| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1896278A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.01.17 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200610044681.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2006.06.12 |
| 專利名稱 | 乙型肝炎病毒耐藥基因突變的熒光定量PCR檢測(cè)方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/70(2006.01)I;G01N21/64(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 山東省醫(yī)藥生物技術(shù)研究中心 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 魯艷芹;韓金祥;戚 鵬;闞洪晶 |
| 地址 | 250062山東省濟(jì)南市歷下區(qū)經(jīng)十路89號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 鮑光明 |
| 國(guó)省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥基因突變的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法，其特征在于，根據(jù)乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥相關(guān)突變r(jià)tL180M、rtM204V/I，將突變位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)在下游引物的3’端，上游引物為多聚酶區(qū)的一段保守的核苷酸序列，利用優(yōu)化的熒光定量PCR反應(yīng)程序，通過(guò)熒光定量PCR反應(yīng)，對(duì)從血清樣本提取的乙型肝炎病毒DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，根據(jù)CT值和熔點(diǎn)曲線來(lái)檢測(cè)是否有突變發(fā)生。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥基因突變的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法。乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥相關(guān)突變位于DNA多聚酶基因的rtL180M、rtM204V/I突變。該方法利用PCR反應(yīng)中引物在3’末端存在錯(cuò)配時(shí)不能正確延伸的特點(diǎn)，將突變位點(diǎn)設(shè)計(jì)在熒光定量PCR引物的3’末端，采用合適的引物濃度，Touch-down PCR反應(yīng)程序，同時(shí)結(jié)合嵌合有SyBrGreen I染料的PCR產(chǎn)物的熔點(diǎn)曲線。根據(jù)熒光定量PCR信號(hào)和熔點(diǎn)曲線，即可以判斷拉米夫定位點(diǎn)是否發(fā)生突變。該發(fā)明能準(zhǔn)確快速地檢測(cè)乙肝病毒臨床標(biāo)本中DNA突變，同時(shí)亦適用于其它基因的突變檢測(cè)。 |
| 國(guó)際公布 |
