對(duì)幽門螺桿菌有效中西藥物的篩選

　　在中藥方劑胃憂愈治療消化性潰瘍及伴發(fā)幽門螺桿菌（Hp)相關(guān)性慢性胃炎取得良好效果，Hp清除率50％的基礎(chǔ)上，根據(jù)中醫(yī)理論和臨床實(shí)踐，參照中藥研究成果，應(yīng)用藥敏試驗(yàn)方法對(duì)清熱解毒及可能具有抗菌作用的20種中藥進(jìn)行篩選，選擇對(duì)Hp有較好抑制作用者制成滅Hp膠囊。選用14種對(duì)Hp有效抗生素及各種藥物聯(lián)合進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，進(jìn)一步篩選療更佳的聯(lián)合用藥組合方案。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料

　　Hp菌株分離培養(yǎng)：Hp菌株來(lái)自本院胃鏡室胃鏡檢查的慢性胃炎和消化性潰瘍患者幽門前區(qū)粘膜組織鉗取物，直接接種于空腸彎曲菌選擇性培養(yǎng)基（英格蘭Unipath公司產(chǎn)品)上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)72h，檢查菌落，革蘭染色為陰性桿菌，尿素酶、氧化酶、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)陽(yáng)性。選擇從不同患者胃內(nèi)分離的菌株，生長(zhǎng)良好者8株做為藥敏試驗(yàn)菌。

　　1.2　方法

　　每種藥物或聯(lián)合用革均進(jìn)行8株從不同個(gè)體分離的Hp菌株的敏感試驗(yàn)。平均抑菌直徑10mm以內(nèi)為輕度敏感；10mm～20mm為中度敏感；20mm以上為高度敏感。

　　1.2.1　有效西藥的篩選

　　將四環(huán)素、痢特靈、慶大霉素、紅霉素、甲硝唑、De－Nol、羥氨芐青霉素、氟呱酸、氟嗪酸，氨芐青霉素、先鋒必素、復(fù)達(dá)新、西力欣、菌必治14種藥物各0.1g，加無(wú)菌蒸餾水1ml制成10％溶液。將直徑5mm藥敏紙片浸入藥液，浸透后取出，分別裝于干燥無(wú)菌瓶?jī)?nèi)置37℃孵箱內(nèi)烘干，滅菌后分別貼于已接種好Hp菌的血瓊脂平板上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)48h，測(cè)量抑菌直徑。將上述藥液0.1ml分別和De-Nol或（和)甲硝唑0.1ml混合，再將上述14種藥物按排列組合方法組成3種不同藥物的聯(lián)合，取各種不同的藥液各0.1ml相混合，按上述方法進(jìn)行藥敏試驗(yàn)。

　　1.2.2　有效中藥的篩選

　　將黃連、黃柏、白芍、大黃、連翹、黃芩、白花蛇舌草、烏梅、雙花、赤芍、三七、公英、地丁、丹皮、生地、水牛角、川樸、丹參、人參、龍膽草各10g，加水100ml，煎至10ml。將“胃憂愈”5倍濃縮粉劑，錫美散各10g加水50ml，加熱煎至10ml，雙層紗布過(guò)濾，為100％（g/v)原汁。將直徑5mm滅菌藥敏紙片，無(wú)菌操作在高壓滅菌后的中藥原汁中完全浸泡，浸透后取出，然后貼于已接種好Hp菌的血瓊脂平板上，置微氧環(huán)境，37℃培養(yǎng)48h，檢測(cè)抑菌直徑。將人參，丹參，“胃憂愈”原汁0.5ml分別與以上單味中藥原汁0.5ml混合。再將20種單味中藥按排列組合方法，組合成三種藥物的混合液（每種0.3ml)進(jìn)行試驗(yàn)。

