由于骨髓檢查專業(yè)性和技術(shù)性較強,不僅需要細胞形態(tài)學、細胞化學、細胞免疫學和細胞遺傳學等實驗室知識和技術(shù),而且還需要較廣泛的臨床血液病知識,因此交流骨髓細胞形態(tài)學檢查經(jīng)驗十分必要。
1.一般質(zhì)量要求
1.1 載玻片的要求
載玻片的厚薄,清潔光滑和陳舊程度都會影響檢查的結(jié)果,推薦使用1~1.2 毫米 厚度:25.4×76.2 毫米長度的載玻片。新玻片表面有游堿質(zhì),必須用1mol/L HCl 浸泡24小時后再用清水徹底清洗、干燥后備用。舊玻片用含氯消毒劑浸泡24小時后加入合成洗滌劑煮沸20分鐘,再用熱水將血膜洗去,用清水沖凈干凈,干燥備用。必要時,可將其用95%乙醇浸泡1小時,脫凈載玻片油脂,用蒸餾水洗凈后,干燥備用。
1.2 骨髓涂片的要求
一張良好的骨髓涂片,要求厚薄適宜,體尾分明、邊緣整齊,細胞分布均勻。髓膜長度占載玻片的1/3左右,推片厚度應適當參考外周血計數(shù),如白細胞計數(shù)升高明顯和外周血分類出現(xiàn)幼稚細胞者,應當適當推薄片。而三系減少患者應當適當推厚片。每一受檢病例骨髓涂片均應該在8~1O張,以便存檔和做組織化學染色。
1.3 骨髓片的接受和編號登記
每張涂片中都應注明患者的姓名、取材日期、編號,血片以PB、骨髓片用BM表示。每份骨髓標本都應認真核對申請患者的姓名、性別、年齡、床號、住院號等,并做好骨髓編號,登記工作,以便查找和檔案管理。
1.4 染色
染色劑以Wright混合染色為佳。染液以覆蓋骨髓膜為宜,染色時間長短與衛(wèi)生招聘網(wǎng)增生程度、髓膜厚度和室內(nèi)溫度有關(guān),增生程度高、髓膜厚、室內(nèi)溫度低染色時間長、反之則染色時間短。染色效果,一般以加入第二液后低倍鏡下觀察到清晰分辨出中性分葉核后,流水沖洗干后鏡檢。
2.細胞分類要求
選擇體尾交界部或成熟紅細胞單個排列處進行細胞分類:計數(shù)200~400個有核細胞。巨核細胞計數(shù)低倍鏡下計算總數(shù),油鏡下進行分類,計算各類巨核細胞積分比例。
3.血細胞化學染色方法和意義
血細胞化學染色是以形態(tài)學為基礎(chǔ),結(jié)合化學和生物化學技術(shù),對血細胞各化學成分,代謝產(chǎn)物作定位、定性、半定量和定量觀察的方法。主要有過氧化物酶染色、中性粒細胞堿性磷酸酶染色、酯酶染色、糖原染色、鐵粒染色。過氧化物酶染色主要是幫助鑒別急性白血病的類型。中性粒細胞堿性磷酸酶染色主要用于:(1)慢性粒細胞白血病與中性粒細胞類白血病反應的鑒別。(2)陣發(fā)性夜間血紅蛋白尿(PNH時)與再生障礙性貧血的鑒別。(3)急性白血病類型的鑒別。(4)細菌與病毒性感染的鑒別。酯酶染色主要用于鑒別急性白血病類型。糖原染色主要用于:(1)鑒別幼稚紅細胞增生的性質(zhì)。(2)鑒別白血病類型。鐵染色只要用于鑒別缺鐵性貧血與非缺鐵性貧血。以及診斷鐵粒幼細胞性貧血。
4.報告的時間和診斷
報告時間:一般常見病骨髓片8 小時內(nèi)發(fā)出比較恰當,疑難骨髓片48小時內(nèi)發(fā)出,臨床急于了解病情可以口頭或電話方式簡單報告,但以正式報告為準。一般常見病骨髓報告由一名有經(jīng)驗檢驗者閱片后即可報告,疑難片最少需要2名有經(jīng)驗檢驗者共同閱片,甚至進行全科討論或者與患者所在科室臨床醫(yī)生進行溝通,結(jié)合臨床骨髓形態(tài)學和其它相關(guān)檢查,進行綜合分析,加以診斷。
5.骨髓細胞分析儀的使用要求
采集的圖像一定要有代表性,要求細胞圖像清晰和真實,不能隨意擴大或縮小細胞的大小。
6.參加骨髓細胞形態(tài)學質(zhì)量控制
建立技術(shù)考核標準,定期參加室內(nèi)質(zhì)量控制。通過參加骨髓檢查室間質(zhì)評,使科室在血液病細胞形態(tài)學方面積累和增加一些經(jīng)驗和知識,從而提高日常骨髓報告的能力。
7.檔案的保存
我室骨髓細胞形態(tài)檢查檔案保存采用二種方或同時進行。傳統(tǒng)方式:手工編號,填寫相關(guān)資料,保存原始申請單和報告單。優(yōu)點:骨髓涂片和組織化學染色保存完整,便于今后閱片和帶教,總結(jié)資料。缺點:需要較大場地,查找不便。細胞圖象技術(shù),優(yōu)點:報告圖象直觀,便于保存,查找方便,便于進行統(tǒng)計量。缺點:采集圖象存在局限性,帶教不便。