中國(guó)幽門螺桿菌研究:豬胃螺桿樣細(xì)菌與幽門螺桿菌的比較研究

1983年,Warren和Marshall在患慢性胃炎和消化性潰瘍病人的胃粘膜中發(fā)現(xiàn)一種彎曲狀細(xì)菌�，F(xiàn)稱之為幽門螺桿菌（Helicobacter Pylori, Hp)。此后，各國(guó)學(xué)者相繼進(jìn)行了大量的研究。證明幽門螺桿菌很可能是慢性胃炎和消化性潰瘍的主要致病菌。據(jù)報(bào)道幽門螺桿菌感染悉生仔豬獲得成功，表明豬可能是一種敏感動(dòng)物。那么，在自然條件下，豬是否有幽門螺桿菌的感染并并發(fā)胃粘膜的病變呢？為此我們對(duì)正常豬胃做了微生物學(xué)和病理組織學(xué)檢查。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在豬胃粘膜中存在有螺桿菌樣細(xì)菌（Heliocbacter-like organisms,HlO)其形態(tài)和某些生物學(xué)性狀與幽門螺桿菌基本相同，而且HLO陽(yáng)性的豬胃粘膜，呈現(xiàn)與人慢性胃炎相似的病理變化，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 豬胃10個(gè),從北京沙河肉聯(lián)廠新屠宰的健康豬中隨機(jī)取出,有70%酒精消毒后沿胃大彎剪開(kāi),清除內(nèi)容物用無(wú)菌操作分別從胃竇、胃底和胃體部剪取胃粘膜組織各4塊，其中2塊用緩沖的10%福爾馬林固定，供病理學(xué)研究，另2塊組織供細(xì)菌培養(yǎng)用。

1.2 螺桿菌培養(yǎng) 將從胃竇、胃底和胃體部取得的粘膜組織，分別置于無(wú)菌玻璃研磨器中，加0.5ml含10%小牛血清的布氏肉湯，研磨成勻漿后，取0.1ml接種于含6%羊血的布氏培養(yǎng)基平板中，放置于混合氣體（10%CO2，5%O2，85%N2)培養(yǎng)72h后觀察結(jié)果。另取胃粘膜勻漿一小滴于載玻片上，推片涼干用甲醇固定，0.3%復(fù)紅染色后，直接鏡檢。

1.3 全菌蛋白電泳分析 用SDSPAGE技術(shù)，對(duì)幽門螺桿菌（菌株號(hào)為NCTC14126，CAPM00112-5)，空腸彎曲菌（菌株號(hào)為Cj22，Cj26，流G15)，結(jié)腸彎曲菌（菌株號(hào)CC29)和分離到的豬胃螺桿菌作了全菌蛋白電泳圖譜的比較。實(shí)驗(yàn)條件為濃縮膠5%，分離膠11%，各菌體蛋白樣品20μl+2×buffer20μl 100°C水浴5min且加樣，50V恒壓2h時(shí)，75V恒壓12h，考馬斯亮藍(lán)R-250染色。

1.4 藥敏試驗(yàn) 抗菌藥物敏感試驗(yàn)所用試紙，系由大連生物試劑廠生產(chǎn)，被試菌株為豬胃螺桿樣菌37°C48h培養(yǎng)物，用0.1%胨生理鹽水洗下，制成2×10⁹cfu/ml菌液，取0.1ml菌液均勻涂于布氏培養(yǎng)基表面貼藥敏試紙7張，然后置于混合氣體培養(yǎng)箱中，孵育48h～72h，測(cè)量抑菌圈直徑。

1.5 病理學(xué)檢查 經(jīng)福爾馬林固定的組織標(biāo)本，用石蠟包埋作5μ厚度的切片，每個(gè)標(biāo)本4張。2張用蘇木素一伊紅染色，作病理組織學(xué)觀察；另2張用Warthin-Stsrry鍍銀染色，檢查彎曲菌。

2 結(jié)果

2.1 豬胃螺桿樣菌的分離 在10例豬胃標(biāo)本中，有zxtf.net.cn/shouyi/8例分離到HLO。若按不同部位豬胃粘膜的分離陽(yáng)性率來(lái)看，以胃底部為最高（8/10)，其次為胃竇部（4/10)，胃體部最低（3/10)，結(jié)果見(jiàn)表1。豬胃HLO的菌落較小，約0.5mm～1mm直徑，呈圓形、扁平、濕潤(rùn)、半透明，偶或可見(jiàn)菌落周圍有β微溶血。菌體較纖細(xì)著色良好，呈弧形，S形或海鷗展翅狀。其中第5例標(biāo)本，除典型的彎曲菌外，還發(fā)現(xiàn)一種螺旋狀菌，該菌螺旋較致密，螺旋數(shù)由數(shù)個(gè)至十?dāng)?shù)個(gè)不等，其形態(tài)與從貓中分離的螺旋菌十分相似。

