8NH₃→2[Cu(NH₃)₄]²⁺+SO₄^2-+2OH

(深藍(lán)色銅銨絡(luò)離子)

（2)取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即后成紅棕色沉淀物，沉淀不溶于稀酸及氨水中，但溶于氨氯化銨緩沖溶液中，生成藍(lán)色的[Cu(NH₃)₄]²⁺與堿作用被分解成CU(OH)₂沉淀。

3Cu²＋2K₄[Fe(CN)₆]→K₂{Cu₃[Fe(CN)₆]₂}↓+6K⁺

K₂{Cu₃[Fe(CN)₆]₂}+12NH₃⁺→3[Cu(NH₃)₄]²⁺+2[Fe(CN)₆]^4-

+2K⁺(藍(lán)色)

K{Cu₃[Fe(CN)₆]₂}+6OH^-→3Cu(OH)₂↓+2[Fe(CN)₆]^4-+2K⁺

通常反應(yīng)在醋酸酸性中進(jìn)行。

（3)取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即產(chǎn)生淡藍(lán)色沉淀，煮沸變?yōu)樽睾谏��?/p>

Cu²⁺＋2NaOH→Cu（OH)₂↓＋2Na⁺

Cu(OH)₂→C0↓+H₂O

△

(十一)鉍鹽

（1)取供試品溶液，加碘化鉀試液，即生成紅棕色或暗棕色沉淀物，分離，沉淀能溶解于過量的碘化鉀試液中，成為黃棕色的溶液。加蒸餾水稀釋可又發(fā)生橙色沉淀。

Bi³⁺＋3KI→BiI₃↓＋3K^＋

Bi³⁺＋KI→KbiI₄

繼續(xù)加蒸餾水稀釋，絡(luò)合鹽即分解，先形成碘化鉍而生成橙色的氧碘化鉍沉淀物。

KbiI₄+Ho →BiOI↓+2HI+KI

如Bi³⁺濃度較小時(shí)，此步反應(yīng)現(xiàn)象不太明顯。

（2)取供試品溶液，加稀硫酸酸化，加10％硫脲溶液，即呈深黃色。

硫脲與多數(shù)金屬離子有顏色反應(yīng)，如Bi³⁺對(duì)特別敏銳（1μg)，絡(luò)合物的顏色，視組成不同而異。

[Bi³⁺:CS(NH₂)₂:1:1黃褐色;1:2黃色;1:3:黃褐色]。如

BiCI₃＋CS（NH₂)₂→Bi[CS（NH₂)₂]CI₃

(黃色絡(luò)合物)

此反應(yīng)亦可用于鉍的比色測(cè)定。

（3)取供試呂溶液，通硫化氫氣，即發(fā)生棕黑色沉淀，能在熱硝酸中溶解，但在氫氧化鈉、稀鹽酸或硫化液中均不溶。

Bi³⁺＋3HS→Bi₂S₃↓＋6H^＋

Bi₂S₃＋6HCI→2 BiCI₃＋3H₂S↑

（十二)銻鹽

（1)取供試品溶液，加稀鹽酸成酸性后，加水至恰有白色混濁發(fā)生，加熱，趁熱加入硫代硫酸鈉試液，即后成橙紅色沉淀。

2Sb³⁺＋3S₂O₃^2-→4SO₂↑＋Sb₂OS₂↓

(橙紅色硫氧化銻)

（2)取供試品溶液，加衡鹽酸成酸性后，通硫化氫氣，即生成橙色沉淀物。分離，沉淀在硫化銨度液或硫化鈉試液中溶解。

2Sb³⁺＋3H₂S→Sb₂S₃↓+6H⁺

(橙色)

2Sb⁵⁺＋5H₂S→Sb₂S₅↓+10H⁺

(橙色)

Sb₂S₃+3(NH₄)₂S→2(NH₄)₃SbS₃

Sb₂S₅+3(NH₄)₂S→2(NH₄)₃SbS₄

（十三)鋁鹽

（1)取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即了生白色膠狀沉淀。分離，沉淀分成二份，一份中加入過量的氫化鈉試液；加一份中加入稀鹽酸沉淀均即溶解。

AI³⁺+3OH^-→AI(OH)₃↓(白色)

（2)取供試品溶液，加氨試液至生成白色膠狀沉淀，滴加0.1%茜素磺酸鈉溶液數(shù)滴，沉淀即顯櫻紅色。

AI³⁺+3OH^-→AI(OH)₃↓

注：試劑茜素磺酸鈉（Alizarihn-S)化學(xué)名為1，2－二羥基蒽醌磺酸鈉（1，2-dihydroxy-anlhraquinone)。

（3)取供試品溶液，加硫化鈉試液，即后成白色膠狀沉淀，分離，沉淀在過量的硫化試液中溶解。

2AI³⁺＋3Na₂S＋6H₂O→2AI（OH)₃↓＋3H₂S↑＋6Na⁺

2AI(OH)₃+Na₂S→2Na(AIO₂)+H₂S↑+2H₂O

（十四)汞鹽

亞汞鹽（一價(jià)汞鹽)

（1)取供試品，加氨試液或氫氧化鈉試液，即變黑色。

Hg₂(NO₃)₂+2NH₄OH→HgNH₂NO₃↓+Hg↓+NH₄NO₃+H₂O

Hg₂(NO₃)₂+2NaOH→Hg(OH)₂↓+2NaNO₃

Hg₂(OH)₂→Hg₂O↓+H₂O

（2)取供試品，加碘化鉀試液振搖，即發(fā)生黃綠色沉淀，瞬即變?yōu)榛揖G色，并逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榛液谏�，灰綠色沉淀在過量碘化鉀試液中溶解。

Hg₂（NO₃)₂＋2KI→Hg₂I₂↓（黃綠色)＋2KNO₃

Hg₂I₂＋2KI→Hg₍₎↓（黑色)＋K[HgI₂](溶解)

（3)取供試品溶液，加鹽酸，即產(chǎn)生白色沉淀，在水中不溶，加氨試液即變黑色。

Hg₂²⁺＋2HCI→Hg₂CL₂↓＋2H^＋

Hg₂CL₂+2NH₃→Hg(NH)CI↓+Hg↓NH₄CI

汞鹽（二價(jià)汞鹽)

（1)取供試品溶液，加氫氧化鈉試液，即發(fā)生黃色沉淀。

Hg(NO₃)₂+2NaOH→HgO↓(黃色)+2NaNO₃+H₂O

（2)取供試品的中性溶液，加碘化鉀試液，即發(fā)生猩紅色沉淀，能在量過的碘化鉀試液中溶解。再以氫氧化鈉試液堿化，加銨鹽即生成紅棕色的沉淀。

HgCI₂＋2KI→HgI₂↓（猩紅色)＋2KCI

HgI₂＋2KI(過量)→K[HgI₄]（溶解)↓

（3)取供試品溶液，通硫化氫氣，即產(chǎn)生黑色沉淀，分離沉淀的硫化銨試液或沸稀硝酸中不溶。

Hg^2＋＋H₂S→HgS↓＋2H+

（十五)鉛鹽

（1)取供試品溶液，加鹽酸，即產(chǎn)生白色沉淀，在沸水中溶解，但冷卻后結(jié)晶析出。

Pb²⁺＋2HCI→PbCI₂↓＋2H+

（2)取供試品溶液，加鉻酸鉀試液，即產(chǎn)生黃色沉淀，在氫氧化鈉試液或熱硝酸中易溶，在稀硝酸微深，在醋液中不溶。

Pb²⁺＋K₂CrO₄→PbCrO₄↓＋2H+

PbCrO₄+3NaOH→NaHPbO₂+Na₂CrO₄+H₂O

PbCrO₄+2HNO₃(熱)→Pb(NO₃)₂+H₂CrO₄

（3)取供試品溶液，加碘化鉀試液，即產(chǎn)生黃色沉淀，煮沸，即可溶解。放冷，則析有光的板狀結(jié)晶。

（十六)氯化物

取供試品溶液，加氨試液使成堿性，如有沉淀生成需過濾，濾液分成2份。

（1)加銷酸使成酸性，加硝酸銀試液，即發(fā)生白色凝乳狀沉淀，分離出沉淀能在氨試液中溶解，再加硝酸沉淀復(fù)生成。

CI^-＋AgNO₃→AgCI↓（白色)＋NO₃^－

AgCI+2NH₄OH→[Ag(NH₃)₂]CI(銀氨鉻離子而溶解)+2H₂O

[Ag(NH₃)₂]CI+2HNO₃→AgCI↓+2NH₄NO₃

（2)加稀硫酸使成酸性，加錳酸鉀結(jié)晶數(shù)粒，加熱，即放出氯氣，能使碘化鉀淀粉試紙顯藍(lán)色。

10CI^-＋2KMnO₄＋8H₂SO₄→5CI₂↑＋K₂SO₄＋2MnSO₄＋8H₂O＋5SO₄^2-

2KI+CI₂→2KCI+I₂

I₂+淀粉→顯藍(lán)色(吸附化合物)

（十七)溴化物

（1)取供試品溶液，加硝酸鉀試液，即產(chǎn)生淡黃色凝乳狀沉淀。分離，沉淀能在 試液中微溶，但幾乎不溶于硝酸中。

Br^-＋AgNO₃→AgBr↓（黃色)＋NO^－₃

AgBr+2NH₄OH→Ag(NH₃)₂⁺+Br^-＋2H₂O

在硝酸中幾乎不溶，與其他銀鹽的沉淀區(qū)分（AgS↓、AgCO₃↓等溶于硝酸中)。

（2)取供試品溶液，滴加氯試液，溴即游離，加氯仿振搖，氯仿層黃色或紅棕色。

2Br^-＋CI₂→Br＋2CI^-

Br^-＋氯仿→溶于氯仿層中，低濃度時(shí)呈黃色，高濃度時(shí)呈紅棕色。

（十八)磺化物

（1)取供試品溶液，加硝酸銀試液，即發(fā)生黃色凝乳狀沉淀。分離沉淀在硝酸或氨試液中均不溶解。

I^-＋AgNO₃→AgI↓（黃色)＋NO₃^－

(2)取供試品溶液，加少量的氯試液，碘即游離，如加氯仿振搖，氯仿層顯紫色，如加淀粉指示液，溶液顯藍(lán)色。

2I^－＋CI₂→I₂+2CI^-

I₂＋氯仿→溶于氯仿層中顯紫色

I₂＋淀粉→藍(lán)色（吸附化合物)

（3)取供試品溶液，加二氯化汞試液，即發(fā)生猩紅色沉淀。在過量的二氯化汞試液中微溶，在化碘鉀試液中易溶。

2I^－＋HgCI₂→HgI₂↓(猩紅色)+2CI^-

HgCI₂＋2KI→K₂[HgI₄](碘化汞鉀，溶解)

（十九)有機(jī)氟化物

取供試品約7 mg照氧瓶燃燒法（中國(guó)藥典77年版附錄74頁)進(jìn)行有機(jī)破壞，用水20ml與N／100氫氧化鈉液6.5ml為吸收液，俟燃燒完畢后，充分振搖，取吸收液2ml，加茜素氟藍(lán)試液0.5ml，再加含有12％醋酸鈉與6％醋酸溶液0.2ml，用水稀釋至4ml，加硝酸琰亞鈽液0.5ml，即顯藍(lán)紫色。

（二十)水楊酸鹽

（1)取供試品稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即顯紫色。

（2)取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色楊酸沉淀，分離，沉淀在醋酸銨試液中溶解。

（二十一)苯甲酸鹽

（1)取供試品的中性溶液，加三氯化鐵試液，即發(fā)生赭色沉淀，加稀鹽酸變?yōu)榘咨�沉淀�?/p>

（2)取供試品，置干燥試管中，加硫酸后，加熱，碳化，但析出苯甲酸在試管內(nèi)壁，凝結(jié)白色升華物。

（二十二)醋酸鹽

（1)取供試品溶液，加硫酸后，加熱，即分解發(fā)生醋酸的特臭。

（2)取供試品溶液，加硫酸和少量的乙醇，加熱即發(fā)生，醋酸乙酯的特殊臭氣。

2CH₃COO^－＋H₂SO₄→2CH₃COOH＋SO₄^2－

（3)取供試品溶液，加三氯鐵試液，應(yīng)顯深紅色，煮沸后產(chǎn)生紅棕色沉淀，再加鹽權(quán)，即分解成黃色溶液。

3CH₃COO^－＋FeCI₃→(CH₃COO^-)₃Fe(深紅色)+3CI^-

Fe(OH)₂（CH₃COO^－)＋3HCI→FeCI₃+2H₂O+CH₃COOH

(二十三)磷酸鹽

（1)取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液，即發(fā)生淺黃色沉淀，分離沉淀氨試液或稀硝酸中均易溶解（與Br^-產(chǎn)生的AgBr↓相區(qū)別)。

