六、泌尿系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用
（一)利尿藥及腎功能測定實(shí)驗(yàn)中動物的選擇應(yīng)用
1．利尿藥及抗利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)：要判斷所試藥物是否有利尿作用，可選用大白鼠、小白鼠、貓或狗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中以大白鼠較為常用。對人體有利尿作用的藥物均可在大白鼠實(shí)驗(yàn)中獲得較好的利尿效果，但汞撒利的作用較差。因此篩選利尿藥實(shí)驗(yàn)的首選動物雖多采用大白鼠，必要時還應(yīng)再選用另一種動物實(shí)驗(yàn)，加以驗(yàn)證。
收集動物尿液的方法可分為兩大類：一是用代謝籠收集較小動物24小時以內(nèi)的尿液量，稱為“代謝籠實(shí)驗(yàn)法”，適用于大白鼠及小白鼠。為了防止尿液的蒸發(fā)和糞便的污染，可選用特別的集尿裝置或用濾紙吸導(dǎo)尿液加以稱重，用此類方法時，實(shí)驗(yàn)環(huán)境（氣溫和濕度)的影響較大，應(yīng)予控制，室溫以20℃左右為宜。二是直接自輸尿管或膀胱收集尿滴，適用于貓、狗、家兔和大白鼠，實(shí)驗(yàn)可在較短時間內(nèi)完成，受外界環(huán)境影響也較少，但動物處于麻醉狀態(tài)下，與清醒動物還有區(qū)別。欲進(jìn)行清醒動物的利尿?qū)嶒?yàn)，可采用膀胱瘺法，即預(yù)選給狗或貓進(jìn)行膀胱瘺手術(shù)，二周后切口愈合，再將動物固定于特制支架上收集尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)中，家兔不是首選動物，但因其價廉易得，某些初篩實(shí)驗(yàn)也可用家兔代替家犬進(jìn)行直接集尿的實(shí)驗(yàn)．過去曾用膀胱套管法，由膀胱做切口插入套管，再做荷包縫合，但方法復(fù)雜，套管內(nèi)的尿液往往不能順利流出，不如用聚乙烯塑料套管直接插入輸尿管為好。常選用2kg以上健康雄性家兔作實(shí)驗(yàn)。
2．腎清除率測定實(shí)驗(yàn)：腎清除率是檢查腎功能的一項(xiàng)重要方法。它表示腎臟對血液里某物質(zhì)的清除能力，還可以了解腎血流量，游離水的生成和重吸收等方面的情況。狗和大鼠均可用來作清除率試驗(yàn)。大鼠較易獲得，較易飼養(yǎng)，成本低，實(shí)驗(yàn)時藥品消耗少，在急性實(shí)驗(yàn)時較易在清醒狀態(tài)下作清除率測定。
菊糠清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠進(jìn)行。清除率是指每毫升血漿“清除”物質(zhì)的比例。血漿里物質(zhì)大多能被腎小球?yàn)V過，又能被腎小管細(xì)胞分泌或重吸收。唯獨(dú)菊糖僅被腎小球?yàn)V過，而不被腎小管細(xì)胞分泌重吸收，故它的清除率就是腎小球?yàn)V過率。
游離水清除率實(shí)驗(yàn)常選用健康成年狗進(jìn)行，游離水清除率實(shí)驗(yàn)，是一種測定尿中游離水生成的方法。利用這種方法可以衡量腎臟對尿液濃縮和稀釋的能力，分析利尿藥對尿濃縮和稀釋機(jī)制的影響，從而推測利尿藥的作用部位。
對氨基馬尿酸清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗，但以大白鼠更為常用。對氨基馬尿酸的清除率可作為有將腎血漿流量的客觀指標(biāo)。
