（五)血管阻力測定
器官或局部血管恒速灌流泵法：根據(jù)血管阻力（R)與灌流壓（P)成正比，與流量（Q)成反比的原理，可以用各種流量計(jì)測定血流量，并且同步記錄動脈血壓（即灌注壓)，用上述原理即可推算出血管阻力，常選用體重12公斤以上的狗作實(shí)驗(yàn)，可采用內(nèi)頸動脈灌流法、椎動脈灌流法、后肢血管灌流法、腎動脈灌流法等測定血管阻力。還可選用體重250克以上的大白鼠，采用后肢及腎動脈灌流法來測定血管阻力。大白鼠腹主動脈與下腔靜脈緊貼在一起，分離腹主動脈時(shí)，不要弄破下靜脈造成出血；插入腹主動脈灌流用的塑料管位置要適當(dāng)，以保持后肢灌流通暢，如有扭曲，血管阻力急劇升高，造成人為誤差。塑料插近可拉成葫蘆形，以便結(jié)扎固定于腹主動脈內(nèi)；為使血壓穩(wěn)定，可輸注適量6%小分子右旋糖酐。大白鼠血壓和血管阻力對藥物反應(yīng)敏感，且大白鼠消耗藥量少，又節(jié)約人力，最適合于篩選新藥和研究心血管藥理。但大白鼠血壓和阻力記錄有時(shí)不及狗穩(wěn)定，對某些藥物反應(yīng)的特異性及動物種屬的差異還有待積累資料。
藥物對血管的作用，除了在整體動物身上觀察分析其作用外，還可在離體情況下進(jìn)行。其原理都是使動物的器官與身體血液循環(huán)隔斷聯(lián)系，人工地用適當(dāng)?shù)娜芤海ㄈ缏迨弦?從動脈近心端灌入，并以一定壓力使灌流液經(jīng)組織毛細(xì)血管至靜脈流出，以維持器官的生理功能，從灌流液的流量可反應(yīng)該器官的血管阻力變化情況。常選用兔耳、下肢、肝、腎、腸系膜血管灌流。帶神經(jīng)離體兔耳血管灌流法用于分析舒約縮血管的作用部位。藥物注射于軀體或另一兔耳，如能增加或減少帶神經(jīng)的兔耳灌流量，說明是間接作用，如藥物直接注入帶神經(jīng)的兔耳上才發(fā)生反應(yīng)，則是直接作用。離體兔耳血管灌流法用以觀察分析舒縮血管藥物對兔耳血管的直接作用。離體兔耳血管因無中樞控制，血管張力降低，對收縮血管藥敏感；對擴(kuò)張血管藥敏感性稍低，灌流壓應(yīng)根據(jù)流量酌情調(diào)節(jié)。
大白鼠離體膈肢交叉灌流法，從甲鼠的頸動脈引出血液，灌注到受血動物乙鼠的離體后肢，通過接受器和泵使灌注血回到甲鼠頸靜脈。在該制備中，利用乙離離體后肢只保留神經(jīng)與其它部分聯(lián)系，故藥物只能通過神經(jīng)影響后肢；而給予甲鼠的藥物，則只通過血流來影響所灌注的后肢血管；以此來觀察分析藥物是直接作用還是通過神經(jīng)起作用。還可采用大白鼠離體后肢灌流法和大白鼠離體后肢自身灌流法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。大白鼠腎臟灌流實(shí)驗(yàn)法可用于研究腎血管阻力等血液動力學(xué)變化及腎臟重吸收、分泌等生理生化功能。
四、消化系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用
�。ㄒ�)消化系統(tǒng)分泌實(shí)驗(yàn)
1．胃液分泌實(shí)驗(yàn) 胃液收集常選用狗和大白鼠。由狗右側(cè)嘴角插入胃管收集胃液，大白鼠則需剖腹，從幽門端向胃內(nèi)插入一直徑約3mm的塑料管，在緊靠幽門處結(jié)扎固定，以收集胃液，可進(jìn)行胃酸的測定和胃蛋白酶的測定。