Po₄³+3AgNO₃→AgPO₄↓(淺黃色)+3NO₃^-

AgPO₄+6NH₄OH→3Ag(NH₃)₂OH(溶解)+H₃PO₄+3H₂O

AgPO₄+3HNO₃→3AgNO+H₃PO₄

(2)取供試品溶液，加化銨鎂試液，即發(fā)生白色結(jié)晶性沉淀。

HPO₄^2-＋MgCI＋NH₄OH→Mg（NH₄)PO₄↓（白色)＋2CI^－＋H₂O

（3)取供試品溶液，加鉬酸銨試液與硝酸后，加熱，即產(chǎn)生黃色沉淀。分離,沉淀能在氨試液中溶解。

在NH₄OH或NaOH堿性溶液中，反應(yīng)平衡向左方移動(dòng)，而使沉淀溶解。

（二十四)乳酸鹽

取供試品溶液，加硫酸使成酸性后，加高錳酸鉀試液，加熱，即發(fā)生乙醛的特臭。

（二十五)硫酸鹽

（1)取供試品溶液，加氯化鋇試液，即發(fā)生白色沉淀，分離，沉淀在鹽酸或硝酸中均不溶解。

SO₄^2-＋Ba²⁺→BaSO₄↓（)

在硝酸和鹽酸均不溶解，以與碳酸鹽區(qū)別，因?yàn)槿籼紮?quán)存在，則加入氯化鋇試液也能生成BaCO₃↓，但它溶解于鹽酸和硝酸中（生成氯化鋇和硝酸鋇，放出二氧化碳)。

（2)取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即發(fā)生白色沉淀，分離，沉淀在醋酸試液或氫氧化試液中溶解。

SO₄^2-+Pb(CH₃COO^-)₂→PbSO₄↓()+2CH₃COO^-

PbSO₄+2CH₃COONH₃→Pb(CH₃COO^-)₂+(NH₄)₂SO₄

（二十六)硝酸鹽

（1)取供試品溶液置試管中，加等量的硫酸，注意混合冷后，沿管壁加硫酸亞鐵試液，使成兩液層，接界面顯棕色。

NO₃^-+H₂SO₄→HSO₄^-+HNO₃

6FeSO₄＋2HNO₃＋3H₂SO₄→3Fe₂（SO₄)₃＋2NO＋4H₂O

FeSO₄＋NO→[Fe（NO)]SO₄(棕色)

（2)取供試品溶液，加硫酸與銅絲或銅屑加熱，即發(fā)生紅棕色的蒸氣。

（二十七)亞硝酸鹽

（1)取供試品溶液，加小量醋酸， 再加硫酸亞鐵試液，即顯深棕色。

NO₂^－＋CH₃COOH→CH₃COO^－＋HNO₂

3HNO₂→H₂O＋HNO₃＋2NO

FeSO₄＋NO→[Fe(ON)]SO₄(深棕色)

（2)取供試品溶液，加稀硫酸，碘化鉀試液與淀粉指示液的混合液數(shù)滴，即顯藍(lán)色。

2NHO₂^－+H₂SO₄→2HNO₂+SO₄^-

2HNO₂＋2KI＋H₂SO₄→I₂＋K₂SO₄＋2NO＋H₂O

（3)取供試品溶液，加稀硫酸使成酸性后，加入高錳酸鉀試液數(shù)滴，顏色即消退。

3NO₂⁺＋KMnO₄＋2H⁺→Mn（NO₃)₂＋KNO₃＋H₂O

（二十八)硼酸鹽

（1)取供試品溶液，加鹽酸使成酸性后，能使姜黃試紙變成棕紅色，放置干燥，顏色即變深，用氨試液濕潤(rùn)，即變?yōu)榫G黑色。

B₄O₇^2-+2HCI+5H₂O→4H₃BO₃+2CI^-

姜黃素

（2)取供試品，加硫酸，混合后，加甲醇，點(diǎn)火燃燒，即發(fā)生過緣帶綠色的火焰。

B₄O₇^2-+H₂SO₄+5H₂O→4H₃BO₃+SO₄^2－

H₃BO₃＋3CH₃OH→B（OCH₃)₃＋3H₂O

（1)取供試品溶液，加稀酸，即泡沸，發(fā)生二氧化碳?xì)�，此氣通入氫氧化鈣試液中，即發(fā)生白色沉淀。

CO₃^2－+2H^＋→H₂CO₃→H₂O＋CO₂↑

HCO₃^2－+H^＋→H₂CO₃→H₂O＋CO₂↑

CO₂＋Ca（OH)₂→CaCO₃↓（白色)＋H₂O

（2)取供試品溶液，加硫酸鎂試液，如為碳酸鹽溶液，即發(fā)生白色沉淀,如為碳酸氫鹽溶液，須煮沸，始發(fā)白色沉淀。

（3)取供試品溶液，加酚酞指示液，如為碳酸鹽溶液，即顯深紅色，如為碳酸氫鹽溶液，不變色或僅顯微紅色。

（三十)枸櫞酸鹽

（1)取供試品溶液，加稀硫酸1滴，加熱至沸，加高錳酸鉀試液數(shù)滴，振搖，紫色即消失，加硫酸汞試液1滴，發(fā)生白色沉淀。

（2)取供試品的中性溶液，加過量的氯化鈣試液，冷時(shí)無變化，煮沸，即產(chǎn)生白色的顆粒的性沉淀，能在醋酸或稀酸中溶解，但在氫氧化鈉中不溶。

（3)取供試品的的中性溶液，加過量的硝酸銀試液，即產(chǎn)生白色沉淀，；能中硝酸或氨試液中溶解，取氧性溶液置試管中，加熱，管壁不顯銀鏡。

（三十一)亞砷酸鹽

（1)取供試品的中性溶液，加硝酸銀試液，即發(fā)生黃沉淀，能在氯試液或稀硝酸中溶解。

AsO₃³＋3AgNO₃→Ag₃AsO₃↓（黃色)＋3NO₃^－

Ag₃AgO₃+6NH₄ON→3Ag(NH₃)₂OH(溶解)+3H₃AsO₃+3H₂O

Ag₃AgO₃+3HO₃→3AgNO₃+H₃AsO₃

沉淀在氨試液或稀硝酸中溶解，而與產(chǎn)生的溴化銀、碘化銀黃色的沉淀所區(qū)別。

（2)取供試品的中性溶液，加硫酸銅試液。即產(chǎn)生綠色沉淀，再加氫氧化鈉試液，煮沸，沉淀變?yōu)榧t色。

2AsO₃^3-+3CuSO₄→Cu₃（AsO₃)₂↓()+3SO₄^2-

Cu₃(AsO₃)₂+6NaOH→3Cu(OH)₂+2Na₃AsO₃

(三十二)砷酸鹽

（1)取供試品1滴，加硝酸銀試液1滴，應(yīng)發(fā)生紅棕色的沉淀，能溶于氨試液中。

AsO₃^3-+3AgNO₃→Ag₃AsO₄↓+3NO₃^-

Ag₃AsO₄+6NH₄OH→3Ag(NH₃)₂OH+H₃AsO₄+3H₂O

(2)取供試品1滴，加鹽酸1滴，加碘化鉀試液，1滴，應(yīng)析出游離碘。

AsO₃^3-+2HCI+2KI→I₂+2KCI+AsO₃²⁺+H₂O

（三十三)硫代硫酸鹽

（1)取供試品溶液，加鹽酸，即產(chǎn)生白色沉淀，迅速又變成黃色并發(fā)出二氧化硫的特殊剌激性臭氣。

(2) 取供試品溶液，加三氯化鐵試液，即顯紫堇色，振搖后即消褪。

SO₂2₃^2-＋FCI→[Fe(S₂O₃)₂]^-()+3CI^-

[Fe(S₂O₃)₂]^-+CI^-+FeCI₃→SO₂2₆^2-+2FeCI₂

(3) 取供試品溶液，加醋酸鉛試液，即產(chǎn)生白色沉淀，如再加過量醋酸鉛試液，即溶解，如煮沸，沉淀變黑色。

SO₂2₃^2-＋（CH₃COO^－)₂Pb→PbS₂O₃↓（紫堇色)＋2CH₃OO^－

PbS₂O₃+H₂O→PsS0(白色)↓

（三十四)亞硫酸鹽或亞硫酸氫鹽

（1)取供試品溶液，加鹽酸，即發(fā)生二氧化硫的氣體，有剌激性特臭，并能使?jié)櫇竦南跛醽喒�試紙變成黑色�?/p>

Hg₂（NO₃)₂＋SO₂＋2H₂O→2Hg↓+2HNO₃+H₄SO₄

(2) 取供試品溶液，滴加碘試液，碘的顏色即消褪。

SO₃^2-+I₂+H₂O→SO₄^2-+2HI

HSO₃^-+I₂+2H₂O→2H₂SO₄+2HI

（三十五)酒石酸鹽

（1)供試品的中性溶液，置試管中，加硝酸銀試液數(shù)滴，即發(fā)生白色沉淀，用少量氨試液使沉淀溶解后，將試管置水浴中，銀即游離，附在試管內(nèi)形成銀鏡。

（2)供試品溶液，加醋酸呈酸性后，加硫酸亞鐵試液1滴，過氧化氫試液1滴，俟溶液褪色后，用氫氧化鈉試液堿化，溶液即顯紫色。

（三十六)哌生物堿類

供品約為10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，即得黃色的殘?jiān)�，放冷，加取乙醇�?a class="channel_keylink" href="http://zxtf.net.cn/pharm/2009/20090113073444_104424.shtml" target="_blank">氯化鉀試液3－3滴，即濕深紫色。

（三十七)芳香第一胺類

取供試品約5mg，加稀鹽酸1ml，必要時(shí)緩緩煮沸使溶解，放冷，加M／10亞硝酸鈉液數(shù)滴，滴加堿性β－萘酚試液數(shù)滴視供試品不同，發(fā)生由橙黃到猩紅色沉淀。如普魯卡因。

普魯卡因，苯佐卡因及磺胺類藥物均呈此反應(yīng)。

（三十八)苯酚（酚羥基反應(yīng))

（1)取供試品溶液1滴，加三氯化鐵試液2滴，呈紫堇色。

（2)取供試品1滴，加溴試液，生成黃色白色沉淀。

根據(jù)不同的酚羥基物質(zhì)呈現(xiàn)藍(lán)色、綠色、紫色等。腎上腺素、嗎啡、雷瑣辛及水億酸鹽等呈此反應(yīng)。

（三十九)玫瑰藥青素（Rosecranine)

取供試品溶液，加硫酸混合后，加甲醇，點(diǎn)火燃燒，即發(fā)生邊緣帶綠色的火焰。

B₄O₇^2－＋H₂SO₄＋5H₂O→4H₃BO₃＋SO₄^2－

H₃BO₃＋3CH₃OH→（CH₃)₃BO₃＋3H₂O

（四十)丙二酰脲類

（1)取供試品約0.1g加碳酸鈉試液1ml與水10ml，振搖2分鐘，濾過，濾液中逐漸滴加入硝酸銀試液，即發(fā)生白色沉淀，振搖，沉淀溶解，繼續(xù)滴加過量的硝銀試液，沉淀不再溶解。

(2)丙二酰類分子中含有一CONHCONHCO－的結(jié)構(gòu)，與銅鹽作用能產(chǎn)生類似雙縮脲的顏角反應(yīng)，與吡啶和硫酸銅溶液作用，顯紫色（ZW－ikker反應(yīng))。

（四十一)乙醇基（C₂H₅O－)及甲基酮（CH₃CO－)

取供試品溶液，加入碘試液及氫氧化鉀試液，稍加溫后，即生成特殊臭的碘仿，量大時(shí)可生成黃色的碘仿沉淀。

C₂H₅OH＋4I₂＋6KOH→CHI₃↓＋5DI＋HCOOK＋5H₂O

CH₃·CO－R＋3I₂＋4KOH→CHI₃↓＋RCOOK＋3KI＋3H₂O

乙醇、苯佐卡因、優(yōu)奎寧，普卡因狄奧寧等均呈此反應(yīng)。

（四十二)乙�；�（CH₃COO-R)