3．截流分析實(shí)驗(yàn)：截流分析實(shí)驗(yàn)常選用10kg以上健康狗做實(shí)驗(yàn)。截流技術(shù)系一種分析腎小管各段運(yùn)轉(zhuǎn)功能的方法，利用這種方法可對利尿藥作用部位進(jìn)行初步分析。
4．腎小管微穿刺實(shí)驗(yàn)：腎小管微穿刺（Micropuncture)技術(shù)，于1941年開始應(yīng)用于哺乳動物腎臟研究，近年來更獲得很大進(jìn)展，發(fā)展了微量注射，微量灌流等技術(shù)，對離子及其他物質(zhì)在腎小管的不同節(jié)段中的轉(zhuǎn)動過程，作了精確的闡明；用于利尿劑的研究，則可探測對單個腎單位功能的影響以及藥物的作用部位。該實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗進(jìn)行。如欲穿刺集合管，可用幼年大白鼠或金地鼠；如欲穿刺腎小球，常用Munich-Wistar大白鼠，因其腎小球位置表淺，易于穿刺。大鼠體重一般采用200～250g較好。
�。ǘ�)泌尿系統(tǒng)疾病的動物模型
1．腎炎
⑴腎小球腎炎：Masugi型腎炎動物模型是選用羊抗兔腎血清引起兔或大白鼠的腎小球腎炎。羊抗兔血清制備是選用體重2kg左右健康兔處死后取出腎臟，插入導(dǎo)管，反復(fù)用生理鹽水沖洗，然后將皮質(zhì)與髓質(zhì)分開，用腎皮質(zhì)5g研成勻漿與弗氏完全佐劑混勻成10ml，再加生理鹽水使總量達(dá)30ml。此混懸液給綿羊皮下或肌肉多處注射共4次，每2周1次，于末次注射后2周采羊血分離出血清，用等量兔紅細(xì)胞吸附，置于4℃一整夜以吸去血清中可能存在的抗兔血細(xì)胞抗體，經(jīng)離心，取上清液置于56℃水浴中半小時滅活。通過上述處理的血清給健康兔靜脈注射，每次0.5～2.0ml，隔半小時一次，約連續(xù)注射3～5次出現(xiàn)蛋白尿?yàn)闃?biāo)志，可認(rèn)為已形成了嚴(yán)重的腎小球腎炎。
�、�慢性腎小球腎炎：動物模型是用異種動物（兔、大白鼠、狗)腎小球基底膜和弗氏佐劑，給綿羊或獼猴注射，可復(fù)制成慢性腎小球腎炎。獼猴以選用2.2～4,5kg體重的健康猴較好。
�、钱惙N蛋白引起的腎炎：可先由靜脈注入異種蛋白以使動物致敏，然后將蛋白直接從動脈作決定性注射，以引起急性腎炎。兔耳靜脈注入不稀釋的雞蛋白1～6ml，每次間隔4～5天，共注射4～5次，末次致敏注射后6～12天手術(shù)，在無菌條件下，打開腹腔分離出腎動脈，經(jīng)由套在注射器上特殊玻璃小管，向一側(cè)或兩側(cè)注入不稀釋的雞蛋白1～3ml，作為決定性的攻擊。在注入蛋白后，用手指壓迫和用線結(jié)扎腎動脈約5～6分鐘。經(jīng)上述處理的動物大多數(shù)皆能造成典型的腎炎病變。給狗腹腔注射馬血清，每次5ml，6天1次，共注射13次，于第14次向腎動脈注入5ml馬血清也可引起實(shí)驗(yàn)性腎炎。本法造成的腎炎病變，與人類腎炎的病理改變很相似。
�、菶CHO9病毒引起腎小球腎炎：選用出生6天的HAM/ICR系小鼠，每只用含ECHO9病毒的腎組織培養(yǎng)液0.1ml腹腔注射，注射6天后，幼鼠腎組織學(xué)改變類似于急性腎小球腎炎。腎小球細(xì)胞增生，腎小管內(nèi)有透明管型。注射2～3周，幼鼠腎小球損害可達(dá)高峰，6周后減輕甚至消失。
2．自身免疫腎小管間質(zhì)性腎炎