　　2　結(jié)果

　　西藥敏感試驗(yàn)中所選藥物在培養(yǎng)基上的中度和高度敏感（表1)。四環(huán)素、痢特靈、甲硝唑、De－Nol先鋒必素為中度敏感；慶大霉素、氨芐青霉素、氟呱酸、紅霉素、羥氨芐青霉素、氟嗪酸、復(fù)達(dá)新、西力欣，菌必治為高度敏感。本文所選藥物中，De－Nol與甲硝唑單一抑菌直徑為19.88mm±1.21mm，14.50mm±0.74mm，與四環(huán)素（21.25±0.78)，痢特靈（21.75±1.04)，先鋒必素（17.63±1.04)，羥氨芐青霉素（23.75±0.96)聯(lián)合則非常顯著的增加這幾種藥物的抑菌作用，較單一用藥差異非常顯著（P＜0.01)。也顯著增加氨芐青霉素（25.50±1.82)、氟呱酸（25.13±1.47)、西力欣（24.25±1.12)、菌必治（26.13±1.76)的抑菌作用（P＜0.05)。De－Nol和甲硝唑聯(lián)合再與所有單一藥物聯(lián)合均非常顯著的增加抑菌作用（P＜0.01或P＜0.05)。聯(lián)合用藥較單一用藥抑菌作用增強(qiáng)，這可能與抗生素的作用方式不同而產(chǎn)生協(xié)同作用有關(guān)。也是克服Hp對(duì)某種藥物原發(fā)耐藥的有效方法。三種藥物排列組合藥物效果，與含De－Nol和甲硝唑的三聯(lián)藥敏效果相比，其效果未見(jiàn)更佳者。另因De－Nol具有殺滅Hp感染仍應(yīng)采用含De－Nol和甲硝唑的聯(lián)合治療。復(fù)達(dá)新、西力欣、菌必治對(duì)Hp抑制作用強(qiáng)，在培養(yǎng)基上單一抑菌效果與其他藥物的三聯(lián)抑菌效果相似，今后如在臨床治療中也達(dá)到與三聯(lián)用藥相似的療效，也可成為一類較好的抗Hp藥物。

表1　西藥敏感試驗(yàn)結(jié)果（抑菌直徑mm，x±s)

^aP＜0.05，^bP＜0.01，υs單一藥物。

　　通過(guò)對(duì)20種中藥的敏感試驗(yàn)，證實(shí)在培養(yǎng)基上丹皮、烏梅、大黃、三七、黃連、黃柏、白芍、丹參對(duì)Hp均具有抑制作用（表2)。人參與黃連（7.50±0.12)，黃柏（7.38±0.08)、白芍（7.25±0.04)，三七（7.63±0.22)、丹皮（9.63±0.38)聯(lián)合可輕度增加抑菌作用，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)�？墒惯B翹（7.00±0.04)，龍膽草（7.25±0.06)，白花蛇舌草（7.00±0.02)等出現(xiàn)輕度抑菌作用，丹參與黃柏聯(lián)合可顯著增加抑菌作用（10.10±0.24，P＜0.05)，也可使黃連（8.25±0.13)、烏梅（8.38±0.21)、白芍（7.38±0.08)、大黃（8.68±0.14)、丹皮（9.63±0.21)抑菌作用增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。胃憂愈與8種有效中藥聯(lián)合可顯著增加抑菌作用（8.13mm±0.16mm～12.63mm±0.15mm，P＜0.01或P＜0.01)。三種中藥聯(lián)合較單味中藥有與人參、丹參的聯(lián)合用藥抑菌作用增強(qiáng)（P＜0.01)。

表2　中藥敏感試驗(yàn)結(jié)果（抑菌直徑mm，x±s)

