�。ㄒ�)HLA-A、B、C抗原的檢測
HLA-A、B、C抗原可用血清學(xué)方法鑒定，故又稱SD抗原（serologically defined antigen),常采用微量淋巴細(xì)胞毒性試驗(yàn)（microlymphocytotoxicity test),又稱補(bǔ)體依賴細(xì)胞毒試驗(yàn)（complement dependent cytotoxicity,CDC)。基本步驟是分離純化外周血中的淋巴細(xì)胞，加一組已知HLA抗血清，20℃60分釧后，再加家兔補(bǔ)體，37℃ 60分釧后加臺盼蘭染色觀察結(jié)果，如淋巴細(xì)胞染成蘭色則為陽性，表明待檢淋巴細(xì)胞表面具有與已知抗血清相應(yīng)的抗原。也可用51Cr標(biāo)記的細(xì)胞毒試驗(yàn)。
�。ǘ�)HLA-DR、DQ抗原的檢測
HLA-DR、DQ抗原檢測的基本方法是采用微量淋巴細(xì)胞毒性試驗(yàn)。先從待檢者外周血中分離純B細(xì)胞，陽性血清可來自經(jīng)產(chǎn)婦，但需用血小板吸收以除去抗HLA-A、B、C抗體。標(biāo)準(zhǔn)抗血清的主要有以下幾種來源。
�。�1)經(jīng)產(chǎn)婦血清：在多胎生產(chǎn)的婦女中，可得到抗HLA-A、B和C抗原的抗血清。因?yàn)樘旱腍LA抗原包含了父方抗原（因其中一個(gè)單倍體來自父方)，在分娩時(shí)，由于胎盤損傷等原因，胎兒的父方抗原免疫了母方，從而在母體內(nèi)產(chǎn)生抗HLA抗血清，這種抗血清可能具有多種特異性，但多胎后，其中免疫原性最強(qiáng)的一種抗原可刺激誘導(dǎo)得到單一特異性抗血清。
（2)計(jì)劃免疫志愿者的血清：給志愿者注射不相容的HLA淋巴細(xì)胞，受者產(chǎn)生特異性HLA同種抗體，可用于HLA-A、B、C、DR和DQ分型。
�。�3)單克隆抗體：至今報(bào)道的大都是經(jīng)種間免疫（鼠抗人)獲得，小鼠免疫系統(tǒng)識別人HLA抗原所產(chǎn)生的鼠抗人單抗不同于從經(jīng)產(chǎn)婦獲得的HLA抗血清，HLA抗原分子最易為鼠免疫系統(tǒng)識別的暢敘有種間送別的決定簇，
所以應(yīng)用鼠雜交瘤技術(shù)獲得HLA單抗大部分都是識別種間差異的共同決定簇，所謂單態(tài)性HLA單抗。已獲得數(shù)百種HLA單抗中，僅少數(shù)為多態(tài)性HLA-A、B、C單抗。而在已獲得的多態(tài)性單抗中也集中某幾個(gè)少數(shù)的特異性抗原，要獲得多數(shù)特異HLA單抗有賴于人-人雜交瘤技術(shù)的應(yīng)用。第11次IHW報(bào)道用克隆的HLA等位基因轉(zhuǎn)染小鼠L細(xì)胞，獲取特異HLA抗原專一表達(dá)相應(yīng)產(chǎn)物的轉(zhuǎn)染細(xì)胞（transfactent)以篩選相應(yīng)的HLA單克隆抗體。現(xiàn)已從70多個(gè)轉(zhuǎn)染細(xì)胞中獲得抗HLA多態(tài)部分的單抗約50多種，特別針對難以檢出的DP以及部分DQ抗原的單抗，這些細(xì)胞和基因工程產(chǎn)生的制劑具有精細(xì)的分辨力，有助于確定各種HLA等位基因產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和各人群特異性抗原的檢測和分析。醫(yī)學(xué)全.在線.網(wǎng).站.提供
�。ㄈ�)HLA-D抗原的檢測
以往HLA-D抗原用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)（mixed lymphocyte culture)來鑒定，故又稱LD抗原（lymphocyte defined antigen)，有雙向MLC和單向MLC兩種分型法。
1.雙向MLC 供者和受者淋巴細(xì)胞在體外共同孵育時(shí)，由于Lads抗原不同而相互刺激轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞。供者和受者組織相容性愈差，相互刺激也愈強(qiáng)，轉(zhuǎn)化率就愈高。雙向MLC缺點(diǎn)是操作方法復(fù)雜，穩(wěn)定性與重復(fù)性差，一般要5-7天，對尸體供腎者多無法預(yù)先測定。
2.單向MLC 屬于陰性分型法，基本步聚是將已知HLA-D抗原的淋巴細(xì)胞用絲裂霉素C（mitomycin C)或X線照射處理，成為只有抗原激發(fā)能力而無增殖反應(yīng)能力的“刺激細(xì)胞”。將刺激細(xì)胞與末經(jīng)過這種處理的待測淋巴細(xì)胞進(jìn)行混合培養(yǎng)，根據(jù)待測細(xì)胞出現(xiàn)母細(xì)胞反應(yīng)的程度，則可知待測淋巴細(xì)胞上是否具有與“刺激細(xì)胞”上相同的HLA-D抗原。在MLC起激發(fā)抗原的主要是B細(xì)胞和單核細(xì)胞上的D抗原，反應(yīng)細(xì)胞為CD4陽性T細(xì)胞。本法特點(diǎn)同雙向MLC。在單向MLC中作為刺激細(xì)胞最好用純合子配型細(xì)胞（homozygous typing cell,HTC),因?yàn)榧兒献邮莾蓚�(gè)單體型完全相同，因此只有一種D抗原。
純合子分型細(xì)胞的來源：
�。�1)姨姑表婚配的子女約占1/16的機(jī)率找到純合子細(xì)胞。
（2)多發(fā)性硬皮病患者中表現(xiàn)為HLA-D2和HLA-B7連鎖不平衡的個(gè)體具有異常高的純合子頻率。
�。�3)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者D位點(diǎn)純合的發(fā)生率也較高。
圖6-12 姑姨表婚配的HLA單體型的遺傳模式圖