腎臟含有特殊的抗原，它僅存在于小腎皮質(zhì)。用兔腎皮質(zhì)中腎小管的基底膜與弗氏完全佐劑免疫豚鼠，可造成自身免疫腎小管間質(zhì)腎炎。在無菌條件下，取出新西蘭兔的腎臟，用等滲的氯化鈉溶液灌注，置于－25℃冰箱中過夜,而后取出緩慢地融化。去掉腎髓質(zhì)部分，將皮質(zhì)搗碎，通過150目金屬篩后，盛于冷容器中，先用鹽水清洗，接著用pH7.1的磷酸緩沖液反復(fù)清洗，再經(jīng)過1500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。因腎小球較腎小管沉淀得快，經(jīng)顯微鏡證實(shí)，棄去細(xì)胞殘?jiān)�，將含有豐富腎小管的上層液與弗氏完全佐劑制成腎小管基底膜的乳化劑（TBM乳劑)，這種制劑中含有腎小管約90%和少量腎小球。每毫升含和TBM濕重15mg。選用體重400～500g的雄性豚鼠，每2周在背部皮膚分別選6個點(diǎn)作皮下注射，每點(diǎn)注乳劑0.1ml。經(jīng)32天后處死動物�？梢娔I臟腫脹，表面有小瘀斑。組織學(xué)檢查可見有典型的間質(zhì)性腎性病變。
3．腎病
�。�1)升汞中毒性腎�。河貌煌瑵舛鹊纳芤航o狗、家兔和大白鼠皮下或肌肉注射，可造成基本病變相似的壞死性腎病。給實(shí)驗(yàn)前造成輸尿管瘺或膀胱瘺的狗。用2%升汞溶液按20mg/kg的劑量由腹部皮下注射。1～2小時后，尿量急劇增多，為原來的5～10倍，比重由1.007降至1.001。數(shù)小時后，尿量開始下降，第二天發(fā)展為少尿或無尿，比重增高1.045～1.049，有少量蛋白。家兔用1%升汞溶液皮下注射，每次0.75～0.80ml，每天1次，5天可致腎病發(fā)生。大白鼠、小白鼠按6～15mg/kg的劑量皮下注射。小白鼠對升汞敏感性個體差異大，但也能發(fā)生明顯的壞死性腎病。適用體重190～250g大白鼠按12mg/kg的升汞劑量肌肉注射。24小時內(nèi)動物腎功能受損，腎小球?yàn)V過率進(jìn)行性減少，近曲小管水的重吸收減少以及管內(nèi)壓降低，尿量可少于3ml/24小時。
�。�2)藏紅花紅O造成的腎�。哼x用家兔作實(shí)驗(yàn)。用加熱37℃的任-洛氏液配制成1%藏紅花紅O溶液，由兔耳緣靜脈注入，總量為30mg，分2次注入，間隔3小時。注后24小時動物血清尿素氮顯著增高，血清鉀、鈉也升高，伴有不同程度代謝性酸中毒。藏紅花紅O可選擇性地引起近端和遠(yuǎn)端明曲管上皮廣泛壞死，造成的模型與臨床表現(xiàn)較一致，故在國內(nèi)較為常用。
在動物身上復(fù)制泌尿系統(tǒng)的結(jié)石是比較困難的，也不能復(fù)制人體結(jié)石形成的全部復(fù)雜過程。一般是以異物移植入膀胱內(nèi)，也有用維生素A的食物飼養(yǎng)動物或清注細(xì)菌等方法造成。有文獻(xiàn)報導(dǎo)，用乙二醇（Ethylene Glycol)和乙醛酸鈉（Sodium Glyoxylate)中毒時，在腎內(nèi)形成草酸鈣結(jié)晶，有利于結(jié)石的發(fā)生。
（1)植入異物造成膀胱結(jié)石：選用大白鼠，無菌手術(shù)切開膀胱，植入異物后縫合，術(shù)后加強(qiáng)護(hù)理，經(jīng)4～10周后，多數(shù)動物可形成結(jié)石。異物可選用石臘、人的泌尿道結(jié)石碎塊、鉛、鋅、磷等，使其大小不得超過3～4mm直徑，金屬異物應(yīng)是均勻一致的圓形物，平均重疊約2.5mg。
�。�2)食餌性的泌尿系結(jié)石：選用大白鼠（也可用小白鼠、豚鼠或家兔)飼喂維生素A缺乏的食物而引起。最好選用出生一個月左右的幼年雄性大白鼠（雄性動物體內(nèi)維生素較雌性少，且生長較快)，每3天稱重1次，用維生素A缺乏的食物飼養(yǎng)，經(jīng)過10～14天后動物體重下降，生長停滯，有干眼病表現(xiàn)。在30～60天中14%動物發(fā)生了膀胱結(jié)石，經(jīng)180～250天后，膀胱結(jié)石發(fā)生率可達(dá)88%，腎結(jié)石為41%。