2．胰液分泌實(shí)驗(yàn) 胰液收集可選用狗、兔或大白鼠。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，狗在主胰管開口十二指腸降部，距幽門12cm左右處，要將十二指腸翻轉(zhuǎn)，在其背面即可找到。兔的胰腺很分散，胰管位于十二指腸的升段，距離幽門約17cm左右處。分別向主胰管內(nèi)插入細(xì)導(dǎo)管收集胰液。大白鼠的胰管與膽管匯集于一個總管，在其入腸處插管固定，并在近肝門處結(jié)扎和另行插管，就可分別收集到膽汁和胰液。大白鼠的胰液很少，插入內(nèi)徑約0.5mm的透明導(dǎo)管后，以胰液充盈的長度作為觀察胰液分泌的指標(biāo)。慢性實(shí)驗(yàn)時(shí)可選用狗作胰瘺手術(shù)后收集胰液。
3．膽汁分泌實(shí)驗(yàn)為了觀察某些藥物對泌膽、排膽以及存在于膽系內(nèi)結(jié)石的影響，需要研究用藥前后膽汁流量及其成分的變化。膽汁可分別給動物作膽囊瘺和總膽管瘺收集。膽囊瘺常選用狗、貓、兔和豚鼠進(jìn)行，而以狗為佳。在全麻下進(jìn)行手術(shù)，以右肋緣下橫切口的暴露最為滿意。如欲觀察肝膽汁的分泌情況需要結(jié)扎膽囊管或選用大鼠，因后者無膽囊，所以作總膽管造瘺手術(shù)常選用大白鼠。收集膽汁后可進(jìn)行各種膽汁的化學(xué)分析。
�。ǘ�)消化系統(tǒng)運(yùn)動實(shí)驗(yàn)
1．動物離體標(biāo)本實(shí)驗(yàn)消化道平滑肌具有肌源性運(yùn)動的特點(diǎn)，動物離體的腸段、膽囊、乃至胃腸肌片，只要具有合適的存活環(huán)境就可保持其運(yùn)動機(jī)能。這是藥理學(xué)研究中常用的一種離體實(shí)驗(yàn)方法，這具有實(shí)驗(yàn)條件較易控制、操作較簡單、用一般儀器設(shè)備即能工作等優(yōu)點(diǎn)，從而應(yīng)用較廣。
標(biāo)本制備大都選用兔、豚鼠、大白鼠等動物的組織，也可利用手術(shù)中取下或猝死剖檢時(shí)取下的消化道器官進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
取禁食24小時(shí)的動物，通常用擊頭致斃法處死，以避免麻醉或失血等對胃腸運(yùn)動機(jī)能的影響。立即常規(guī)剖腹，取出所需的胃、腸、膽囊等，去除附著的系膜或脂肪等組織。迅速放在充氧（或含5%CO2)、保溫（37℃)的保溫液中，并以注射器用保溫液將管腔內(nèi)的食物殘?jiān)磧�。操作時(shí)動作要輕柔，沖洗時(shí)不宜采取高壓以免疫組織攣縮。
若以肌片為標(biāo)本，一般剪取1～5mm寬，1～2cm長的一段即可。若用動物的腸管做實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常取十二腸或回腸。十二指腸的興奮性、切律性較高，呈現(xiàn)活躍的舒縮運(yùn)動�；啬c運(yùn)動比較靜息，其運(yùn)動曲線的基線比較穩(wěn)定。所用的標(biāo)本大都取1.5cm左右一段即可。以狗的膽囊做實(shí)驗(yàn)時(shí)可截取4mm寬，2cm長的全層肌片。兔、豚鼠等的膽囊較小，取材時(shí)常與膽管一起摘下。兔的膽囊可沿其長軸一剖為二，豚鼠則可以整個膽囊或取其半進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。做膽管的離體實(shí)驗(yàn)量，通常取狗的總膽管，將相聯(lián)的十二指腸組織切除，留下乳頭以及膽道末端括約肌組織。
離體胃、腸運(yùn)動的電活動，除了峰形電位外還可記錄到周期性的慢波。它們在胃腸道的不同部位以及不同種屬的動物間存在一定差異（見表10-32)。
表10-32 離體胃腸組織的慢波頻率（次/分)