取供試品溶液，加乙醇2～3滴及硫酸2ml，加熱，即發(fā)生乙酸乙酯的香氣。

乙酰胂胺、乙酰唑胺及冰醋酸等均呈此反應(yīng)。

（四十三)生物堿沉淀反應(yīng)。

取供試品加水（或酸性水溶液)溶解后，滴加碘一碘化鉀試液或碘化鉀試液，即形成沉淀。生物堿及季銨等均呈此反應(yīng)；如咖啡因，用鹽酸酸化，加碘化鉍鉀試液，生成棕紅色沉淀。

BH＋KbiI₄→BH·BiI₄

而可待因的沉淀級(jí)成為（BH)(BiI₄)I₂

（四十四)鹵素化合物的反應(yīng)

取銅片于無色的火焰中，加熱后放冷，蘸取供試品少許，再置無色火焰中燃燒，即顯綠色火焰。

一溴樟腦及水合氯醛等鹵素化合物均呈此反應(yīng)（極為靈敏)。

（四十五)還原糖反應(yīng)

取堿性酒石酸銅試液，加放供試品，緩緩加熱，即生成氧化亞銅的紅色沉淀。

CuSO₄＋2NaOH→Cu（OH)₂＋Na₂SO₄

　葡萄糖、果糖及水解邱的乳糖和丁均呈此反應(yīng)。其它如維生素C及含有20一酮一21羥基甾體(如化潑尼松、氟美松、氟氫可的松及膚因松等)，因其具有還原性，亦有此反應(yīng)。

（四十六)氨基酸、肽類、蛋白質(zhì)紙層析呈色反應(yīng)。

用0.2％茚三酮乙醇溶液鑒別，反應(yīng)靈敏，層析濾紙等不宜用手指多接觸，亦不宜與氨氣接觸，否則紙背呈紅色。

茚三酮不僅與α氨基酸作用，也與某些β氨基酸和伯、仲脂肪胺等作用，生成相似的有色物質(zhì)。對(duì)脂肪族叔胺或芳無作用。對(duì)多肽也能顯色，但肽越大度越低。吲哚醌試劑也有相似作用，其靈敏度不及茚三酮高。但對(duì)不同氨基顯不同色調(diào)。

茚三酮反應(yīng)原理：對(duì)α氨基酸先起氧化，脫氨化應(yīng)之分解成氨，二氧化碳和醛，茚三酮本身被還原，再與生成的氨縮合成紫色物質(zhì)。

吲哚醌與α氨基酸反應(yīng)：對(duì)輔氨酸、組氨酸呈藍(lán)色；對(duì)色氨酸、甲硫氨基酸呈綠色；對(duì)亮氨酸、絲氨酸呈紅色等。對(duì)一些小肽也能顯色，但肽越大靈敏芳越低，色差也小，接近黃色。

（四十七)甾體類、三萜類

甾體類、三萜類的顯色劑，均屬酸類，其中有強(qiáng)酸如硫酸、磷酸、氯磺酸高氯酸、三氟乙酸；中等強(qiáng)度的酸如三氯乙酸，也有三氯化銻、二氯化鋅等Lewis氏酸。

揮發(fā)油屬萜類，若油斑未消失前，噴5％香藍(lán)醛的濃鹽酸試液后，可呈現(xiàn)黃、紅、藍(lán)等色。油脂無此反應(yīng)。

四、中草藥化學(xué)成分一般鑒別方法

中草藥主要來源于植物。植物的化學(xué)成分較復(fù)雜，有些成分是植物所共有的，如纖維素、蛋白質(zhì)、油脂、淀粉、糖類、色素等。有些成分僅是某些植物所特有的，如生物堿類、甙類、揮發(fā)油、有機(jī)酸、鞣質(zhì)等。

各類化學(xué)成分均具有一定的特性，一般可由藥材的外觀、色、嗅、味等作為初步檢查判斷的手段之一。如藥材樣品折斷后，斷面不油點(diǎn)或擠壓后有油跡者，多含油脂或揮發(fā)油；有粉層的多含淀粉、糖類；嗅之有特殊氣味者，大多含有揮發(fā)油、香豆精、內(nèi)酯；有甜奈者多含糖類；味若者大多含生物堿、甙類、苦味質(zhì)；味酸者含有有機(jī)酸；味澀者多含有鞣質(zhì)等等。

中草藥所含化學(xué)成分均為多類的混合物，分析時(shí)常常互相干擾，不易得到正確結(jié)果。因此需根據(jù)中草藥所含各種化學(xué)成分的溶解度、酸堿度、極性等理化性質(zhì)，再用各類成分的鑒別反應(yīng)加以鑒別。

（一)鑒別注意事項(xiàng)

1．根據(jù)各灰成分不同性質(zhì)，選用適宜的溶劑提取，以保證等成分能被提取出來。

2．檢品提取液的濃度應(yīng)足以達(dá)到各該反應(yīng)的靈敏度。

3．檢品提取液的酸堿度（pH)值應(yīng)不致影響鑒別反應(yīng)中所需要的pH值。相差甚大時(shí)應(yīng)事先調(diào)節(jié)。

4．提取液較深時(shí)，常易影響觀察鑒別反應(yīng)的效果，此時(shí)可適當(dāng)稀釋，或進(jìn)一步提純。

5．鑒別反應(yīng)時(shí)應(yīng)注意防止多類成分的相互干擾，以免出現(xiàn)假陽性，或顏色不正等情況。最好在化學(xué)鑒別的同時(shí)，做空白試驗(yàn)和對(duì)照試驗(yàn)（用已知含某類成分的中草藥或純品做陽性對(duì)照)。

6．在鑒別試驗(yàn)中，如果某一類成分的幾個(gè)鑒別反應(yīng)結(jié)果不一致時(shí)（即有的呈陽性反應(yīng)，有的呈陰性)則應(yīng)進(jìn)行全面分析。首先應(yīng)注意呈陽性反應(yīng)的試驗(yàn)是否屬于該類成分的專一反應(yīng)，否則應(yīng)檢查其他類成分能否產(chǎn)生該反應(yīng)，從多方面加以判斷。但也應(yīng)注意，某些反應(yīng)只能對(duì)某一類成分中的某個(gè)化學(xué)基團(tuán)呈性反應(yīng)，如檢查黃酮類的鹽酸――鎂粉試驗(yàn)，它只對(duì)黃酮類中的羥基黃酮類（黃酮醇類)反應(yīng)明顯，其余類的黃酮類則不甚明顯，但也不能輕易否定不是黃酮類，為了避免孤立和片面的下結(jié)論，一定要全面考慮綜合分析。

中草藥化學(xué)成分一般鑒別試驗(yàn)屯只是一個(gè)初步判斷，最后確證尚需進(jìn)一步提純，以鑒定后才能予以肯定。

（二)鑒別方法

蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸

（1)加熱或礦酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml于試管中，加熱至沸或加5％鹽酸，如發(fā)生混濁或有沉淀示含有水溶性蛋白質(zhì)。

（2)縮二脲試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加10％氧化鈉溶液2滴，充分搖勻，逐漸加入硫酸銅試液，隨加搖勻，注意觀察，如呈現(xiàn)紫色或紫紅色示可能含有蛋白質(zhì)和氨基酸。

凡蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)或兩個(gè)以上肽鍵（－CONH－)者均有此反應(yīng)，能在堿性溶液中與Cu²⁺生成仙絡(luò)合物，呈現(xiàn)一系列的顏色反應(yīng)，二肽呈藍(lán)色，三肽呈紫色，加肽以上呈紅色，肽鍵越多顏色越紅。

（3)茚三酮試驗(yàn)，取檢品的水溶液1ml，加入茚三酮試液2－3滴，加熱煮沸4－5分鐘，待其冷卻，呈現(xiàn)紅色棕色或藍(lán)紫色（蛋白質(zhì)、胨類、肽類及氨基酸)。

α氨基酸與茚三酮的水合作物作用，氨其酸氧化成醛、氨和二氧化碳，而茚三酮被還原成仲醇，與所后成的氨及另一分子茚三酮縮合生成有藍(lán)紫色的化合物。

【注】①茚三酮試劑主要是多肽和氨基酸的顯色劑，反應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。試劑溶液pH值以5－7為宜，必要時(shí)可加吡啶數(shù)滴或醋酸鈉調(diào)整。

②此反應(yīng)非常靈敏，但有個(gè)別氨基酸不能呈紫色，而呈黃色，如脯氨酸。

（4)氨基酸薄層層析檢出反應(yīng)：

①吸附劑：硅膠G。

②展開劑：（1)正丁醇：水（1：1)（2)正丁醇：醋酸：水（4：1：5)

③顯色劑：0.5％茚三酮丙酮溶液，噴霧后于110⁰烘箱放置5分鐘，顯藍(lán)紫允或紫色。

2．皂甙

（1)泡沫試驗(yàn)：取檢品的水溶液2ml于帶塞試管中，用力振搖3分鐘，即產(chǎn)生持久性蜂窩狀泡沫（維持10分鐘以上)，且泡沫量不少于液體體積的1／3。

【注】常用的增溶劑吐溫、司盤，振搖時(shí)均能產(chǎn)生持久性泡沫，要注意區(qū)別。

（2)溶血試驗(yàn)：取試管4支，分別加入濾液0.25、0.5、0.75 ml，然后依次分別加入生理鹽水2.25、2.0、1.75、1.5ml，使每一個(gè)試管中的溶液都成為2.5ml, 再將各試管加入2％的血細(xì)胞懸液2.5ml，振搖均勻后，同置于37⁰水浴或25－27⁰的室溫中注意觀察溶血情況，一般觀察3小時(shí)即可，或先滴紅細(xì)胞于顯微鏡下，然后滴加檢液看血細(xì)胞是否消失。如有溶血現(xiàn)象示正反應(yīng)。

【注】①鞣質(zhì)對(duì)血紅細(xì)胞有凝集作用，干擾溶血試驗(yàn)的觀察，應(yīng)事先除去（可用取勝酰胺粉吸附或用明膠沉淀)。

②檢液應(yīng)為中性溶液。

（3)醋酐濃硫酸試驗(yàn)（Liebrmann Burchard反應(yīng))取檢品的水溶液置蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘?jiān)�加入少量冰醋酸使溶解，再加入醋酐濃硫酸�?9：1)試液，呈現(xiàn)紅紫色并變成污色綠色（甾類、三萜類成分或皂甙)

（4)區(qū)別甾體皂甙和三萜皂甙：取帶塞試管兩支，各盛檢品的水溶解1 ml，1支加0.1N鹽酸溶液2ml，另一支加0.1N氫氧化鈉溶液2ml用力振搖1分鐘（需左右手交替振搖各半分鐘)，觀察兩管泡沫的多少，若兩管泡沫體積相同或酸管多，示含三萜式皂甙；若加堿管泡沫多于加酸管示含甾示含甾體皂甙。

三萜皂甙為酸性皂甙在酸性水溶液中形成較穩(wěn)定的泡沫；甾體皂甙為中性皂甙在堿笥溶液中能形成較穩(wěn)定的泡沫。

3．糖、多糖或甙類

（1)堿性酒石酸銅試液：取檢品的水溶液1－2ml（如為醇溶液須將醇蒸發(fā)除去)，加入堿笥酒石酸銅試液1ml，于沸水浴上加熱5分鐘，產(chǎn)生棕紅色或磚紅色氧化亞銅沉淀，示有還原糖。

還原糖能使二價(jià)銅鹽（藍(lán)色)還原成氧化亞銅，醛糖的醛基氧化成羧基：

【注】①如檢液呈酸性，應(yīng)先堿化。

②此反應(yīng)所產(chǎn)生的沉淀由于條件不同，其顏色也不同，質(zhì)點(diǎn)上的呈黃色，質(zhì)點(diǎn)大的呈紅色。有保持性膠體存在時(shí)，也常產(chǎn)生黃色沉淀。

③職樣品中含有其他醛、酮及還原較強(qiáng)的其他成分，或中劃藥制劑中附加的抗氧劑、；葡萄糖等均可顯陽性反應(yīng)。

（2)α萘酚試驗(yàn)（Molisch紫環(huán)反應(yīng))：取檢品的水溶液1ml，加5％萘酚試液數(shù)滴振搖后，沿管壁滴入5－6滴濃硫酸，使成兩液層，待2－3分鐘后，兩層液面出現(xiàn)紫紅色環(huán)（糖、多糖或甙類)。