^aP＜0.05，^bP＜0.01，υs單味中藥。

　　藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示：?jiǎn)挝吨兴幰志�作用較北，均為輕度敏感，其中以丹皮、大黃、烏梅作用較強(qiáng)。聯(lián)合用藥以“胃憂愈”與8種有效中藥分別聯(lián)用效果增強(qiáng)，達(dá)到中度敏感，其中以丹皮、烏梅聯(lián)用效果較好（抑菌直徑12.25±0.26，12.63±0.16)。三種不同中藥聯(lián)用有8組達(dá)到中度敏感，其中以黃連、黃柏、烏梅（13.88±0.42)；黃連、丹皮、烏梅（13.63±0.14)；大黃、丹皮、烏梅（13.38±0.26)效果較好。

　　3　討論

　　1983年Marshall和Warren從慢性活動(dòng)性胃炎患者胃粘膜中分離出Hp后，經(jīng)研究證實(shí)，Hp與慢性胃炎關(guān)系密切，與消化性潰瘍的頑固不愈和早期復(fù)發(fā)有關(guān)。Hp陽(yáng)性的消化性潰瘍和慢性胃炎經(jīng)治療Hp后，消化性潰瘍的復(fù)發(fā)率降低，胃炎得到改善。目前所使用的鉍或抗生素單一用藥對(duì)Hp的根治率在20％以下，聯(lián)合用藥根治率提高；特別是近年報(bào)道三聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑＋羥氨芐青霉素或四環(huán)素)用藥根治率可達(dá)85％左右，但聯(lián)合用藥副作用較大，因之，探索對(duì)Hp根治率較高而乏副作用的藥物和方法為當(dāng)今治療Hp相關(guān)疾病的重要課題。

　　近年來(lái)，關(guān)于中藥方劑治療Hp相關(guān)性疾病的研究多系在傳統(tǒng)方劑基礎(chǔ)上辨證加減或選用具有抗菌作用的中藥，尚乏針對(duì)抗Hp作用的研究，何種中藥對(duì)Hp具有殺滅作用尚未明了。為此，我們?cè)谖笐n愈治療消化性潰瘍；Hp相關(guān)性胃炎取得良好效果；Hp清除率50％的基礎(chǔ)上，為進(jìn)一步加強(qiáng)胃憂愈對(duì)Hp的治療作用，通過(guò)對(duì)20種可能具有抑制菌作用的清熱解毒藥進(jìn)行篩選，結(jié)果顯示：丹皮、烏梅、大黃、三七、黃連、黃柏、白芍、丹參8種中藥對(duì)Hp的抑制作用較弱（抑菌直徑6.88mm±0.12mm～9.25mm±0.42mm)。聯(lián)合用藥作用增強(qiáng)，特別是與胃憂愈聯(lián)合或三種有效藥物聯(lián)合達(dá)到中度敏感（抑菌直徑8.13mm±0.16mm～13.63mm±0.14mm)。加之胃憂愈具有補(bǔ)脾益氣、增強(qiáng)脾胃功能、活血化瘀、促進(jìn)胃組織血液循環(huán)，增強(qiáng)胃粘膜屏障功能，促進(jìn)病變恢復(fù)的良好作用。本研究還表明，通過(guò)單一或聯(lián)合藥敏試驗(yàn)，De－Nol、甲硝唑、四環(huán)素在培養(yǎng)基上對(duì)Hp中度敏感，但與其他抗生素聯(lián)合后可明顯增加抗Hp作用，特別是De－Nol和（或)甲硝唑與其他抗生素聯(lián)合可顯著增加抗生素的抗Hp作用，故De－Nol和甲硝唑可做為聯(lián)合用藥的基礎(chǔ)。因此設(shè)想如何將Hp有效中藥加入胃憂愈方劑中組成不同新方，并與基礎(chǔ)二聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑)或三聯(lián)（De－Nol＋甲硝唑＋羥氨芐青霉素或四環(huán)素)聯(lián)用，可望降低三聯(lián)副作用并獲得對(duì)Hp根治率高、對(duì)病變有治療作用的有效方法。

姚希賢¹　王丙信²　李仲興　白文元¹

¹河北醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院（石家莊　050000)

²解放軍251醫(yī)院