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組 織 |
人 |
狗 |
貓 |
|
胃 |
3 |
5 |
4 |
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十二脂腸 |
12 |
18 |
18 |
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空 腸 |
10 |
17 |
16 |
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回 腸 |
8 |
10 |
12 |
2．消化器官運(yùn)動在體實(shí)驗(yàn) 利用整體動物觀察消化道動物的方法很多，諸如腸管懸吊法、內(nèi)壓側(cè)定法、生物電記錄法、腹窗直視法以及X線檢查等等。這皯方法各有所長，也各有其不足之處，在進(jìn)行藥理研究時(shí)可以酌情選用。
常選用狗、貓或兔，擇其健康成年者，性別不構(gòu)。由于巴比妥麻醉劑對消化道運(yùn)動有抑制作用，故有些作者用貓或兔做實(shí)驗(yàn)時(shí)，愿意用烏拉坦1.0～1.5g／kg靜脈或腹腔注射進(jìn)行麻醉。觀察膽道系統(tǒng)的運(yùn)動則以母狗為佳，因?yàn)槔吖禽^大容易暴露。在禁食12～24小時(shí)后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
進(jìn)行膽道口括約肌部膽道內(nèi)壓測定實(shí)驗(yàn)時(shí)，大都選用狗或貓，也可用兔。狗的膽道位置較深，要求良好的手術(shù)暴露。貓的總膽管相對地較粗，操作也較容易，但手術(shù)耐受性稍遜于狗。兔的總膽管容易瓣認(rèn)，壺腹部明顯地呈現(xiàn)于十二指腸第1段的表面，但組織纖維，操作時(shí)務(wù)必仔細(xì)。狗的總膽管粗約2～3mm，位于十二指腸降部、循小網(wǎng)膜右緣而下，在下腔靜脈之前、門脈之右。
�。ㄈ�)催吐、鎮(zhèn)吐、厭食實(shí)驗(yàn)
1．催吐和鎮(zhèn)吐實(shí)驗(yàn)常選用狗和貓做實(shí)驗(yàn)。給狗皮下注射鹽酸阿樸嗎啡1mg/kg；注后2～3分鐘就可以引起惡性嘔吐。用1%硫酸銅或硫酸亞鉛溶液50ml給狗灌胃，約2～3分鐘后也可引起嘔吐，但幾乎無惡性現(xiàn)象。
2．厭食實(shí)驗(yàn) 這是防治肥胖病及其并發(fā)癥的研究內(nèi)容之一�？梢赃x用狗、貓、大鼠、小鼠等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，猴因有頰囊，且有精神因素參與，故選用者不多。狗容易嘔吐，也有行為因素，故也不理想。一般多選用大白鼠。
�。ㄋ�)消化系統(tǒng)常見病動物模型
1．胃病 急性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠。實(shí)驗(yàn)前禁食24小時(shí)，以水楊酸制劑（如20ml的阿司匹林或水楊酸溶液)按100mg/kg給藥，或以10ml的醋酸或不同濃度的鹽酸（1、10、100ml)，或同種動物膽汁、2ml的牛磺膽酸、15%的乙醇等單獨(dú)或幾種合用灌胃，4小時(shí)后動物胃內(nèi)發(fā)急性彌慢性炎癥變化。