多糖類遇濃硫酸被水解成單糖，單糖被濃硫酸脫水閉環(huán)，形成糠醛類化合物，在濃硫酸存在下與α萘酚發(fā)生酚醛縮合反應(yīng)，生成紫紅色縮合物。

【注】①甙的分子結(jié)構(gòu)中含有糖基，一般屬于單糖類，如葡萄糖，鼠李糖、半乳糖，但也有含二分子糖（雙糖)或多分子糖（多糖)。在上述反應(yīng)條件下，甙被水解成單糖，因此甙萘酚試驗(yàn)，系分子中糖部分的反應(yīng)。

②由于此反應(yīng)較為靈敏，如有微量濾紙纖維或中草藥粉末存在于溶液中，都能產(chǎn)生上述反應(yīng)。故濾過時(shí)應(yīng)加注意。

（3)多糖的確證試驗(yàn)：取檢品的水溶液5ml于水 蒸發(fā)至干，加入1ml蒸餾水，再加入乙醇5ml，如出現(xiàn)沉淀，濾過收集后用少量熱乙醇洗滌，再將沉淀物溶于3ml蒸餾水中，做下例試驗(yàn)。

①碘試驗(yàn)：取檢品的不溶液1ml，加碘試液1滴，觀察顏色變化，如呈藍(lán)黑色為地衣糖；紫黑色為糊精；藍(lán)色加熱消失，冷后藍(lán)色再現(xiàn)為淀粉。

②多糖水解：取檢品的水溶液1ml，加入稀鹽酸5滴，置沸水浴中加熱10－15分鐘，然后用10％氫氧化鈉液中和至中性，再加新配制的堿性酒石酸銅試淮4滴，另取檢液1ml，不加酸水解直接加入上述試液4滴，兩管同置水浴上煮沸5－6分鐘。如果水解后生成棕紅色常常物的量比未經(jīng)水解的多，則示有多糖。

多糖水解后產(chǎn)生單糖，利用單糖的還原性，使銅離子還原成氧化亞銅。

4．鞣質(zhì)及酚類

（1)三氯化鐵試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加三氯化鐵試液1－2滴，呈現(xiàn)綠色、污綠色、藍(lán)黑色或暗紫色（可水解鞣質(zhì)顯藍(lán)一藍(lán)黑色，縮合鞣顯綠色一污綠色)。

鞣質(zhì)均是多羥基酚的衍生物，即多元酚，能和三價(jià)鐵離子發(fā)生顏色反應(yīng)生成復(fù)雜的絡(luò)鹽。

【注】此反應(yīng)如遇有礦酸或有機(jī)酸、醋酸鹽等存在，能阻礙顏色的生成。硝基酚類對(duì)三氯化鐵試劑無明顯反應(yīng)。

（2)明膠試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加氯化鈉明溶液2－3滴，即生成白色沉淀物。

鞣質(zhì)有凝固蛋白的性能。

（3)溴試驗(yàn)：取檢品的水溶液1ml，加溴試液1－2滴，生成白色或沉淀物，示可能含有酚或兒茶酚鞣質(zhì)。

【注】過多的溴會(huì)阻礙鞣質(zhì)的沉淀，因此溴水不宜多加。

（4)香草醛一酸試驗(yàn)：取檢品的水溶液點(diǎn)于濾紙片上，干后，噴霧或滴加香草醛一鹽酸試液，呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)（多元酚類物質(zhì))。

（5)鞣質(zhì)、酚類薄層層析檢出反應(yīng)：

①吸附劑：聚酰胺；硅膠；硅膠；石膏：水（5：1：7)調(diào)成狀，涂成薄板，105⁰烘干45分鐘。

②展開劑：乙醇：醋酸（100：2)；正丁醇：乙酸乙酯：水（5：4：1)；苯：甲醇（95：5)。

③顯色劑：10％三氯化鐵溶液；1％三氯化鐵乙醇溶液與1％鐵氰化鉀水溶液（1：1)顯藍(lán)一紫色斑點(diǎn)。

5．黃酮及其甙類

（1)鹽酸一鎂（或鋅)粉試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，加放少量鎂粉（或鋅粉)，然后加濃鹽酸4－5滴，置沸水浴中加熱2－3分鐘，如出現(xiàn)紅色示有游離黃酮類或黃酮甙（以同法不加鎂或粉做一對(duì)照，如兩管都顯紅色則有花色素存在。如繼續(xù)加碳酸試液使成堿笥即變成紫色雙轉(zhuǎn)變?yōu)樗{(lán)色，即證明含花色素)。

黃酮類的乙醇溶液，在鹽酸存在的情況下，能被鎂粉還原，生成花色甙元而呈現(xiàn)紅色或紫色反應(yīng)（個(gè)別為淡黃色、橙色、紫色或藍(lán)色)。這是由于酮類化合物分子中含有一個(gè)堿性氧原子，致能溶于稀酸中被還原成帶四價(jià)的氧原子即鋅鹽。本法是鑒別黃酮類的一個(gè)反應(yīng)。但花色素本身在酸性下（不需加鎂粉)呈紅色，應(yīng)加以區(qū)別。

【注】①此反慶僅在化學(xué)結(jié)構(gòu)中，第三位上帶羥基的酮醇類顯色較明顯，而其它黃酮烷酮類均不甚明顯。因此試驗(yàn)呈陰性反慶是不能做出否定的結(jié)論，尚需結(jié)合其他實(shí)驗(yàn)再做結(jié)論。

②試驗(yàn)應(yīng)在醇中進(jìn)行，水分多會(huì)影響顏色的生成。此反慶較慢，有時(shí)需置水浴上加熱，以促使反應(yīng)的進(jìn)行。

（2)熒光試驗(yàn)：

①三氯化鋁試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上（干后再點(diǎn)1次，使其濃度庥中)，干后，噴霧1％三氯化鋁乙醇試液，在紫外光燈下觀察，呈現(xiàn)黃色、綠色、橙色等熒光為黃酮類；呈現(xiàn)天藍(lán)色或黃綠色；熒光，則為二氫黃酮類。這是區(qū)別二氫黃酮類化合物的一種鑒別反應(yīng)。

②硼酸丙酮枸櫞酸丙酮試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液1ml，在沸水浴上蒸干加入飽和硼酸丙酮溶液及10％枸櫞酸丙酮溶液各0.5ml，蒸去丙酮后，在紫外光燈下觀察，管內(nèi)呈現(xiàn)強(qiáng)烈的綠色熒光（黃酮或其甙類)。

（3)堿液試驗(yàn)：取檢品的乙醇溶液點(diǎn)于濾紙片上（干后，再點(diǎn)一次，使其溶液集中)，干后，噴1％碳酸鈉溶液或在氨蒸氣中熏幾分鐘，呈現(xiàn)亮黃、綠或橙黃色。如將氨氣熏過的濾紙露置空氣中，顏色逐漸裉去而變?yōu)樵�有的顏色（黃酮或其甙類)。

^*示有熒光^＊＊示在短波紫外線光下為黑色ViS.系可風(fēng)光U.V系紫外光

6．蒽醌及其甙類 取檢品的乙醇溶液10ml，蒸去乙醇，殘?jiān)��?％氫氧化鈉溶液2－3ml，在沸水中加15分鐘，冷后濾過，濾液加稀鹽酸酸化，加乙醚提取，取乙醚提取液做下列檢查：

（1)堿液試驗(yàn)：取上述乙醚溶液，加等量1％氫氧化鈉溶液，搖勻，水層呈現(xiàn)紅色，加入少許3％過氧化氫溶液，在沸水浴中加熱4分鐘，紅色不裉，當(dāng)加酸酸化后，紅色消失。加堿堿化后紅色又出現(xiàn)（蒽醌類化合物反應(yīng))。

1，8一二羥基蒽醌的酚羥基遇氫氧化鈉生成鈉鹽，而呈現(xiàn)紅色，遇酸顯黃色。

【注】蒽醌和二蒽酮與堿液不顯紅色，只呈黃色，但以氧化羥基蒽醌后遇堿即顯紅色。

（2)醋酸鎂試驗(yàn)：取上述醚溶液1ml，蒸去乙醚，殘?jiān)�加入乙�?ml溶解，加入1％醋酸鎂甲醇溶液3滴，顯紅色（如顯橙黃色可能為二氫蒽醌)。

羥基蒽醌類與醋酸鎂甲醇溶液反應(yīng)可顯橙、紅、藍(lán)、紫等色，產(chǎn)生這些顏色的必要投機(jī)倒把至少有一個(gè)α位羥基。加羥基的位置不同，產(chǎn)生的顏色也不同。一般在同一苯環(huán)上有兩個(gè)α羥基者顯紫紅色或藍(lán)色；如同一苯環(huán)在有兩個(gè)鄰位的羥基，一個(gè)α位，一個(gè)β位，顯紫色或紫鍇。其他α羥基蒽醌一般呈橙至紅色。因此這一顏色反應(yīng)僅可作蒽醌的檢只識(shí)用，而且還可初步判斷羥的基的位置。

【注】醋酸鎂試驗(yàn)亦可用濾紙斑點(diǎn)顯色法進(jìn)行。

（3)蒽醌薄微量檢出反應(yīng)：

①吸附劑：硅膠；中性氧化鋁（Ⅲ級(jí))；硅膠G濕法制板。

②展開劑：苯：醋酸（6：3)石油醚：丙酮：水（5：3：3：5)；苯甲酸酯：甲酸（74：24：1)。

③顯色劑；5％氫氧化鈉液（顯紅色)；1％醋酸鎂甲醇溶液（顯黃色)。

此外亦可在紫外燈光下觀察熒光。

7．強(qiáng)心甙

（1)3，5一二硝基苯甲酸試驗(yàn)（Kedde’s反應(yīng))：取檢品的乙醇溶液2ml，加3，5一一硝基苯甲酸試液3－4滴再加10％氫氧化鈉溶液2滴，呈現(xiàn)紅色或紫紅色（9為α、β不飽和內(nèi)酯環(huán)強(qiáng)心甙的反應(yīng))。

（2)堿性苦味酸試驗(yàn)：取檢品的醇溶液1ml，顯橙色或橙紅色（此反應(yīng)常在15分鐘后，顯色最明顯)。

（3)亞硝酰鐵氰化鈉試驗(yàn)（Legal反應(yīng))：取檢品的醇溶液1ml，蒸去溶劑，放冷后，加吡啶少許使殘?jiān)�溶解，�?.5%亞鐵試液4－6滴，搖勻，再加入10％氫氧化鈉1－2滴，即顯紅色并逐漸消失（為檢查強(qiáng)心甙元的反應(yīng))。

（4)三氯化鐵水醋酸試驗(yàn)（Keller反應(yīng))：取檢品的乙醇溶液2ml，蒸去溶劑，殘?jiān)��?.5%三氯化鐵冰醋酸溶液1ml，使溶解后，沿試管壁加入濃硫酸1ml，在兩液界面顯紅棕色環(huán)，繼則變?yōu)闇\綠、藍(lán)色，而冰醋酸層顯藍(lán)色，示含α去氧糖強(qiáng)心甙。

（5)醋酐一濃硫本試驗(yàn)（Liebirman Barchard 反應(yīng))：取檢品的乙醇溶液2 ml，置蒸發(fā)皿中，于水浴上蒸干，殘?jiān)�加冰醋�?ml使溶解，再加入醋酐一濃硫酸（19：1)數(shù)滴，呈現(xiàn)黃→紅→藍(lán)→紫→污綠色，并逐漸裉色。因顏色變化很快，須注意觀察（為檢查強(qiáng)心甙分子結(jié)構(gòu)中甾體母核的反應(yīng))。

【注】①試驗(yàn)1，2，3，的反應(yīng)，均系在較強(qiáng)的堿性條件下進(jìn)行，當(dāng)有蒽醌存在時(shí)，須先將檢液置水浴上蒸去乙醇，再加乙醚適量，用1％氫氧化鈉溶液反復(fù)萃除蒽醌（棄去紅色堿液)，然后將乙醚溶液于水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)�再用乙醇溶解后，供試�?yàn)用，以免干擾。

②試驗(yàn)4的反應(yīng)僅對(duì)游離的去氧糖和結(jié)合的甙呈正反應(yīng)。但當(dāng)α去氧糖與葡萄糖等其他糖結(jié)合的多，如不水解則為負(fù)反應(yīng)。

