自從1983年Marshall和Wsrren報道從人胃粘膜活體標本中成功的分離出幽門螺桿菌（helicobacter pylori, Hp)以來，國內(nèi)外學(xué)者對此進行了廣泛深入的研究。近年來分子生物學(xué)技術(shù)初步顯示了它在流行病學(xué)、分子遺傳學(xué)學(xué)及其臨床應(yīng)用上的價值。
診斷Hp感染的方法很多，包括快速尿素酶試驗、Warthin-Starry銀染以及細菌培養(yǎng)，這些方法的共同缺點是不能達到足夠的敏感性以確定治療后細菌是否被徹底根除，也不能確定Hp感染的來源和傳播途徑。13C和14C呼吸試驗方法雖然可靠，但費用較高。血清抗體的檢測則不能確定是否有新近感染，也不以評價治療的效果。而近年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)簡單、快速、可靠，不僅對Hp的診斷具有高度敏感性和特異性，而且還可以用于對Hp的分型。
最早的研究方法是用限制性核酸內(nèi)切酶直接消化培養(yǎng)，鑒定后的Hp染色體DNA，經(jīng)過瓊脂糖電脈按大小分離所得的片段，來比較各株細菌的基因組DNA酶切圖型。Langenberg等報道了用HindⅢ限制性內(nèi)切酶分析Hp的全基因差異。Wetherall等用斑點雜交法評價了同位素與非同位素標記Hp全基因探針的實用性。Mortomi等通過DNA-RNA雜交方法，用人工合成的Hp特異性寡核苷酸探針，同16SrRNA序列互補，證實這種探針比較敏感，可以檢出少至5000個～10000個Hp。
近年來聚合酶鏈反應(yīng)（polymerasechain reaction，PCR)技術(shù)已經(jīng)用于Hp的診斷，該技術(shù)的敏感性比寡核苷酸探針增加了100倍，可以檢出少至100個Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測出，為PCR特異性引物的選擇提供了依據(jù)。我們以一對與16SrRNA基因互補的寡核苷酸為引物（CP1/CP2)，建立了從胃粘膜活組織標本中檢測Hp感染的PCR技術(shù)。用該方法檢測Hp標準菌株NCTc 11637，NCTC11848及50株從臨床病人胃粘膜活組織中分離的Hp菌株均產(chǎn)生450bp的片段，其敏感性為0.1pg的HpDNA，相當于100個細菌細胞，而對12株非Hp菌株（包括金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、變形桿菌、痢疾桿菌及空腸彎曲菌NCTC11351)以及無Hp感染的人胃粘膜細胞呈陰性反應(yīng)。我們還用PCR檢測了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者，結(jié)果表明PCR檢查的Hp陽性率高于常規(guī)檢查法。我們還對17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查（尿素酶試驗、銀染、及培養(yǎng)均陰性)而被認為Hp被根除的病人，用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽性。以往我們對一些常規(guī)方法未能檢出而實際上還存在Hp的病人，誤認為Hp被根除而放棄治療，這些病人短期內(nèi)Hp再現(xiàn)實際上是治療不徹底，這對于指導(dǎo)Hp感染的治療有十分重要的臨床意義。zxtf.net.cn
PCR還可以從石蠟包埋的胃粘膜組織中檢測Hp，因此可以對胃及十二指腸患者進行回顧性研究。PCR的另一個優(yōu)點是可以成功地檢出人胃粘膜以外的用常規(guī)方法不能檢測的Hp，包括胃液、唾液、牙菌斑及糞便中的Hp。用巢式引物（nested primer)雙擴增(reamplification)或同時在引物擴增序列內(nèi)部選擇一寡核苷酸作探針，對PCR擴增產(chǎn)物進行southernblt檢測，則可使敏感性增加10倍～100倍，可檢出難以培養(yǎng)的球形Hp。
因為PCR檢測Hp的敏感性高、特異性強、檢查快速；HindⅢ限制性內(nèi)切酶可以分析Hp全基因差異，可以用它來鑒定Hp菌株，所以分子生物學(xué)技術(shù)作為Hp流行病學(xué)的研究工具，其敏感性和特異性遠遠超過Hp的常規(guī)檢查法，因而有利于確定Hp感染的來源和途徑。Langenberg等報道1例在前幾次胃鏡檢查時經(jīng)細菌培養(yǎng)和組織學(xué)檢查證明為Hp陰性的患者，在進行另一次胃鏡檢查后則變?yōu)镠p陽性。經(jīng)DNA內(nèi)切酶分析發(fā)現(xiàn)其HpDNA酶切圖型完全相同，證明了經(jīng)內(nèi)鏡檢查而引起人與人之間的醫(yī)源性傳播。宋敏等用巢式PCR從唾液中檢出了Hp，說明口—口的傳播可能是Hp在人與人之間傳播的另一條途徑。
近年來國外文獻報道，Hp染色體DNA限制性內(nèi)切酶分析以及Hp的核糖核酸型可以作為Hp菌株的鑒別。Langenberg等用限制性內(nèi)切酶DNA分析法研究發(fā)現(xiàn)，從不同病人分離的Hp菌株酶切圖譜各不相同，而從同一病人1年～2年內(nèi)連續(xù)分離的多株Hp，其DNA酶切圖型穩(wěn)定不變，因此，利用限制性內(nèi)切酶的DNA消化圖譜（DNA digest pattern)可以鑒別抗Hp治療停藥4W后再次出現(xiàn)的Hp是復(fù)發(fā)（recrudescence)，還是新菌株再感染（reinfection)。
我們最近建立了PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)（single-strand conformation polymoophisms,SSCP)技術(shù)。該方法簡單快速、敏感性強、圖型簡單、易于比較。PCR-SSCP不僅可以用于大規(guī)模Hp流行病學(xué)調(diào)查，而且能準確評估治療后再現(xiàn)的Hp是復(fù)發(fā)還是再感染。我們對10例Hp陽性患者采用抗Hp治療，比較治療前后分離的菌株染色體DNA203bp片段SSCP圖型，發(fā)現(xiàn)9例病人治療前后的菌株具有相同的單鏈構(gòu)象，說明是治療上的失敗，而不是新菌株現(xiàn)感染。
利用分子生物學(xué)技術(shù)來檢測Hp才剛剛起步，對于Hp的診斷、致病機理、遺傳學(xué)、流行病學(xué)及其與胃癌的關(guān)系和感染治療的研究中還存在許多問題需要用分子生物學(xué)去研究，證實和闡明。特別是PCR技術(shù)發(fā)展迅速，日臻完善，在Hp的研究中，將有著廣泛的應(yīng)zxtf.net.cn/Article/用前景。