慢性胃炎的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用慢性胃瘺狗，每日經(jīng)瘺灌70～75℃的熱水300ml，連續(xù)60天后可引胃粘膜萎縮，胃酸減少甚至缺失。還可用同種或自身的胃液（按4～5ml/kg取胃液，并濃縮50倍)，或胃粘膜的生理鹽水的組織勻漿與Freund佐劑以1：1配成乳劑，皮下注射進(jìn)行免疫，隔15～30天再注射一次，即可誘發(fā)致胃粘膜發(fā)生細(xì)胞浸潤及萎縮性病變。
急性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用200～250g的成年大白鼠，用浸水刺激造成應(yīng)激性潰瘍。
結(jié)扎大白鼠幽門可誘發(fā)成胃潰瘍，其成功率與動物禁食情況以及結(jié)扎后經(jīng)歷的時(shí)間等有關(guān)。一般誘發(fā)成功率達(dá)85～100分，是最常用的模型之一。
組織胺法常選用雄性白色豚鼠，禁食18～24小時(shí)，全麻下找出十二指腸，在十二脂腸的膽管開口上方夾一動脈夾造成狹窄，以使胃液潴留并防止十二脂液返流入胃。皮下注射磷酸組織胺水溶液（2.5～7.5mg/kg，根據(jù)動物品種而劑量不同)，1小時(shí)后即可恒定地復(fù)制出胃潰瘍。
慢性胃潰瘍的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠�？捎脽崂臃ɑ虼姿峤䴘⒃斐晌副趽p傷形成潰瘍。熱烙法是在無菌剖腹后，以3mm粗的15W電烙鐵加熱至45℃左右，灼烙腺胃約5秒種后粘膜出現(xiàn)水腫，6小時(shí)后有明顯出血。醋酸浸潰法可用10%或20%醋酸溶液0.05ml，用0.01ml刻度的結(jié)核菌素注射器利用26號皮內(nèi)針頭作胃壁粘膜注射或以棉簽蘸100％醋酸溶液通過內(nèi)徑5mm的玻璃管涂敷胃漿膜面或剖開胃腔涂于粘膜面引起腐蝕性潰瘍。
2．腸病 腸梗阻實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用狗。在單純結(jié)扎腸管24小時(shí)后，即可見梗阻以上腸段明顯擴(kuò)張。也可采取結(jié)扎腸系膜血管、人工造成腸套或腸扭轉(zhuǎn)等方法復(fù)制。
腸粘膜實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ屯ǔ＿x用狗，不能選草食動物，因其闌尾無論在結(jié)構(gòu)或機(jī)能上均與人的闌尾有較大差別。狗雖也差別，但狗的闌尾粗而長，容易處理。
潰瘍性結(jié)腸炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ涂梢赃x用大白鼠，通過免疫方法制備。一般是用同種或異種動物的結(jié)腸粘膜勻漿加Freund佐劑，給大白鼠足跖肉墊內(nèi)注射，約10天后隨著血清抗結(jié)腸粘膜抗體滴度的升高和便血，在盲腸與結(jié)腸出現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎變化。也可給兔結(jié)腸漿膜下反復(fù)多次注射卵白蛋白或向兔的上腸系膜動脈內(nèi)注射內(nèi)毒素均可造成潰瘍性結(jié)腸炎變化。
3．腹膜炎 細(xì)菌性腹膜炎是以生理鹽水稀釋肉湯培養(yǎng)的大腸桿菌液，制成1×108/ml菌量的懸液，給豚鼠腹腔注射可以規(guī)律性地引起嚴(yán)重的腹膜炎，大都在24～48小時(shí)內(nèi)死亡。若菌量小，毒力低，有進(jìn)就不易造成實(shí)驗(yàn)性腹膜炎，用大鼠和小鼠做實(shí)驗(yàn)時(shí)尤其如此。
