本品系用傷寒菌培育后取菌苔制成懸液，加甲醛殺菌，以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成每ml含菌3億制zxtf.net.cn/pharm/成。用于預(yù)防傷寒。
1 菌種
1.1菌種來(lái)源
制造傷寒菌苗用的菌種及檢定菌種用的診斷血清，應(yīng)由中國(guó)藥品生物制品檢定所分發(fā)或經(jīng)同意。
1.2 菌種檢定
定菌種可用pH7.2～7.4的肉湯瓊脂、馬丁瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。
1.2.1 培養(yǎng)特性
制造菌苗的菌株應(yīng)具有典型的形態(tài)、培養(yǎng)和生化特性。
1.2.2血清凝集試驗(yàn)
用37℃培育18～20小時(shí)的培養(yǎng)物以磷酸鹽緩沖生理鹽水稀釋成含菌6億/ml，與傷寒菌診斷血清作定量凝集試驗(yàn)，充分混合后放37℃過(guò)夜，以肉眼見(jiàn)到凝集（+)之血清最高稀釋度為凝集反應(yīng)之效價(jià)。凝集價(jià)不應(yīng)低于血清原效價(jià)之半。并用傷寒Vi及O血清做凝集試驗(yàn)，應(yīng)與Vi血清有凝集，與O血清不凝集，或僅有較低凝集。
1.2.3 毒力試驗(yàn)
用37℃培育12～16小時(shí)的瓊脂培養(yǎng)物以生理鹽水稀釋成6億/ml、3億/ml、1.5億/ml及0.75億/ml等濃度的菌液（根據(jù)菌種毒力情況稀釋度可作更改也可增加稀釋度)。每1稀釋度的菌懸液腹腔注射體重14～16g之小白鼠，最少5只，每只0.5ml，觀察3天。使小白鼠于感染后3天內(nèi)全部死亡的最小劑量為1個(gè)致死量（LD)，1LD應(yīng)不超過(guò)1.5億菌。
1.2.4 毒性試驗(yàn)
用37℃培育18～20小時(shí)之瓊脂培養(yǎng)物混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水內(nèi)，56℃加溫1小時(shí)（或其他方法殺菌)。不加防腐劑。殺菌試驗(yàn)合格后稀釋為每ml含菌60、30及15億共3個(gè)濃度，每個(gè)濃度的菌懸液以0.5ml腹腔注射體重15～18g小白鼠5只，觀察3天，注射7.5億菌之小白鼠應(yīng)全部生存，注射15億菌之5只小白鼠可有3只死亡。
1.2.5免疫力試驗(yàn)
按《傷寒、副傷寒甲、乙三聯(lián)菌苗制造及檢定規(guī)程》1.2.5項(xiàng)進(jìn)行。
1.2.6 抗原性試驗(yàn)
選體重2kg左右之健康家兔至少3只，用免疫力試驗(yàn)所用之菌液靜脈注射3次，每次0.5ml，第1次注射7億菌，第2次14億菌，第3次21億菌，每次間隔7天。末次注射后10～14天采血做定量凝集試驗(yàn)測(cè)定效價(jià)，2/3家兔血清之凝集效價(jià)不低于1∶12800為合格。
1.3 菌種保存
菌種應(yīng)凍干保存，凍干菌種保存于2～8℃
菌種凍干后應(yīng)抽取樣品按1.2項(xiàng)進(jìn)行檢查，合格后可使用3年，以后每次生產(chǎn)前必須檢查全部特性一次，合格者可繼續(xù)使用2年。
2 菌苗制造
制造傷寒菌苗應(yīng)選用2個(gè)菌株。
2.1 菌種
凍干菌種啟開(kāi)后應(yīng)檢查菌形、純度及玻片凝集試驗(yàn)（包括用Vi血清做玻凝集反應(yīng))，合格后即可使用，每啟開(kāi)1支凍干菌種用于生產(chǎn)不應(yīng)超過(guò)6代。
2.2 制造用培養(yǎng)基
用pH7.2～7.4的馬丁瓊脂或肉湯瓊脂或其他適宜的培養(yǎng)基。
2.3 原液制造
2.3.1 接種
可采用涂種，接種后置37℃培育18～24小時(shí)。
2.3.2 采集
采集前應(yīng)逐瓶檢查，有雜菌者廢棄。刮取菌苔混懸于磷酸鹽緩沖生理鹽水中。
2.3.3 純菌試驗(yàn)
原液采集后應(yīng)逐瓶取樣接種瓊脂斜面1管，于37℃培育2天，24～26℃1天，如有雜菌生長(zhǎng)應(yīng)廢棄。
2.3.4 殺菌
原液中加入不超過(guò)1.1%±0.1%(ml /ml)的甲醛溶液殺菌。加殺菌劑后的原液應(yīng)放在37℃，不得超過(guò)7天，以后保存于2～8℃。
2.3.5 無(wú)菌試驗(yàn)