2.2 幽門螺桿菌與豬胃螺旋桿菌的生化特性 我們將分離到的豬胃HLO，包括致密螺旋菌與幽門螺桿菌做了生化特性的比較，結(jié)果見(jiàn)表2。如表2所示，豬胃HLO，除尿素酶試驗(yàn)較遲緩?fù)�，其他各�?xiàng)生化反應(yīng)均與幽門螺桿菌一致，而豬胃致密螺旋菌除尿素酶試驗(yàn)較遲緩?fù)猓琀2S產(chǎn)生為陰性。

2.3 全菌蛋白的電泳圖譜分析 兩株幽門螺桿菌（NCT11637，CAPM112)的電泳電譜相似；空腸彎曲菌（Cj22,Cj26,流G15)和結(jié)腸彎曲菌（CC29)的圖譜相似；各株豬胃HLO（6B，6C，7B，7C，10B，10C)之間的圖譜亦相似，但明顯不同于Hp與空腸彎曲菌的圖譜。從同一動(dòng)物不同部位分離的豬胃HLO，其圖譜相同，而從不同動(dòng)物分離的豬胃HLO，其全菌蛋白圖譜有微細(xì)的差別。

2.4 藥敏試驗(yàn) 豬胃HLO（1a,9a)的藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，這些菌株對(duì)呋喃唑酮、紅霉素、氯霉素和慶大霉素均敏感，而對(duì)羥氨芐青霉素、先鋒霉素、萘啶酮酸等耐藥。

2.5 病理組織學(xué)研究 在10例豬胃標(biāo)本的組織切片中，有7例檢查到螺桿樣細(xì)菌（表1)，這些細(xì)菌往往成群或散在地存在于粘液層，粘膜上皮表面或粘膜腺體內(nèi)。這些細(xì)菌，有的呈弧形，有的呈S形，其形態(tài)與在慢性胃炎病人胃粘膜中所見(jiàn)到的幽門螺桿菌十分相似。這7例細(xì)菌陽(yáng)性的胃粘膜組織都呈現(xiàn)中等度到較嚴(yán)重的慢性炎癥病灶，主要表現(xiàn)為粘膜和固有層大量的單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞浸潤(rùn)，間或有少量嗜伊紅細(xì)胞和多形核白細(xì)胞浸潤(rùn)。有些病灶伴有淋巴濾泡形成。有意義的是這些病變，只見(jiàn)竇部和底部的粘膜而胃體部組織則無(wú)一例出現(xiàn)上述病變（表1)。

表1 豬胃粘膜HLO培養(yǎng)和病理組織檢查結(jié)果

表2 幽門螺桿菌與豬胃中HLO的生化反應(yīng)比較

3 討論

在某些哺乳動(dòng)物的胃粘膜中，也曾發(fā)現(xiàn)有幽門螺桿菌樣細(xì)菌，但除雪貂外，一般不引起病變。我們從在自然條件下生長(zhǎng)的普通豬胃中分離到螺桿菌樣細(xì)菌，而且陽(yáng)性率相當(dāng)高（80%)。豬胃HLO的菌落和菌體形態(tài)與Hp十分相似，某些生化反應(yīng)特性兩者形態(tài)也基本一致，但HLO的尿素酶活性較低。SDS-PAGE全菌蛋白圖譜表現(xiàn)豬胃HOLO和Hp的圖譜差別也較明顯。兩者的種屬關(guān)系如何有待進(jìn)一步研究。在HLO培養(yǎng)陽(yáng)性的8例豬胃中，有7例在其組織切片中發(fā)現(xiàn)為數(shù)較多的HLO，同時(shí)伴有慢性胃炎病變。就其病變的性質(zhì)而言，與人的慢性胃炎基本相同，但是，其發(fā)生病變的范圍較廣，累及竇部和底部，而與Hp感染相關(guān)的人的慢性胃炎，多發(fā)生于竇部，正常豬出現(xiàn)胃炎病變，看來(lái)產(chǎn)不少見(jiàn)，例如Kathryn在其作為對(duì)照組的某些豬的胃組織中曾觀察到慢性炎癥病變，對(duì)此作者未作解釋。豬的胃腸系統(tǒng)在解剖學(xué)和生理學(xué)上類似于人類，www.med126.com而且近來(lái)在人和豬的胃組織中均檢查到甘油脂（glycero lipid)，后者被認(rèn)為是胃粘膜上的幽門螺桿菌的受體。

綜上所述，我們認(rèn)為豬胃HLO與豬慢性胃炎的關(guān)系，猶如Hp與人慢性炎的關(guān)系。在Hp不易感染其他動(dòng)物的情況下，研究HLO對(duì)豬慢性胃炎的致病作用，或?qū)⒂兄�于闡明Hp對(duì)慢性胃炎和消化性潰瘍的致病機(jī)理。鑒于豬能自然感染螺桿菌樣細(xì)菌并有慢性胃炎，因此用豬做幽門螺桿菌感染試驗(yàn)，在分析結(jié)果時(shí)應(yīng)審慎。