4．胰腺炎 急性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ痛蠖歼x用雄狗，且以體重在15公斤以上者為佳。較小的狗狗胰管細(xì)，雌狗脂肪多，均可影響手術(shù)操作。在無菌操作下，分離出主胰管。若在結(jié)扎主胰管的同時(shí)，飼以高蛋白、高脂肪食物，或注射促胰激素使胰液分泌增加，可以誘發(fā)一過性的胰腺水腫，如果在結(jié)扎胰管的同時(shí)暫時(shí)阻斷胰動脈或以有活性的胰蛋白酶作動脈內(nèi)注射則可導(dǎo)致現(xiàn)血性胰腺炎。
慢性胰腺炎實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ统＿x用大白鼠或豚鼠，以含0.5％量的dl-乙硫氨酸飼料喂養(yǎng)動物1～2個月；或每日用該藥250mg作腹腔注射，連續(xù)10天即可引起胰腺泡破壞和炎細(xì)胞浸潤。也可選用大白鼠，用20％乙醇置于滴瓶中代替飲水，讓動物自由吮吸，持續(xù)8個月以上，即可使胰腺細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)脂肪滴，線粒體和胞漿呈退行性變。若飲用20～30個月則可出現(xiàn)腺泡萎縮、腺管上皮增殖，小葉內(nèi)有散在結(jié)締組織增生以及腺管內(nèi)出現(xiàn)蛋白栓等變化。
5．膽結(jié)石 使動物膽道發(fā)生感染，膽汁淤積，膽固醇代謝發(fā)生障礙等均可使動物膽道形成膽石。復(fù)制膽石模型的方法很多，食餌法，常選用敘利亞地鼠，體重60g左右，喂高糖、不含非飽和脂肪酸飼料（蔗糖74%、酪蛋白21%、食鹽4.4%、膽堿0.1%、濃縮魚肝油0.5%)，每只地鼠5～9g/次，每天2次，14～21天膽囊內(nèi)形成明顯結(jié)石，22天后成石率高達(dá)100%。也有選用健康雌性豚鼠，飼鼠基礎(chǔ)食料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、豬油1%、纖維素1%、膽酸0.02%、膽固醇0.05%的成石飼料，2個月后在90%的豚鼠膽囊中產(chǎn)生了以膽色素為主的結(jié)石，其成份和結(jié)構(gòu)與人類的膽色素結(jié)石相似。
感染成石法常選用健康成年家兔、大白鼠成狗。采用無菌手術(shù)，暴露家兔十二指腸，從十二指腸乳頭插入塑料管，由此管注入蛔蟲卵或大腸桿菌，同時(shí)還可從此管抽取膽汁進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)和分析。注入蛔蟲卵后7個月，膽囊內(nèi)可形成結(jié)石。狹窄成石法常選用健康成年家兔、狗或猴，但家兔的誘發(fā)率高。無菌手術(shù)探明膽道及膽囊正常，用銀夾適當(dāng)?shù)貖A住兔膽囊頸部，以產(chǎn)生部分梗阻。結(jié)果6個月后家兔膽囊中有明顯結(jié)石形成。
切除迷走神經(jīng)干成石法常選用成年狗或兔。采用無菌手術(shù)探明家兔膽道及膽囊正常，然后暴露胃、賁門及食管，將食管懸吊，暴露兩側(cè)迷走神經(jīng)干，分離后從食管下端切除兩側(cè)迷走神經(jīng)干各1.5～2cm，手術(shù)后4～5周有膽固醇結(jié)石形成。
異物植入成石法常選用成年健康狗或兔。動物麻醉后，在無菌操作下暴露膽囊，在膽囊底部剪一小口，植入蛔蟲碎片或人膽石、線結(jié)、橡皮等，用小圓針荷包縫合剪口，植入2～3月后膽囊內(nèi)可見到多數(shù)黑色細(xì)砂，植入的異物可被墨綠色的膽石成份所包裹，若植入數(shù)個異物則有時(shí)可以被粘結(jié)成一個大的團(tuán)塊。
