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單克隆抗體研究中實驗動物的選擇與應用

  一、單克隆抗體技術與實驗動物關系

  雜交瘤(Hybidoma)合成單克隆抗體(Monoclonal Antibodies,McAb)是近年來生物醫(yī)學中的一項重大突破。從根本上解決了免疫學中長期存在的“特異性”和“重復性”問題,在短短的幾年里,在許多不同科學領域內(nèi)發(fā)揮了巨大作用。

  單克隆抗體技術是在1975年由Kohler和Milstein首創(chuàng)的,他們在60年代發(fā)展起來的細胞雜交技術的基礎上,成功地把兩種細胞融合在一起,一種是已適應體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細胞(都來自BALB/C品系的小鼠)和一種經(jīng)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞融合,形成雜交細胞,發(fā)現(xiàn)這種融合的雜交細胞兼有兩個親代細胞的特征,即既有骨髓瘤細胞無限生長的能力,又有漿細胞合成單一抗體的能力。因此,這種免疫細胞通過克隆化,成為單克隆系(單一純化的無性繁殖細胞系),就能產(chǎn)生大量單一類型的高純度抗體,這種抗體就叫作“單克隆抗體”,如果把雜交細胞再種入動物體內(nèi),可形成“雜交細胞瘤”,瘤子產(chǎn)生大量抗體,就可以從動物體液中抽出含有單克隆抗體的體液,把這種雜交細胞在體外培養(yǎng),培養(yǎng)液中就有大量的單克隆抗體,可供實驗研究和臨床研究使用。

  目前,雜交瘤單克隆護體的應用范圍愈來愈廣泛,已經(jīng)深入到整個生物醫(yī)學的各個領域,諸如生物化學、分子生物學、免疫學、藥理學、病毒學、細菌學、寄生蟲學、腫瘤學、遺傳學、藥物學、血液病學、內(nèi)分泌學等等。幾乎所有抗原物質(zhì)都可以應用這項技術獲得針對單一抗原決定簇單克隆抗體。所以,可以說它是一把分子刀,用它可以剖析任何一種抗原物質(zhì)的細微結(jié)構(gòu);它又是一種均質(zhì)的、高特異性的抗體,可用它研究免疫學、遺傳學、腫瘤學和其他學科中各種復雜的現(xiàn)象,同時還可用于診斷各種疾病,包括惡性腫瘤;它又可當作一種藥劑治療某些疾病,甚至腫瘤;還可以用于提純各種蛋白質(zhì)。

  實驗動物在雜交瘤單克隆抗體技術中占有極為重要的作用。它是形成單克隆抗體的必須條件。正如Milstein指出:如果在理論上沒有克隆選擇學說,在技術上沒有細胞融合(Cell Fusion)和培養(yǎng)方法,在材料上沒有實驗性骨髓瘤和體外培養(yǎng)的髓瘤細胞,就不可能出現(xiàn)單克隆抗體。這充分說明了實驗動物和骨髓瘤細胞系在雜交瘤技術中的重要作用。

  二、常用于淋巴細胞雜交瘤技術的實驗動物

 。ㄒ)小鼠BALB/C系

  它是此技術中最常用的動物。目前用于細胞融合的小鼠骨髓瘤細胞幾乎都來源于BALB/C系小鼠。其雜交瘤可接種于BALB/C或它的雜交第1代小鼠,從帶瘤動物取血清或腹水制備單克隆抗體。

  BALB/C系小鼠起源于Bagg從1913年開始維持的白化株(Albine stock)小鼠,Dowell從1923年開始作近交系培育,至1932年達26代,之后Snell將BALB加C即BALB/C,以前的近交歷史不清,繼之以Andervont為主,使BALB/C廣泛傳播和應用。1973年美國NIH增培育到近交157代。毛色基因為AA、bb、cc(白色)。H-2為d型。亞系有:BALB/cCd,BALB/cJ,BALB/cAnN等。該品系小鼠的主要特性:

  1.免疫學特性:易患慢性肺炎。多數(shù)個體于6月齡以后出現(xiàn)免疫球蛋白過多癥。主要是IgG1和IgA量的增加。免疫球蛋白的絕對量依飼養(yǎng)條件而異。腹腔注射礦物油后可引起漿細胞瘤。發(fā)生率0-60%,依亞系及飼養(yǎng)條件而異。較難誘發(fā)免疫耐受性。醫(yī)學全在線www.med126.com

  2.生理學特性:血壓較高。網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)器官與體重之比較大。大部分雄鼠在20日齡出現(xiàn)脾臟淀粉樣性變。對放射線極度敏感。

  3.癌發(fā)生率:乳腺癌發(fā)生率低(3%),但對致癌因子敏感。腎上腺和肺常發(fā)生,雌鼠的肺癌發(fā)生率為21%,網(wǎng)狀細胞瘤為8%,血管瘤為6%,淋巴肉瘤為4.5%。

  4.老化及壽命:老齡鼠出現(xiàn)心臟病和多發(fā)性動脈硬化癥。平均壽命雄鼠為569~648天,雌鼠561~816天。252日齡平均體重為雄鼠30克雌鼠28克。

  5.對細菌及病毒反應:該品系小鼠對鼠傷寒沙門氏菌C′5敏感,對麻疹病毒中度敏感。

  6.飼養(yǎng)注意點:生育年齡長(至12月齡),容易飼養(yǎng)繁殖,最適稍高溫度。為26-27℃因為體型較細,除了日常飼料外,每日早晚每只各喂1克白面包,每星期喂二次木魚(日本傳統(tǒng)加工食品),稍肥后較易繁殖,根據(jù)我們的飼養(yǎng)經(jīng)驗每周加三次煮熟的雞蛋,效果很為滿意。該品系小鼠易患肺炎,最好不要和其它近交系小鼠同室飼養(yǎng),不使其它近交系小鼠發(fā)病的環(huán)境病原菌易使BALB/C鼠患鼠。

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