流式細(xì)胞術(shù)對(duì)外周血白細(xì)胞的免疫熒光分析

　　（2)FCM測定B細(xì)胞的臨床指證：

　�、倜庖呷毕�；免疫缺陷可以是先天性或獲得性的。低丙種球蛋白白血癥和無丙種球蛋白白血癥常伴有免疫球蛋白分泌的紊亂，因此有必要分析B細(xì)胞。

　�、诹馨土觯悍呛谓芙鹗喜〉牧馨筒�，80%來源于B細(xì)胞。因而一旦懷疑為淋巴瘤，就應(yīng)仔細(xì)用FCM對(duì)B細(xì)胞的表現(xiàn)型進(jìn)行分析，可以分析血、骨髓、以及活檢淋巴結(jié)等。首先確定腫瘤細(xì)胞的來源：B細(xì)胞性（CD₂₀⁺，SIg⁺)或T細(xì)胞性（CD₃⁺)。也有可能某些淋巴病來源于單核細(xì)胞（CD₁₁⁺)成裸細(xì)胞而表現(xiàn)出非T非B。一旦確立為B細(xì)胞來源后，就應(yīng)更進(jìn)一步分析克隆增殖的性質(zhì)：單克隆、少克隆、或是多克降珠。單克隆性的增殖往往是腫瘤的標(biāo)志�？梢杂肧Ig的輕鏈和重鏈分別加以測試，往往輕鏈比重鏈更有價(jià)值。在不久的將來，或許可以直接用免疫球蛋白的基本加以鑒別。

　　對(duì)B細(xì)胞亞群的確定，目前并未定論，但某些B細(xì)胞被CD₅（T₁，OKT₁)染色。正常B細(xì)胞中這些細(xì)胞較少，而多見于慢性淋巴性白血病和骨髓移植后的免疫缺陷時(shí)期。在B細(xì)胞的腫瘤病人中，10%的也可以出現(xiàn)CD₂₀（B₁)陰性反應(yīng)，這是B細(xì)胞成熟而將分化為漿細(xì)胞的標(biāo)志。在異常B細(xì)胞上，往往有一些B細(xì)胞的標(biāo)記缺失或其它表現(xiàn)型出現(xiàn)，因而對(duì)異常B細(xì)胞的FCM的分析尤為重要。圖10-17顯示CD₁₉—FITc （B細(xì)胞)和CD₅-PE（T細(xì)胞)雙染色的假三維圖像分析。X軸為綠色熒光的Leu₁₂(B細(xì)胞)，Y軸為紅色熒光的PE—Leu₁(T細(xì)胞)。從圖中可見，有較多的細(xì)胞表現(xiàn)出Leu₁₂⁺t Leu₁⁺,陰性區(qū)內(nèi)為NK細(xì)胞和紅細(xì)胞等。

圖10-17　異常B細(xì)胞雙染色的假三維圖

　�。�3)k-λ測定B細(xì)胞克隆：k、λ測定法是一種從正常B細(xì)胞中測定少量B細(xì)胞克隆生長的方法。其基本原理是：若有B細(xì)胞克隆存在，將改變某一種輕鏈（k或λ)的熒光強(qiáng)度的分布。若輕鏈為k的B細(xì)胞生長，則抗k的抗體能測試出這種變化，而抗λ的抗體的測試沒有任何改變。正常情況下，B細(xì)胞的k和λ的熒光強(qiáng)度分布是一致的（見圖10-18)。

圖10-18　k-λ克隆的測定

正常情況，B細(xì)胞輕鏈分布圖像，一致κ和λ的波形沒有區(qū)別。但在異常時(shí)，若有單克隆生長，κ鏈有分布則與λ不一致，在總和的曲線形態(tài)上也會(huì)產(chǎn)生差異。

　　在實(shí)際應(yīng)用中，血液、體液、組織細(xì)胞的懸浮液效果均較好，而對(duì)于骨髓，大量細(xì)胞的非特異性標(biāo)記會(huì)影響測定的結(jié)果。這里面必須強(qiáng)調(diào)，正常B細(xì)胞中的克隆細(xì)胞生長并不意味著它們必然是腫瘤細(xì)胞，還必須結(jié)合其它指標(biāo)再做結(jié)論。不過這種方法對(duì)確定腫瘤細(xì)胞的存在、細(xì)胞發(fā)育階段、以及經(jīng)治療后病情控制的狀況等，都可以提供一些有用的資料。

　　以上僅限于從外周血的白細(xì)胞分析這一側(cè)面介紹了FCM的某些疾病中的臨床應(yīng)用。其實(shí)，它也僅只是問題的一個(gè)部分。例如，有研究工作表明：CD₃₄抗原在由紅系、巨核系、粒系和巨噬細(xì)胞三個(gè)細(xì)胞成株單元組成的成株細(xì)胞中有所表現(xiàn)。CD₃₄⁺細(xì)胞在人的骨髓細(xì)胞中約占1～4%，而在外周血中卻探測不到。又如，NK細(xì)胞近來被認(rèn)為可能和人類的某些疾病的發(fā)病機(jī)理有關(guān)，對(duì)NK細(xì)胞的測量可以作為免疫治療的免疫監(jiān)測的重要參數(shù)和有效的預(yù)后征狀的指示。以前是用放射性的⁵¹Cr的釋放來檢測NK敏感的靶細(xì)胞的毒理學(xué)活性從而評(píng)估NK的功能的，而采用熒光探針CFDA（car－boxy—fluorescein diacetate)標(biāo)記則可用FCM技術(shù)更為安全可靠地進(jìn)行測定。有報(bào)告指出，健康男人的數(shù)值為（67.1±22.7%)%，健康女人為（63.9±20.0%)；患有婦科癌腫病人則為（38.5±23.1)%,明顯偏低。這些工作表明，F(xiàn)CM的技術(shù)從免疫組織化學(xué)角度還會(huì)有所發(fā)展。在第二節(jié)　我們?cè)�簡單介紹了流式細(xì)胞分析技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)工程中應(yīng)用的一些技術(shù)途徑，這也可以啟發(fā)我們借助于FCM來提高免疫組織化學(xué)的分析能力�？梢灶A(yù)見，F(xiàn)CM一定會(huì)成為免疫組織化學(xué)的一項(xiàng)重要的技術(shù)工具，并將在醫(yī)學(xué)科研和臨床應(yīng)用中發(fā)揮更大的作用。

　　附【美國Becton –Dickinson 公司可提供的FCM標(biāo)準(zhǔn)】熒光微球（Fluorescent beads)；雞紅細(xì)胞核（Chicken erythrocyte nu－clei)和小牛胸腺細(xì)胞核（Calf thymocyte nuclei)，用于DNA測量的質(zhì)量控制；單克隆抗體試劑；以及用于免疫表型（immunopheno－typing)和其它臨床應(yīng)用的藥盒。

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