從DNA水平上尋找確診遺傳病的指標(biāo)或探討遺傳病和腫瘤的病因等方面，已取得很大成績(jī)，這對(duì)產(chǎn)前診斷，早期確診和突變基因攜帶者的檢出等都有重要意義。所用的方法大體有以下幾種。
一、分離基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析
利用DNA離體轉(zhuǎn)化，制備探針，制備基因文庫(kù)進(jìn)行篩檢，最后鑒定載體中插入DNA片段的特性等一系列技術(shù)，可以設(shè)法分離出目的基因或某一特定的DNA順序。然后通過(guò)DNA核苷酸順序分析可以弄清楚某些疾病的病因。比如，人體癌基因的分離和研究癌基因同原癌基因在DNA的結(jié)構(gòu)與功能上的差別，對(duì)了解細(xì)胞癌變的機(jī)制起了很大的作用。分離目的基因或?qū)Ｒ籇NA順序更常用的是制備分子雜交探針，通過(guò)Southern印跡雜交或Northern印跡雜交等，了解某些遺傳病患者基因結(jié)構(gòu)上的差別，從而找到可靠的診斷方法。比如，患者的基因是否缺失，重排以及是否存在限制性片段長(zhǎng)度的多肽現(xiàn)象等。醫(yī).學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供
二、DNA限制性片段多態(tài)性連鎖分析
DNA限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性（restricition fragment length polymorphism, RFLPs)連鎖分析法是指由于缺失、重排或堿基置換的結(jié)果，使DNA分子中原有的某種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)發(fā)生改變，或是消失或是增加，所以酶切后生成的DNA片段的長(zhǎng)度也隨之改變。這種DNA限制性片段長(zhǎng)度的變化往往同某種疾病的連鎖關(guān)系，因而可作為這種疾病的診斷指標(biāo)。
如果所分析的DNA分子不太大，比如人體線粒體DNA，長(zhǎng)16569bp。在這種DNA分子上每種限制酶的識(shí)別點(diǎn)不過(guò)幾個(gè)到幾十個(gè)，因此，當(dāng)某種限制酶的識(shí)別點(diǎn)發(fā)生改變并經(jīng)過(guò)這種酶切后，可清楚地看到DNA電泳帶的圖型發(fā)生改變，條帶或者增加或是減少，條帶所處的位置也有變化�？墒牵z傳病病例分析時(shí)所用的是基因組DNA，而基因組DNA從限制酶酶切后至少會(huì)生成100萬(wàn)個(gè)片段，多的可達(dá)1000萬(wàn)個(gè)片段。如果其中有一、二個(gè)片段發(fā)生改變，不可能從電泳凝膠上直接觀察分辨。此時(shí)就必定要用合適的探針。某個(gè)目的基因或某一特定的DNA片段，在同酶切后的DNA作分子雜交后，可在曝光的X線片上看到RFLP。圖23-8是用分子雜交法檢測(cè)RELP示意圖。
圖23-8 分子印跡雜交法則 RFLPs的示意圖
這是通過(guò)限制酶A識(shí)別點(diǎn)的改變出現(xiàn)DNA的RFLP，再以合適的DNA片段作為分子雜交的探針，在探針上標(biāo)記了放射性同位素，同分別經(jīng)酶A，酶B完全酶切的DNA作印跡雜交。在曝光后的X線片上可看到不同的雜交帶圖型。①是正常個(gè)體，經(jīng)酶A和酶B切后的DNA同探針雜交，都只看到一條帶。②是一個(gè)雜合子即隱性突變基因攜帶者的雜交圖式，由于它的一條染色體的DNA分子中酶A的識(shí)別點(diǎn)發(fā)生改變，酶切后的DNA片段較原來(lái)的長(zhǎng)，所以出現(xiàn)一長(zhǎng)一短兩個(gè)片段。③是突變基因純合子，也就是患者，酶A和B的酶切片段雖然是各有一個(gè)，但A的片段比正常的個(gè)體長(zhǎng)，所以雜交帶出現(xiàn)的位置也有改變。從圖23-8可以看出研究RFLP的兩個(gè)重要因素，一是要制備合適的探針，二是要用盡可能多的各種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切和雜交。醫(yī)學(xué)全在線www.med126.com
1974年首次用RFLP作為遺傳學(xué)分析的方法。1978年簡(jiǎn)悅威和Dozy等第一次用人體β珠蛋白基因作為探針，同限制酶Hpa Ⅰ酶切的DNA做雜交，發(fā)現(xiàn)了DNA的RFLP與鐮形細(xì)胞貧血之間的關(guān)系（表23-4)。
表23-4 DNA的RFLP與鐮形細(xì)胞貧血的關(guān)系
| Hb基因型 |
Hpa Ⅰβ珠蛋白基因片段（kb) |
總計(jì) |
13.0kb片段的頻率 | ||||
|
7.6/7.6 |
7.6/7.0 |
7.0/13.0 |
7.6/13.0 |
13.0/13.0 | |||
| 黑人AA |
8 |
6 |
0 |
2 |
0 |
15 |
0.03 |
| AS |
5 |
1 |
1 |
9 |
0 |
16 |
0.31 |
| SS |
0 |
0 |
0 |
4 |
11 |
15 |
0.87 |
| 白人AA |
12 |
0 |
0 |
0 |
0 |
12 |
0 |
| 亞洲人AA |
15 |
0 |
0 |
0 |
0 |
15 |
0 |
由此可以看出，HpaⅠβ珠蛋白基因13.0kb片段可作為檢出鐮形細(xì)胞貧血及攜帶者的一種指標(biāo)。1981年Geever等根據(jù)鐮形細(xì)胞貧血是β珠蛋白第6個(gè)密碼子的一個(gè)核苷酸置換的結(jié)果，用限制酶DdeⅠ酶切DNA后與β珠蛋白基因雜交。結(jié)果是：Hb基因型AA的正常個(gè)體有175bp和201bp二條帶。SS個(gè)體即患者只有一條帶，是正常人兩個(gè)DNA片段長(zhǎng)度之和，即376bp。AS雜合子則有三條帶：175bp、201bp、376bp。其原因是第6個(gè)密碼子中的A被T置換，使Hb A變成了HbS。限制酶DdeI的識(shí)別順序?yàn)镃↓TNAG，當(dāng)A變成T后，該部位DNA順序變成CTNTG，從而丟失了一個(gè)DdeI識(shí)別位點(diǎn)，所以HbA的2個(gè)DdeI片段（175bp、201bp)變成了HbS的一個(gè)DdeI片段（175+201=376bp)。