③上述鑒別反應(yīng)均呈陽性,可判斷為強(qiáng)心甙。

8．內(nèi)酯、香豆精及其甙類：取檢品的乙醇溶液10m1，加5％鹽酸溶液10，在沸水浴中熱15－20分鐘，冷后，加苯提取將苯提取液于水浴上蒸干（避火)，殘?jiān)�加適量乙醇溶解后，供做下列檢查：

（1)異羥肟酸鐵試驗(yàn)：取上檢液2ml，加鹽酸羥試液2滴，10％氫氧化鉀的甲醇溶液2滴，在水浴上微熱，冷卻，用稀鹽酸酸化，加入15三氯化鐵試劑液1－2滴，顯紫色苛橙紅色。

內(nèi)酯及香豆素類在堿性條件下，與羥反應(yīng)生成異羥肟酸，與鐵鹽絡(luò)合而顯色。

（2)內(nèi)酯試驗(yàn)：取上檢液2ml，加1％氫氯化鈉溶液2m1，在沸水浴中加熱3－5分鐘，如溶液較前澄明，加酸酸化后又變混濁為正反應(yīng)。

內(nèi)酯化合物在熱堿溶液中，開環(huán)成鹽而溶于水，酸化則重新閉環(huán)，而出內(nèi)酯化合物，溶液即變混濁。

（3)重氮化反應(yīng)：取上檢液1ml，加等體積3％碳酸鈉溶液，在沸水浴中加熱3－4分鐘，冷后，加入新配制的重氮化試劑1－2滴，即顯紅色。

（4)熒光反應(yīng)：取上檢液點(diǎn)于濾紙上（干后，再點(diǎn)1次，以集中濃度)，在紫外光燈下觀察，如為羥基香豆精應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色熒光，熏氨蒸氣后變?yōu)辄S綠色熒光。呋喃香豆精應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色或黃棕色的熒光。

9．樹脂類 取檢品的乙醇溶液1ml，加1－2％氫氧化鈉溶液2－3ml，顯渾濁或沉淀，在水浴上加3－5分鐘，溶液變清或沉淀減少，加酸酸化則又渾濁或沉淀，示含有酸性樹脂。如在上項(xiàng)反太中，當(dāng)加堿加熱后，溶液仍渾濁示含有中性樹脂。

因酸性樹脂能溶于堿液中，加熱后就成澄明液。中性樹脂則不溶于堿性溶液中，故溶液仍顯渾濁。

10．生物堿 取檢品的酸性乙醇溶液20ml，調(diào)節(jié)pH值至6－7，蒸發(fā)除去乙醇，殘?jiān)��?％鹽酸溶液4－5ml溶解，濾過，濾液供下列檢查：

（1)碘化鉍鉀試液1ml，加碘化鉍鉀試液1－2滴，生成黃色或橘紅色沉淀。

AIK＋BiI₃·KI→AIK·BiI₃·KI↓

（生物堿)（碘化鉍鉀)（桔紅色)

（2)碘化汞試驗(yàn)：取濾液1ml加碘化汞鉀試液1－2滴，生成白色淡黃色沉淀物。

AIK＋KI·HgI₂→AIK·KI·HgI₂↓

若在過量的試劑中其沉淀又復(fù)溶解。

（3)碘一碘化鉀試驗(yàn)：取濾液ml，加碘化一碘化鉀試液1－2滴，出現(xiàn)棕色沉淀或混濁。

（4)硅鎢酸試驗(yàn)：取濾液1m1，加硅鎢酸試液1－2滴，生成灰白色或淡黃色沉淀。加熱可使反應(yīng)靈敏。

（5)生物堿呈色反應(yīng)：

11．有機(jī)酸

（1)溴酚藍(lán)試驗(yàn)：取檢品的酸性乙醇溶液點(diǎn)于濾紙，干后，噴霧0.1％溴酚藍(lán)乙醇溶液（70％乙醇)，立即在藍(lán)色背景中顯黃色斑點(diǎn)。如不明顯，可噴霧氨水，然后暴露在鹽酸氣體中，背景逐漸由藍(lán)色變?yōu)辄S色，而有機(jī)酸的斑點(diǎn)仍然為藍(lán)色。

（2)酸堿度試驗(yàn)：取檢品液（水提取液)以pH試紙檢查，如試紙顏色指示pH在7以下，可能含有有機(jī)酸。

（3)紙層析檢出試驗(yàn)：見紙層析操作方法。

①支持劑：新華濾紙（中速)

②展開劑：正丁醇：醋酸：水（4：1：5)。

③顯色劑：0.15溴酚藍(lán)乙醇溶液（70％乙醇)。

結(jié)果：呈現(xiàn)藍(lán)色斑點(diǎn)。

12．揮發(fā)漬及油脂

（1)取檢品的乙醚溶液，置蒸發(fā)皿中，待溶劑揮發(fā)生，殘?jiān)鼮橛蜖钗铮�并有香氣或特異自氣，加熱，油狀物減少或消失示含揮發(fā)油。如無香氣，或加狀物不減少，可能為油脂，可于殘?jiān)�中加入少許無水硫酸鈉顆粒，直火加熱，如產(chǎn)生氣泡，并有剌激性特臭的濃白色氣體（丙烯醛)，示含油脂類化合物。

（2)取檢品的乙醚溶液，點(diǎn)在濾紙上，待溶劑揮發(fā)生，噴霧0.05%熒光素鈉溶液，再將濾紙下置碘蒸氣上，熏幾分鐘，產(chǎn)生黃或黃綠色斑點(diǎn)，背景為粉紅色示含揮發(fā)油。

（3)取檢品的乙醇溶液，置白瓷皿中，待溶劑揮發(fā)生，殘?jiān)�中�?％香草醛鹽酸液，顯黃色、紅、棕、藍(lán)、紫等顏色，示含揮發(fā)油。

（4)揮發(fā)油薄層微量檢出反應(yīng)：

①吸附劑：硅膠G（濕法制板)；中性氧化鋁：石膏：水（5：1：7)。

②展開劑：正已烷：乙酸乙酯（85：15)；石油醚：乙酸乙酯（85：15)。

③顯色劑：含5％香草醛的濃硫酸液（臨用新配)105⁰烘2－10分鐘；熒光照射；濃硫酸。

【注】香草醛化學(xué)名為3甲氧基4羥基苯甲醛。

五、熱原檢查法

本法系將一定劑量的供試品靜脈注入家兔體內(nèi)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)。觀察家兔休升高的情況，以判定供試品所含的熱原限度是否符合規(guī)定。

（一)供試用家兔供試用的家兔應(yīng)健康無傷 ，體重1.7－3.0kg，雌兔應(yīng)無孕。預(yù)測(cè)體溫前7天即應(yīng)用同一飼料飼養(yǎng)，在此期間內(nèi)，體重應(yīng)不減烴，精神、食欲、排泄等不得有異�，F(xiàn)象。未經(jīng)使用于熱原檢查家兔；或供試品判定為符合規(guī)定，但級(jí)仙升溫達(dá)0.6℃的家兔。或供試品判定為不符合規(guī)定，但其組內(nèi)家兔平均升溫未達(dá)0.8℃,且已休息2周以上的家兔；或3周內(nèi)不曾作用的家兔，均應(yīng)在檢查供試呂前3－7天內(nèi)預(yù)測(cè)體溫。進(jìn)行挑選。挑選試驗(yàn)的條件與檢查供試品時(shí)間相同，僅不注射藥液，每隔1小時(shí)測(cè)量體溫1次，共測(cè)4次。4次體溫均在38.0－39.6℃范圍內(nèi)，且最高最低體溫的差數(shù)不超過0.4℃的家兔，方可供第2次檢查用。如供試品判定為不符合規(guī)定，且其組內(nèi)家兔平均升溫達(dá)0.8℃或更高時(shí)，則組內(nèi)全部家兔不再作用。每一家免使用次數(shù)，用于一般藥品的檢查，不應(yīng)超過10次。（二)試驗(yàn)前的準(zhǔn)備在作熱原檢查前1－2天，供試用家兔應(yīng)盡可能處于同一溫度的環(huán)境中，實(shí)驗(yàn)室和飼養(yǎng)室的濕度相差不得大于5℃，實(shí)驗(yàn)室的濕度應(yīng)在17－28℃，在試驗(yàn)全部過程中，應(yīng)注意室溫變化不得大于3℃，應(yīng)避免噪音干擾試驗(yàn)前家兔停止給食并置于固定器中至少1小時(shí)，以使體溫達(dá)到相對(duì)穩(wěn)定。然后用肛溫（或用其他同樣的測(cè)溫裝置)測(cè)量肛門內(nèi)體溫，肛溫計(jì)插入肛門的深度和時(shí)間各兔應(yīng)相同（深度一般約6cm，時(shí)間不得少于1.5分鐘)，每膈30－60分鐘測(cè)量體溫1次，一般測(cè)量2次，兩次體溫之差不得超過0.2℃，以此兩次體溫的平均值作為該兔的正常體溫。當(dāng)日使用家兔正體溫應(yīng)在38.0-39.6℃的范圍內(nèi)，且各兔間的正常體溫之差不昨超過1℃。

試驗(yàn)用的注射器、針頭及一切和供試呂的溶液接觸的器皿，應(yīng)置烘箱中用250℃加熱30分鐘或用180℃加熱2小時(shí)，也可用其他適宜的方法除去熱原。

（三)檢查法 取適用的家兔3只，測(cè)定其正常體溫后15分鐘以內(nèi)，自耳靜脈緩緩注入規(guī)定劑量并溫?zé)嶂良s38℃的供試品溶液，然后每隔1小時(shí)按前測(cè)量其體溫1次，共測(cè)3次，以3次體溫中最高的1次減去正常體溫，即為該兔體溫升高的度數(shù)。如3只家兔中有1只體溫升高0.6℃或以上，或3只家兔體溫升高均低于0.6℃，但升高的總數(shù)達(dá)1.4℃或1.4℃以上，應(yīng)另取5只家兔復(fù)試，檢查方法同上。

（四)結(jié)果判斷 在初試3只家免中，體溫升高均低于0.6℃并且3只家兔體溫升高總數(shù)低于1.4℃；或在復(fù)試的5只家兔中體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)僅有1只，并且初試、復(fù)試合并8只家兔的體溫高總數(shù)為3.5℃或3.5℃以下，均認(rèn)為供試品的熱原檢查符合規(guī)定。

在初試3只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的免數(shù)超過1只；或在復(fù)試的5只家兔中，體溫升高0.6℃或0.6℃以上的兔數(shù)超過1只；或在初試復(fù)試合并8只家兔的體溫高總數(shù)超過3.5℃，均認(rèn)為供試品的熱原檢查不符合規(guī)定。

六、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法

（一)概述 本法系利用鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集的反應(yīng)機(jī)理，以判斷供試品中細(xì)菌內(nèi)毒素的限量是否符合規(guī)定的一種方法。

細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品系自大腸桿菌提取精制得到內(nèi)毒素。以細(xì)菌內(nèi)毒素國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物，以過協(xié)作標(biāo)定，使標(biāo)準(zhǔn)品單位與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品單位含義一致。用于標(biāo)定細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品和促裁鱟試劑靈敏度。

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品系以細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品為基準(zhǔn)物進(jìn)行標(biāo)定，確定基重量的相當(dāng)效價(jià)。每1mg工作標(biāo)準(zhǔn)品效價(jià)應(yīng)不小于2EU，不大于50EU，并具備均一性和穩(wěn)定性的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。效價(jià)測(cè)定方法如下：每批工作標(biāo)準(zhǔn)品至少取4支樣品，使用同一批號(hào)鱟試劑、同1支標(biāo)準(zhǔn)品。每支工作標(biāo)準(zhǔn)品按重量、標(biāo)準(zhǔn)品按單位，分別用內(nèi)毒素檢查用水^＊稀釋制備一系列2倍稀釋度的內(nèi)毒素溶液，與鱟試劑反應(yīng)，當(dāng)4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的對(duì)數(shù)均值的標(biāo)準(zhǔn)差（S)小于0.365時(shí)，計(jì)算4支工作標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)的幾何平均值（以ng/mg表示)及標(biāo)準(zhǔn)品的反應(yīng)終點(diǎn)值以（以EU／mg表示)，按下式計(jì)算。

（二)試驗(yàn)準(zhǔn)備 本法所用的器皿需經(jīng)處理，除去可能存在的外源性內(nèi)毒素常用250℃干烤30分鐘或180℃干烤2小時(shí)，也可用其他適宜方法。試驗(yàn)操作過程應(yīng)防止微生物的污染。

