華山參片—總生物堿的測定—分光光度法

本方法采用分光光度法測定華山參片中總生物堿（以莨菪堿計算)的含量。

本方法適用于中成藥華山參片。

供試品片粉用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液振搖定量提取，取續(xù)濾液一定量與溴甲酚綠反應(yīng)后，用氯仿提取數(shù)次，合并氯仿并定容。氯仿置紫外可見分光光度計, 于波長415nm處測定吸收度，以莨菪堿（C₁₇H₂₃NO₃)計算總生物堿含量。

1. 枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0)

2. 氯仿

3. 0.04%溴甲酚綠：用枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0)溶液配制。

1. 紫外-可見分光光度計

2 .分液漏斗

1. 對照品溶液的制備

精密稱取在120℃干燥至恒重的硫酸阿托品，加水制成每1mL相當(dāng)于含莨菪堿7μg的溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品40片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)12片的重量)，置具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0)25 mL，振搖5分鐘，放置過夜，用干燥濾紙過濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。

供試品的測定

精密量取供試品溶液與對照品各2mL，分別置分液漏斗中，各精密加入枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液（pH4.0)10 mL，再精密加入用上述緩沖液配制的0.04%溴甲酚綠2mL，搖勻，用10mL氯仿振搖提取5分鐘，待溶液完全分層后，分取氯仿液，用氯仿濕潤的濾紙濾入25mL量瓶中，再用氯仿提取3次，每次5mL，依次濾入量瓶中，并用氯仿洗滌濾紙，濾入量瓶中，加氯仿置刻度。照分光光度法，分別在415nm波長處測定吸收度。

注：分光光度法應(yīng)以配制供試品的同批溶劑為對照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波長作為測定波長，一般供試品的吸收度讀數(shù)，以在０.３－０.７之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測得的吸收度偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減少狹縫寬度時供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計算含量。