純菌試驗(yàn)合格的原液，應(yīng)取樣接種不含瓊脂的硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基及普通瓊脂斜面各1管，放37℃培育5天，如有本菌生長(zhǎng)，可加培量復(fù)試一次；如有雜菌生長(zhǎng)應(yīng)廢棄。
2.3.6 原液合并
無(wú)菌試驗(yàn)合格的原液按不同菌株或不同制造日期分別過(guò)濾合并。合并后應(yīng)加不超過(guò)0.5%（g /ml)苯酚或其他適宜防腐劑，保存于2～8℃。
2.4 原液檢定
2.4.1 鏡檢
菌形應(yīng)正常，無(wú)雜菌。
2.4.2 凝集試驗(yàn)
原液與相應(yīng)血清進(jìn)行凝集試驗(yàn)，其凝集效價(jià)不應(yīng)低于血清原效價(jià)之半。
2.4.3 無(wú)菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
2.4.4 濃度制定
應(yīng)按中國(guó)細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)量檢定部門會(huì)同測(cè)定濃度。
2.4.5 免疫力試驗(yàn)
原液于無(wú)菌試驗(yàn)合格后與質(zhì)量檢定部門會(huì)同進(jìn)行，抽檢批數(shù)不應(yīng)少于生產(chǎn)批數(shù)的1/5。方法同1.2.5項(xiàng)，唯所用小白鼠每組至少15只，保護(hù)60%免疫小白鼠活存為合格。
2.5 原液保存
原液應(yīng)保存于2～8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀釋時(shí)不得少于4個(gè)月，保存效期自采集之日起為2年半。
2.6菌苗稀釋
2.6.1 原液配合
稀釋前應(yīng)先將不同菌株所制之原液按菌數(shù)等量混合，但每個(gè)菌株所加的菌數(shù)與應(yīng)加菌數(shù)在總菌數(shù)不變的原則下允許兩個(gè)菌株之間在40%范圍內(nèi)互有增減。
2.6.2 菌苗稀釋
稀釋菌苗用含0.25%～0.5%（g /ml)苯酚或其他適宜的防腐劑之磷酸鹽緩沖生理鹽水。
2.6.3 菌苗濃度
每ml含傷寒菌3億
2.7 菌苗分批
同組配合的原液用同一批稀釋液在同一日稀釋的各瓶菌苗為1批。大罐稀釋的應(yīng)按大罐分批，并按分裝機(jī)分為亞批。
2.8 檢定
稀釋后每批應(yīng)逐瓶抽樣進(jìn)行無(wú)菌試驗(yàn)及測(cè)定防腐劑含量（大罐稀時(shí)除外zxtf.net.cn/zhuyuan/)。
2.9 分裝
分裝后每亞批應(yīng)抽樣送質(zhì)量檢定部門進(jìn)行成品檢定。
3 成品檢定
3.1物理化學(xué)檢查
菌苗應(yīng)為乳白色懸液，pH值為6.8～7.4，不應(yīng)有搖不散的菌塊及異物。苯酚含量應(yīng)為0.25%～0.5%（g /ml)。
3.2 菌形及純度
染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陰性桿菌。至少觀察10個(gè)視野，平均每個(gè)視野內(nèi)不得有10個(gè)以上非典型菌（線狀、粗大或染色可穎桿菌)，并不應(yīng)有雜菌。
3.3 無(wú)菌試驗(yàn)
按《生物制品無(wú)菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
3.4 安全試驗(yàn)
3.4.1 毒性試驗(yàn)
用體重18～20g之健康小白鼠5只，每只腹腔注射菌苗0.5ml，或用體重350～450g之健康豚鼠2只，腹腔注射菌苗1.5ml，觀察7日，應(yīng)無(wú)死亡。
3.4.2防腐劑試驗(yàn)
用體重18～20g之健康小白鼠2只，每只皮下注射菌苗0.5ml，用苯酚作防腐劑的菌苗注射之小白鼠會(huì)發(fā)生戰(zhàn)栗癥狀，但不應(yīng)超過(guò)半小時(shí)，觀察7日，不得有局部膿腫或死亡。
4 保存與效期
應(yīng)保存于2～8℃。自稀釋之日起效期為1年半。如原液保存超過(guò)1年稀釋，應(yīng)相應(yīng)縮短效期（自原液采集之日起總效期不得超過(guò)2年半)。