試驗(yàn)前需核對(duì)使用批號(hào)鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值，應(yīng)符合規(guī)定。裝量加入配帶的鱟試劑溶劑。溶解后，為鱟試劑溶液，備用。

供試品的稀釋：使用批號(hào)鱟試劑的靈敏度標(biāo)示值小于供試品的內(nèi)毒限量時(shí)，按下式計(jì)算，用內(nèi)毒素檢查用水^＊將供試劑品稀釋后進(jìn)行檢查。

供試品的稀釋倍數(shù)＝X／λ

X：供試品的內(nèi)毒素限量?jī)?nèi)毒素限量（EU／ml)

λ：供試品鱟度劑靈敏度標(biāo)示值（EU／ml)

(三)檢查 裝有0.1ml鱟試劑溶液的10×75mm試管（或0.1ml／支規(guī)格的鱟試劑原安瓿)4支，其中2支加入0.1ml供試品作為試品管，1支加入2λ內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品0.1ml作為陽性對(duì)照管，1支加入配帶的鱟試劑溶液0.1ml作為陰性對(duì)照管。將試管輕輕混勻后，封閉管口，垂直放入37±1℃水浴中，保溫60±2分鐘。保溫過程和拿取試管要小心，避免因受到振動(dòng)造成陰性結(jié)果。

（四)結(jié)果判斷 將試管從水浴中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180⁰時(shí)，管內(nèi)凝膠不變形，不從管壁滑脫者為陽性記錄為（＋)凝膠不能保持完整并從管壁滑脫者為陰性，記錄為（一)。供試品2管如為（一)，應(yīng)認(rèn)為符合規(guī)定，不再進(jìn)行熱原檢查法（家兔法)試驗(yàn)。如2管均為（＋)，應(yīng)認(rèn)為不符合規(guī)定。如2管中1管為（＋)，1管為（一)，按述方法另取4支供試品管復(fù)試，4管中有1管為（＋)即認(rèn)為不符合規(guī)定。除正文另有規(guī)定外，有符合規(guī)定的供試品應(yīng)再以熱原檢查法（家兔法)試驗(yàn)，并根據(jù)的結(jié)果判定。

供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限量應(yīng)符合各品種正文下的規(guī)定。

陽性對(duì)照為（一)或陰性對(duì)照為（＋)，試驗(yàn)無效。

附 滅菌注射用水、注射用水、氯化鈉注射液、5％和10％葡萄糖注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

【細(xì)菌內(nèi)毒素】取本品，依法檢查，供試品細(xì)菌內(nèi)毒素的限量不應(yīng)超過1EU／ml。如超過1EU／ml，需經(jīng)熱原檢查法（家兔法)判定。

七、鱟試劑標(biāo)準(zhǔn)

本品為鱟科動(dòng)物東方鱟（Tachyplecus tridentatus)的血液變形細(xì)胞溶解物的無菌冷凍干燥品。

本品含能被微量細(xì)菌內(nèi)毒素激活的凝固酶原（Proclotting enzyme)，凝固蛋白原（Coagulagen)其靈敏度以細(xì)菌內(nèi)毒標(biāo)準(zhǔn)品或工作標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定，應(yīng)為標(biāo)示量的50％－200％。

（一)性狀 本品為白色或類白色凍干塊或粉末，在水生生理鹽水中易溶。

（二)鑒別

1．取本品按裝量加水溶解后，加茚三酮試液《中國(guó)藥典1990年版》（二部附錄162頁)0.25ml，加熱煮沸1－2分鐘，顯藍(lán)色紫色。

2．取本品按裝量加水溶解后，再加水適當(dāng)稀釋，照分光光度法《中國(guó)藥典1990年版》（二部附錄24頁)測(cè)定，在270±1nm的波長(zhǎng)處有單一吸收峰。

3．取本品按裝量加入內(nèi)毒檢查用水溶解后，吸取0.1ml加入0.1ml細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品或標(biāo)準(zhǔn)品50EU，混勻后，于37℃水浴中放置1小時(shí)，有凝膠形成。

（三)檢查 干燥失重：取本品約0.1在g ，在66℃減壓干燥至恒得，減失重量不得過5％（中國(guó)藥典1990年版二部附錄55頁)。

自身凝集：取本品4支，按裝量加入配帶的鱟試劑溶劑，溶解后，分別從每支取0.1ml，再分別加入配帶的鱟試劑溶劑0.1ml，混勻后，于37±1℃水浴中放置4小時(shí)，不得形成凝膠，若有2管以上形成凝膠，判為不合格；若僅有1管形成凝膠，照同樣方法，另取8支重復(fù)檢查，8支均不得形成凝膠。

緩沖能力：任意取5％、10％葡萄糖注射液，氯化鈉注射液無菌注射用水或注射用水適量，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH使供試品溶液pH值為2.90-3.00，取此溶液適量與等量鱟試劑溶解液混勻，重復(fù)測(cè)定，pH值應(yīng)為6.00-8.00。

（四)靈敏度測(cè)定預(yù)測(cè)：

1．取細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品1支，按說明溶解燕稀稀釋成1→8等比系列稀釋液。

2．取同一批鱟試劑若干支，分別按標(biāo)示量加入配帶的試劑溶劑制成鱟試劑溶液。取10×75mm試管若干支，分別加入0.1ml鱟試劑溶液，加入內(nèi)毒素稀釋液0.1 ml ，每一稀釋液最少作2管，同時(shí)作2管陰性對(duì)照。輕輕振動(dòng)上述試管混勻內(nèi)容物，封閉管口，置37±1℃水浴中。保溫60±2分鐘觀察結(jié)果，確定本批鱟試劑靈敏范圍，2管陰性對(duì)照不得出現(xiàn)陽性結(jié)果。

測(cè)定：根據(jù)預(yù)測(cè)得到的靈敏范圍，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品以1→2等比稀釋，選擇能出現(xiàn)陽性和陰性結(jié)果的4個(gè)邊疆稀釋液，每一稀釋液作4管，且其最高濃度的4管應(yīng)均為陽性最低溶液的4管應(yīng)均為陰性，同上述操作，記錄反應(yīng)結(jié)果，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)差（s)

X為4組反應(yīng)終點(diǎn)的數(shù)對(duì)值,n為4

當(dāng)s＜0.365時(shí)，按下式計(jì)算本批鱟試劑靈敏度（λ)

當(dāng)s＜0.365時(shí)測(cè)定無效，應(yīng)檢查出現(xiàn)差異原因，并重新測(cè)定。

（五)用途 用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

（六)規(guī)格 （1)0.1ml；（2)0.5ml。

（七)貯藏 遮光，在冷處保存。有效期暫定1年。

*系指其內(nèi)毒素含量不超過0.006EU/ml的注射用水。

八、無菌檢查法

（一)概念

無菌檢查法系指檢查藥品與微敷料是否無一種方法。

無菌檢查法的全部過程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物的污染。

生物制品應(yīng)按衛(wèi)生部《生物制品造及檢定規(guī)程》中有關(guān)無菌的檢查的規(guī)定辦理。

（二)培養(yǎng)及基及其制方法

1．需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基

除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)　pH為北堿性，煮沸，濾清，按量加入葡萄糖和天刃溶液搖勻，調(diào)節(jié)ph 值使滅菌后為7.1±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

2．霉菌培養(yǎng)基

除葡萄糖外，取上述成份加入水內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH 約6.0，煮沸，加葡萄糖溶解后，搖勻，濾清，調(diào)節(jié)值使滅菌后為5.8±0.2，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

3．選擇性培養(yǎng)基（1)對(duì)氨基苯甲酸培養(yǎng)基（用于磺類藥物的無菌檢查)：照上述需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基及霉菌培養(yǎng)基的處方及制法，各加對(duì)氨基苯甲酸0.125g，溶解后搖勻，分裝，115⁰滅菌30分鐘。（2)吐溫培養(yǎng)基（用于油劑藥品的無菌檢查)；照上述需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基及霉菌培養(yǎng)基的處方及制法，各加10ml吐溫80，搖勻后，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

4．普能肉湯培養(yǎng)基

胨 10g 氯化鈉 5g 肉浸液100ml

取胨與氯化加入肉浸液內(nèi)，微溫溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2，分裝，115⁰滅菌30分鐘。

5．普能肉湯瓊脂培養(yǎng)基（供細(xì)菌用平及斜面)，照上述普通肉湯培養(yǎng)基的處方及制法，加入15－20g瓊脂，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

6.0.5%葡萄糖肉湯培養(yǎng)基

胨 10g 葡萄糖 5g

氯化鈉 5g 肉浸液 100ml

取胨與殷化鈉加入肉浸液溶解后，調(diào)節(jié)pH為弱堿性，煮沸，加葡萄糖溶解后搖勻，濾清，調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為7.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

上述培養(yǎng)基分別加按15ml與40ml分裝與試管中，裝量約為試管高度的的2／5，在115⁰滅菌30分鐘。細(xì)菌培養(yǎng)基經(jīng)30－35℃培養(yǎng)48小時(shí)。霉菌培養(yǎng)基經(jīng)20－257.2±0.2分裝，115⁰滅菌30分鐘。

培養(yǎng)72小時(shí)后，應(yīng)無菌生成。

培養(yǎng)基質(zhì)量應(yīng)能通過以下檢查。

（1)需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基經(jīng)按種按每1ml含100個(gè)以下的藤黃八疊球菌[CMCC（B)28001]菌液1ml，置30－35℃培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)生長(zhǎng)良好。

（2)需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基經(jīng)接種每1ml含50個(gè)以下的生孢梭[CMCC（B)64941]菌液1ml，置30－35℃培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)生長(zhǎng)良好。

（3)霉菌培養(yǎng)基經(jīng)接種每1ml含50個(gè)以下的白色念珠菌菌液1m，置20－25℃培養(yǎng)24小時(shí)后應(yīng)生長(zhǎng)良好。

[附注]肉浸液制備法：取新鮮牛肉，除去肌腱及脂肪，切細(xì)，絞碎后，每1000g加水3000ml，充分拌勻在2－10℃浸泡20－24小時(shí)，煮沸1小時(shí)，濾過，壓肉渣，補(bǔ)足液量分裝，121℃滅菌30分鐘，置冷暗處備用。也可用牛肉浸膏3g，加水1000ml，配成溶液代替。

（三)對(duì)照用菌液

金黃色葡萄糖菌菌液：取金黃色葡萄球菌[CMCC（B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物1白金耳。接種至需氣菌培養(yǎng)基內(nèi)，在30－35℃培養(yǎng)16－18小時(shí)后，用滅菌的生水稀釋成1：10⁶。

（四)檢查法

1．供試品如為注射液，供角膜創(chuàng)傷物術(shù)用的滴眼劑或滅菌溶液，任取供試品2支（瓶)以上，用適當(dāng)消毒液清潔供試品容器的外表面后，以無菌操作吸取接種量的供試品溶液，分別接種于需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基5管，其中1管接種對(duì)照用菌液1ml，供作陽性對(duì)照；另接種于霉菌培養(yǎng)基2管，供試品溶液的每管接種量與培養(yǎng)基的分裝量，應(yīng)根據(jù)供試品的裝量，按下列規(guī)定取用：

接種后輕輕搖動(dòng)，使勻。需氣菌、厭氣菌培養(yǎng)基在30－35℃培養(yǎng)5日，霉菌培養(yǎng)基在20－25℃培養(yǎng)7日，抗生素類藥品均培養(yǎng)7日，放射性藥品培養(yǎng)5－7日。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)（陽性對(duì)照在24小時(shí)內(nèi)應(yīng)有細(xì)菌生長(zhǎng))；如在加入供試品溶液后，增培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取該培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另1支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48－72小時(shí)后，觀察是否現(xiàn)渾濁或在斜面上有無菌落生長(zhǎng)。并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片制成染色標(biāo)本，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。

2．供試品如為注射用滅菌粉末或無凍干品，照該藥品項(xiàng)下的規(guī)定或按該藥品劑量項(xiàng)下的溶劑用量加入滅菌用水或滅菌生理鹽水，使內(nèi)容物解成均勻的供試品溶液，取接種量的供試品溶液，接種于上述培養(yǎng)基中。

3．供試品如為供直接分裝成注射用無菌粉末的原料藥，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定制成溶液,依法接種于培養(yǎng)基中。

4．供試品如外科敷料，取供試品2個(gè)包裝，以無菌操作拆開包裝，于不同部位前取約1cm×3cm的樣品，分別接種于40ml培養(yǎng)基中。

5．供試品如有抑菌作用或含有抑菌物質(zhì)時(shí)，可選用適宜的培養(yǎng)基，或種入較大量的培?

■［此處缺少一些內(nèi)容］■

?,5ml的培養(yǎng)基中。

（五)結(jié)果判斷

當(dāng)陽性對(duì)照和顯渾濁確有細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)可根據(jù)觀察所得的結(jié)果判定：如需氣菌、厭氣菌及霉菌培養(yǎng)均為澄清或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，均應(yīng)判為供試品合格；如需氣菌、厭氣及霉菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯渾濁并確證為有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別依法復(fù)試2次，除陽性對(duì)照管外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則應(yīng)判為供試品不合格。

九、藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

（一)中藥

1．口服藥品 1g或1ml中不昨檢出大腸桿菌，含動(dòng)物藥及臟器的藥品同時(shí)不得檢出沙門氏菌。不得檢出活螨。

（1)固體制劑：

①不含生藥原粉的制劑，1g中含細(xì)菌數(shù)不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

②含生藥原粉的制劑：

A片劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)不得過500個(gè)。

B丸劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過50000個(gè)，霉菌數(shù)不得過500個(gè)。

C散劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過100000個(gè)，霉菌數(shù)不得過500個(gè)。

（2)液體制劑：1ml中含細(xì)菌數(shù)不得過100個(gè)，霉菌和酵母菌數(shù)不得過1000個(gè)，

2．外用藥品1g或1ml中不得檢出綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌。不得檢出活蟥。

（1)眼科用藥：1g或1ml中含細(xì)菌數(shù)不得過100個(gè)，不得檢出霉菌和酵母菌。

（2)陰道、創(chuàng)傷、潰瘍用制劑不得檢出破傷風(fēng)桿菌：1g或1ml中含細(xì)菌數(shù)不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)不得過500個(gè)。

（3)用于表皮，粘膜完整的含生藥原粉制劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過50000個(gè)，霉菌數(shù)不得過500個(gè)。

3．暫不進(jìn)行限度要求的藥品。

（1)不含生藥原粉的膏劑，如狗皮膏、拔毒膏等。

（2)以豆原、神曲等發(fā)酵類藥材為生藥原粉的中藥制劑。

（二)化學(xué)藥及生化藥

1．口服藥品 1g或ml中不得檢出大腸www.med126.com桿菌，含臟器生化制劑同時(shí)不得檢出沙門氏菌。不得檢出活螨。

（1)化學(xué)藥制劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

（2)生化藥制劑：1g中含細(xì)菌數(shù)不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

①胃酶片、肝浸膏片、酵母片、胎盤片、力勃隆片1g中含細(xì)菌數(shù)不得過5000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

②胰酶片、胖得生片、胃得寧片、甲狀腺粉1g中含細(xì)菌數(shù)不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

③多酶片（含淀粉酶)1g中含細(xì)菌數(shù)不得過50000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

④淀粉酶、復(fù)合磷酸脂酶、胃膜菠蘿酶制劑1g中含細(xì)菌數(shù)不得過100000個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

（3)液體制劑：1ml中含細(xì)菌數(shù)不得過100個(gè)，霉菌數(shù)不得過100個(gè)。

2．外用藥品 1g或1ml中不得檢出綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌。

（1)眼科手術(shù)、創(chuàng)傷、潰瘍及止血藥應(yīng)無菌。

（2)一般滴眼劑、眼膏劑，1g或1ml中含細(xì)菌數(shù)不得過100個(gè)，不得檢出霉菌和酵母菌。

3．暫不進(jìn)行限度要求的藥品

（1)消毒劑、防腐劑，如碘酊、甲紫溶液、紅汞溶液等。

（2)口服抗生素制劑。

（三)幾點(diǎn)說明

1．各類制劑檢出大腸桿菌或其他病菌時(shí)按1次檢出結(jié)果為準(zhǔn)，不再抽樣復(fù)驗(yàn)，該產(chǎn)品作不合格論。

2.細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)不合格者，應(yīng)從同一批產(chǎn)呂中隨機(jī)抽樣試2次，以3次檢驗(yàn)結(jié)果的平均值報(bào)告。細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)任一項(xiàng)不合格時(shí)，均作不合格論。

3．未列入標(biāo)準(zhǔn)的其他劑型，根據(jù)其用藥途徑，參照同類劑型的染限度標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。藥用原料、輔料等原則上參照中藥；、化學(xué)制劑的有關(guān)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。

4．進(jìn)口藥品的菌限度按出口國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)和本標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行；出口藥品合同規(guī)定執(zhí)行。

5．對(duì)黃曲霉素的檢查方法及限量標(biāo)準(zhǔn)待訂。

（四)補(bǔ)充規(guī)定

1．中藥

（1)膠襄劑：全含生藥原粉者，細(xì)菌數(shù)每克不得過50000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。部分含生藥原粉者，細(xì)菌數(shù)每克不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（2)茶劑：含生藥原粉者，細(xì)菌數(shù)每克不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（3)沖劑：含生藥原粉者，細(xì)菌數(shù)每克不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（4)膠劑：細(xì)菌數(shù)每克不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（5)煎膏劑：細(xì)菌數(shù)每克不得過100個(gè)，霉菌數(shù)和酵母菌數(shù)每克不得過100個(gè)。

（6)膜劑：細(xì)菌及霉菌數(shù)每10cm²不得過100個(gè)。

（7)氣霧劑：細(xì)菌數(shù)及霉菌數(shù)每毫均不得過100個(gè)。

（8)藥酒：細(xì)菌數(shù)每毫升不得過500個(gè)，霉菌數(shù)每毫升不得過100個(gè)。

（9)口服兼外用的制劑：應(yīng)分別符合口服外用藥品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。

（10)用于表皮粘膜完整的不含生藥原粉的外用制劑，細(xì)菌總粉每克或每毫升不得過1000個(gè)，霉菌數(shù)每克或每毫升不得過100個(gè)。

2．含中藥和化學(xué)的復(fù)合制劑。

（1)含生藥原粉的劑，細(xì)菌數(shù)每克不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（2)不含生藥原粉的制劑，細(xì)菌數(shù)每克不得過10000個(gè)，霉菌數(shù)每克不得過500個(gè)。

（五)補(bǔ)充說明

1．標(biāo)準(zhǔn)中提到的“生藥原粉”是指中藥的植物藥、動(dòng)物藥、礦物藥等藥材（包括炮制品)經(jīng)粉碎而制成的粉末。

2．暫進(jìn)行限度要求的藥品：

（1)“不含生藥原粉的膏劑”是指外用膏藥，如，狗皮膏、拔毒膏、傷濕止痛膏等。

（2)“以豆豉、神曲等發(fā)酵類藥材為生原粉的制劑”暫不進(jìn)行限度要求，是指結(jié)細(xì)菌數(shù)、霉菌數(shù)暫不控制。但不包括處方以煎煮的豆豉、神曲等為原料的制劑，其規(guī)定的控制菌應(yīng)符合該劑型的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求。

3．幾點(diǎn)說明中“各類制劑出大腸桿菌或其它致病菌”是采用《藥品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法》的檢驗(yàn)結(jié)論。

4．幾外觀發(fā)霉、生蟲、生活螨的藥品，作不合格論。液體制劑瓶蓋周圍有發(fā)霉或活螨者，作不合格論。不合格無需再抽樣復(fù)驗(yàn)。

十、毒性實(shí)驗(yàn)法

（一)概述 某一種新藥或一個(gè)新的制劑，于臨床使用前，必須經(jīng)過這個(gè)步驟。雖然藥物對(duì)人的作用，不完全能在動(dòng)物身上表現(xiàn)出來，但對(duì)一個(gè)新藥物來說仍是一個(gè)很有用的參考數(shù)據(jù)。因此，為保證病人的用藥安全，新藥在臨床應(yīng)用前一定要進(jìn)行毒性試驗(yàn)。毒性試驗(yàn)的類型，可根據(jù)藥物的性質(zhì)及使用途徑、方法和時(shí)間等加以選擇。如有的藥物后則產(chǎn)生中毒癥狀；有的藥物需長(zhǎng)期服用才能秦效等。因此，藥物的毒性試驗(yàn)，應(yīng)根據(jù)該藥物的特點(diǎn)來決定。

（二)急性毒性試驗(yàn)（一般安全試驗(yàn))取體重18－22g的健康不白鼠5只，由尾靜脈（或腹腔)注射一定劑量的藥液（容量以0.5ml為宜，可用注射生理水稀釋成不同濃度)，注射時(shí)間為4－5秒，觀察有無不良反應(yīng)（如驚厥、四肢癱瘓、步伐不穩(wěn)、豎毛、呼吸抑制等)或死亡。主要以死亡為指標(biāo)，注射后48小時(shí)內(nèi)不得有死亡。如有死亡應(yīng)加取小白鼠10只重新試驗(yàn)，全部小白鼠在48小時(shí)內(nèi)不得有死亡（做過本試驗(yàn)的小白鼠不得重復(fù)使用)。

【注】①供試品靜脈有困難時(shí)，可由腹腔注射，注射量仍為0.5ml，注射時(shí)間不限，注射后72小時(shí)內(nèi)不得有死亡。

②若某一藥物無安全試驗(yàn)劑量時(shí)，可將臨床人用劑量乘以一定的安全系數(shù)然后再折算成小白鼠體重的劑量。安全系數(shù)大小，應(yīng)根據(jù)該藥物的純度及臨床試驗(yàn)情況而定，一般治療性藥物可定為50－100，需長(zhǎng)期服用的藥物可為100以上。

例：某注射液，成人（按體重50kg計(jì))，每次注射量為4ml，安全系數(shù)為50，則小白鼠（按20g計(jì))的給藥劑量為：

小鼠劑量＝4×50／50000×20＝0.08ml

取該藥0.08ml加0.9％氯化注射液稀釋成0.5ml，作為供試品的注射用量。

③也可用同樣方法試驗(yàn)（即某一劑量注入小白鼠內(nèi)，若5只中只有1只死亡，則減劑量再試直至試出5只小白鼠均不死亡的最大劑量)。求出某藥物的安全系數(shù)。

計(jì)算公式：

安全系數(shù)＝小白鼠最大耐受量×成人體重（g)／成人用量×小白鼠體重（g)。

例：某藥特的劑量為4ml，當(dāng)劑量為0.2ml（稀釋至0.5ml)，給小白鼠靜脈注埋時(shí)引起死亡，減劑量再試，在0.16ml/20g時(shí)，沒有反應(yīng)，故含有苯甲醇的注射劑，對(duì)試驗(yàn)往產(chǎn)生干擾，應(yīng)引起注意。

④苯甲醇對(duì)小白鼠有一定毒性反應(yīng)，故含有苯甲的注射劑，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果往往產(chǎn)生干擾，應(yīng)引起注意。

（三)亞急性和慢性試驗(yàn)需要較長(zhǎng)期投用的藥物，應(yīng)做亞急性或慢性毒笥試驗(yàn)。方法和急性毒性試驗(yàn)基本相同，按小白鼠體重計(jì)算，每在在口服或腹腔注射劑量為人用劑量的20－50倍，連續(xù)用藥1－8周。慢性毒性，連續(xù)用3－6個(gè)月。在用藥期間，應(yīng)仔細(xì)觀察試驗(yàn)動(dòng)物的體重、進(jìn)食量、進(jìn)水量的變化，以及有無不良反應(yīng)或死亡。動(dòng)物在試驗(yàn)前后，均應(yīng)做血象、肝、腎等功能檢查，以資對(duì)照。試驗(yàn)中死亡或試驗(yàn)完畢的動(dòng)物都要做解剖，觀察內(nèi)臟器管和組織切片檢查。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，判斷可否用于臨床。

【注】①亞急性，慢性毒性試驗(yàn)，均應(yīng)設(shè)對(duì)照。這是由于的飼養(yǎng)環(huán)境和健康情況的不同個(gè)體差異往往很大，給藥后內(nèi)臟的變化如無空白對(duì)照組做比較，常使實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以判斷。

②非經(jīng)口服的藥品，應(yīng)注意須滅菌后作用，以免動(dòng)物被染而影響結(jié)果。

③毒性實(shí)驗(yàn)的給藥途徑，應(yīng)盡量采用與臨床應(yīng)用的相同方法。給藥途徑不同毒性表現(xiàn)常是差別很大，如口服給藥的LD50比靜脈或腹腔注射的LD50大幾十倍。

④毒性實(shí)驗(yàn)前，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要考慮周密，應(yīng)盡力避免實(shí)驗(yàn)中臨時(shí)改變條件。實(shí)驗(yàn)用的動(dòng)物，一般應(yīng)在本實(shí)驗(yàn)室條件下2周以上，使動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境后，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

⑤實(shí)驗(yàn)室要注意加強(qiáng)對(duì)動(dòng)物的管理，保持清潔衛(wèi)生。對(duì)實(shí)驗(yàn)中途死亡的動(dòng)物應(yīng)做出客觀的分析，以便正確總結(jié)判斷。

⑥毒性實(shí)驗(yàn)中，除記錄計(jì)量指標(biāo)外，支動(dòng)物的一般狀態(tài)如興奮、抑制、麻痹、呼吸、食欲、體重等應(yīng)進(jìn)行仔細(xì)地觀察、對(duì)實(shí)驗(yàn)中藥物出現(xiàn)作用的時(shí)間，速度以及毒副作用的特點(diǎn)等，均應(yīng)嚴(yán)密觀察，并詳細(xì)記錄，以便進(jìn)行綜合分析。

⑦在亞急性、慢性毒性實(shí)驗(yàn)中，應(yīng)根據(jù)藥物的性質(zhì)和實(shí)驗(yàn)要求的不同，在給藥前后以及實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物易發(fā)生毒性反應(yīng)的主要器官進(jìn)行檢查。檢查項(xiàng)目有：

A血象：包括血色紅素、紅、白細(xì)胞及分類計(jì)數(shù)等。

B肝功能：肝臟是機(jī)體重要的代謝器官，不僅對(duì)糖、蛋白質(zhì)及脂類代謝起得要作用，也是許多藥物在體內(nèi)的解毒場(chǎng)所，故應(yīng)進(jìn)行肝臟功能的檢查。

C腎功能：大部分藥物從腎臟排泄，故應(yīng)測(cè)定藥物對(duì)腎功能有無損害及其損害的程度，其中包括血中非蛋白氮含量，小便常規(guī)檢查。

D組織切片：可進(jìn)一步了解藥物對(duì)各臟器有無損害及其損害的程度�？蓪�動(dòng)物在不同的期內(nèi)分批處死、取其心，肝、脾、肺腎、胃、腸等進(jìn)行切片檢查，并與對(duì)照比較，觀察藥物對(duì)各組織有無可逆或不可逆損害。

（四)半數(shù)致死量的測(cè)定半數(shù)致死量（簡(jiǎn)稱LD50)是指藥物引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物半數(shù)死亡的劑量。由于個(gè)體差異，同一劑量的藥物給同一動(dòng)物，可以出現(xiàn)死亡或不死亡。而LD50在表示藥物毒性時(shí)，比較靈敏，準(zhǔn)確。一般以每kg多少mg表示（藥物劑量／體重)

測(cè)定LD50常用動(dòng)物為小白鼠，體重18－22g，雄雌均可（雌的不得懷孕)將不同性別和體重的動(dòng)物均勻分成4或6組，每組10只。給藥途徑和臨床應(yīng)用相同，給藥容量以0.5ml為宜。一般觀察3天，以死亡為主要指標(biāo)。

1．機(jī)率單位比例法 精密稱取適量的檢品（如系溶液可精密量取)，按等比級(jí)數(shù)（0.1、0.3、0.9……)或等差級(jí)數(shù)（0.1、0.2、0.3……)配成4種或6種濃度，分別用于4組或6組小白鼠，觀察在一定時(shí)間內(nèi)死亡情況，找出使小白鼠死亡數(shù)在50％以上和50％以下的兩個(gè)劑量（如各組小白鼠均無死亡或全死亡則表示劑量選擇不當(dāng)，須更換較高或料低劑理重試)，按下列公式計(jì)算出半數(shù)致死量。

M＝高劑量的對(duì)數(shù)值

N＝低劑量的對(duì)數(shù)值

A＝高劑量所致小白鼠死亡百分率（大于50％)的機(jī)率單位

B＝低劑量所致小白鼠死亡百分率（小于50％)的機(jī)率單位

5＝50％死亡百分率的機(jī)率單位

例：烏頭堿注射液急性毒性試驗(yàn)結(jié)果。見下表。

烏頭堿注射液急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

LD50=24.60mg/kg

2．簡(jiǎn)化機(jī)率單位法

（1)劑量預(yù)試：取小白鼠9只，均分3組，將被試藥物分大中小3個(gè)劑量，每個(gè)劑量各給1組動(dòng)物觀察一定時(shí)間的死亡情況。如3組全死或全不死，應(yīng)重新選擇劑量再試，二至找到死亡率大于和小于50％的劑量。

（2)正式試驗(yàn)：取18－22g的健康小白鼠，雌雄兼有，按體重、性別均勻分組，每級(jí)10只。將預(yù)試中的找到的劑量范圍按等比級(jí)數(shù)分成2－4個(gè)劑量（須有使動(dòng)物死亡率大于50％和小于50％的兩種劑量)，劑量間的比例范圍內(nèi)為宜。每個(gè)劑量各給1組動(dòng)物。給藥生觀察3天（有的可延長(zhǎng)到7天)，記錄動(dòng)物的一般狀態(tài)和死亡數(shù)目。根據(jù)各劑量的組的死亡率，簡(jiǎn)化機(jī)率單位求出LD50，其分工如下：

式中I為相鄰兩劑量比值（高劑量分子)的對(duì)數(shù)：y為各組死亡率相應(yīng)的機(jī)單位；y為各機(jī)率單位的平均數(shù)；X₁為小劑量的對(duì)數(shù)值。

【注】用本法則定藥物的LD50，在一般情況下采用兩組即可，將實(shí)驗(yàn)果代入分2組時(shí)的公式中求出。分3組、4組皆可，分組多，用動(dòng)物多，計(jì)算復(fù)雜，但更準(zhǔn)確。

例：某新藥，要測(cè)定對(duì)小白鼠口服給藥的LD50，首先進(jìn)行劑理預(yù)試，將該藥物先分為700、800和1000mg/kg3種劑量，每劑量給3只小白鼠灌胃，觀察2天，結(jié)果700mg/kg組死亡1只，800 mg/kg組殘廢只，1000mg/kg組全部死亡。這樣，就找到了死亡率小于50％的劑量為700mg/kg；大于50％的劑量為800和1000mg/kg，依上述情況。估計(jì)用670和800 mg/kg可使動(dòng)物死亡20％ 和60％左右，兩組劑量之比670／800為0.84。符合本法劑量比值范圍的要求。若分2組時(shí)用此兩劑量可以實(shí)驗(yàn)；若用3組時(shí)，可按同樣的劑量比求出第三組劑量，即800／0.84＝952。這樣，670、800和952mg/kg3個(gè)劑理組即成等比級(jí)數(shù)，其中每相鄰兩劑量比均為0.84。然后各劑量的組均給10只動(dòng)物，觀察3天，記錄動(dòng)物的一般狀態(tài)和死亡情況，結(jié)果如下表：

LD50實(shí)驗(yàn)觀察表

本實(shí)驗(yàn)分3組。故代入分3組時(shí)的計(jì)算公式：

十一、局部剌激實(shí)驗(yàn)

（一)家兔點(diǎn)眼法取家兔5只，將藥液生理鹽水各0.05－0.1 ml，分別滴入左右此結(jié)膜襄內(nèi)（或注入眼球結(jié)膜下)，觀察數(shù)小時(shí)（對(duì)有剌激性藥物應(yīng)觀察至作用完全消失，結(jié)膜恢復(fù)正常)，與對(duì)照眼比較，觀察結(jié)膜有無充血，水腫、眼分泌物增多，能否恢復(fù)等情況。如2只免以上均有上述癥狀表示有剌激作用，觀察項(xiàng)目如下：

水泡：眼皮內(nèi)有小水泡凸起。

分泌物：積存于眼內(nèi)外兩側(cè)眼角。

紅腫：眼皮內(nèi)表皮紅腫。

充血：眼結(jié)膜有血絲或全部發(fā)紅。

流淚：內(nèi)眼留有淚珠，嚴(yán)重者成線狀滴下。

羞明：怕光，眼晴緊閉。

（二)腿肌注射法家兔、大鼠、小鼠均可供試。取藥液1ml，分別注入家免左右后腿四頭肌部位（小鼠注0.1ml，大鼠注0.2ml)24小時(shí)或48小時(shí)后，縱向切開注射部位肌肉，觀察局部有無充血、水腫、變性或壞死等現(xiàn)象，必要時(shí)取小塊組織做理切片檢查。如局部組織有嚴(yán)重炎癥反應(yīng)，則不宜做注射或粘膜、創(chuàng)傷面給藥。

（三)兔耳皮下注射法將藥液和生理鹽水各0.05-0.1ml，分別皮下注射至家兔左右耳殼內(nèi)（注射時(shí)要避開小血管)，觀察局部有無剌激現(xiàn)象或硬結(jié)、壞死等，至作用完全消失,注射部位愀復(fù)正常為止。

十二、溶血實(shí)驗(yàn)

（一)2％紅細(xì)胞生理鹽水混懸液制備 取動(dòng)物新鮮血液，加入裝有玻璃的三角燒瓶中，振搖數(shù)分鐘或用玻璃棒攪拌，除去纖維蛋白原，用生理鹽水沖洗，離心2－3次，至上清液不呈紅色為止。然后按紅細(xì)胞的理用生理鹽水配成2％的混懸液。

（二)試驗(yàn)方法 取干凈試管6支，按表排列，依次分別加入各種溶液，搖勻，置37⁰恒濕箱中（或25⁰－27⁰室溫中)并分別觀察，記錄1／2、1、2、3小時(shí)的結(jié)果，如溶液變清呈紅色，則表示溶血，必要時(shí)用顯微鏡觀察紅細(xì)胞是否破裂。如供試藥液0.3m在半小時(shí)內(nèi)引起容血即不宜做靜脈注射用。3小時(shí)不引起溶血作為合格。當(dāng)結(jié)果難以判定時(shí)，可結(jié)合毒性、剌激性與療效等全面考慮是否可供試注射用。

溶血試驗(yàn)記錄表

十三、過敏實(shí)驗(yàn)

藥物的過敏反應(yīng)系人體對(duì)藥物的一特殊反應(yīng)。這種反應(yīng)與藥物的治療作用和毒副作用，以及藥物劑量的大小有直接關(guān)系，如青霉素對(duì)多數(shù)人并不產(chǎn)生毒副作用，但對(duì)少數(shù)人卻能引起嚴(yán)重的過敏反應(yīng)，藥物的過敏性反應(yīng)是機(jī)體對(duì)藥物的一種變態(tài)反應(yīng)。當(dāng)機(jī)體接受某些藥物或其他雜質(zhì)（抗原)后，在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生了相應(yīng)的抗體，這時(shí)機(jī)體對(duì)這種抗原的敏感性增高，若機(jī)體再接受（口服、吸入、注射、粘膜吸收、皮膚接觸等)這種藥物或雜質(zhì)時(shí)，即作為抗作與機(jī)體的抗體發(fā)生原抗反應(yīng)。這種由于藥物所引起的變態(tài)反應(yīng)，稱為藥物的過敏反應(yīng)。

（一)實(shí)驗(yàn)方法 取體重250－350g的健康豚鼠6只，每鼠隔日腹腔注射藥液0.5ml，共注射3次。自第一針起14日后，由股靜脈或頸靜脈注射藥液1ml，或腹腔注射2ml。觀察注射后有無噴嚏、抽搐、休克等過敏反應(yīng)，結(jié)果為陰性時(shí)，隔7日后再由靜脈注射原藥液1ml或腹腔注射2ml，觀察有無過敏反應(yīng)。

（二)結(jié)果判斷 注射液后15分鐘內(nèi)，若無連續(xù)干咳、抓鼻及明顯豎毛、四肢發(fā)軟、躺臥、呼吸困難、痙攣、虛脫或死亡等癥狀（或僅有1只豚鼠前爪抓鼻和干咳均不超過3次)，作為陰性反應(yīng)；若有1只鼠出現(xiàn)痙攣、虛脫及死亡或1只以上豚鼠出現(xiàn)干咳，前爪抓鼻，豎毛，四肢發(fā)軟、吸收困難等一種以上癥狀，則作為陽性的反應(yīng)。

【注】過敏試驗(yàn)所試動(dòng)物，一般選用豚鼠，因豚鼠對(duì)變態(tài)反應(yīng)較敏感，癥狀也較典型。