實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué):第六節(jié)　口腔醫(yī)學(xué)研究中實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的選擇與應(yīng)用

一、常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔解剖生理特點(diǎn)

口腔醫(yī)學(xué)和醫(yī)學(xué)其它科學(xué)一樣正在飛速發(fā)展。新的治療方法、藥物、矯形材料等的不斷發(fā)現(xiàn)，有些可以直接用于臨床，有些必須通過(guò)動(dòng)物驗(yàn)證驗(yàn)證后才能應(yīng)用于臨床。因而，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在口腔醫(yī)學(xué)研究中的地位就顯得愈來(lái)愈重要了�？梢赃x用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行口腔器官先天畸形、缺損、后天創(chuàng)傷、炎癥及腫瘤的研究等。如齲或非齲性的牙體病、牙髓病、尖周病、牙周病、口腔粘膜病、腫瘤以及涎腺、關(guān)節(jié)、頜骨疾患和錯(cuò)畸形等的病因、病理、病程、診斷、預(yù)防及治療（含鑲、補(bǔ)技術(shù))方法的研究等。在選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行口腔醫(yī)學(xué)各種研究時(shí)首先必然熟悉這些實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔的解剖、生理特點(diǎn)。

（一)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物牙齒數(shù)目和生長(zhǎng)特點(diǎn)

1．齒式和數(shù)目（以恒牙為標(biāo)準(zhǔn))

猴　2（2123/2123)=32狗　2（3142/3143)=42；

貓　2（3131/3121)=30兔　2（2033/1033)=28；

豚鼠　2（1013/1013)=20地鼠　2（1003/1003)=16；

大鼠　2（1003/1003)=16；小鼠　2（1003/1003)=16。

常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物牙齒數(shù)目見(jiàn)表10-34

表10-34　人和常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的恒牙數(shù)目

2．牙齒生長(zhǎng)特點(diǎn)猴的牙齒生長(zhǎng)與脫落有一定規(guī)律。新生仔猴一般無(wú)齒，偶而長(zhǎng)出二個(gè)門(mén)齒。6個(gè)月內(nèi)乳齒20個(gè)出齊，中間生長(zhǎng)停止到14～16個(gè)月。然后開(kāi)始生長(zhǎng)恒齡換乳齒。恒河猴牙齒生長(zhǎng)次序?yàn)�，乳齒：下中門(mén)→上中門(mén)→下側(cè)門(mén)→上側(cè)門(mén)→上犬→下犬→上前臼2→下前臼2→下前臼3→上前臼3；恒齒；下臼1→上臼1→上中門(mén)或上側(cè)門(mén)（換)→下中門(mén)（換)→上側(cè)門(mén)（換)→下側(cè)門(mén)（換)→上臼2→下臼2→前臼1（換)→前臼2（換)→犬換→臼3。

恒河猴年齡與牙齒生長(zhǎng)情況見(jiàn)表10-35

表10-35　恒河猴牙齒生長(zhǎng)情況

狗有恒齒42枚，切齒自第1至第3逐漸增大，下切齒比上切齒小。犬齒發(fā)達(dá)，大而尖銳呈彎形。臼齒的數(shù)目也因品種而異，一般的齒式為6/7，但在短頭型狗的臼齒常為5/7臼齒的大小也有很大差別，其中以上臼齒的第4齒和下臼齒的第1齒最大，其前后各齒均逐漸變小。仔狗生后十幾天即生出乳齒，兩個(gè)月以后開(kāi)始由門(mén)齒、犬齒、臼齒逐漸換為恒齒，8～10個(gè)月齒換齊，但犬齒需要1歲半以后才能生長(zhǎng)堅(jiān)實(shí)。狗的年齡與牙齒生長(zhǎng)、更換和磨損情況見(jiàn)表10-36。

表10-36　狗年齡與牙齒情況

（二)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物口腔內(nèi)某些解剖生理特點(diǎn)

狗、貓和其它肉食動(dòng)物的犬齒特別發(fā)達(dá)。貓舌上的絲狀乳突被有厚的角質(zhì)層，成倒鉤狀，便于舐刮骨上的肉。兔是草食動(dòng)物，門(mén)齒發(fā)達(dá)用以切斷草料，沒(méi)有犬齒，在口腔頂壁硬腭的表面有平滑的粘膜，在粘膜上有很多橫褶。綿羊和山羊的上唇感覺(jué)敏銳，運(yùn)動(dòng)靈活。

狗的唾液腺發(fā)達(dá)，包括腮腺、頜下腺、舌下腺和眶腺四對(duì)。有人認(rèn)為狗的唾液中不含有淀粉酶，但含有溶菌酶，能殺滅細(xì)菌，所以常見(jiàn)狗用舌舐傷口，有清潔消毒作用。由于狗缺乏汗腺，天熱時(shí)可大量分泌唾液以散熱。

貓有五對(duì)唾液腺，即耳下腺、頜下腺、舌下腺、臼齒腺和眶下腺，均開(kāi)口于口腔，組成了混合的分泌物－唾液。

兔的唾液腺很發(fā)達(dá)，除具有一般哺乳動(dòng)物所具有的三對(duì)唾液腺（腮腺、頜下腺、舌下腺)外，還有一對(duì)眶下腺，此外還有一些分散的小腺體。兔的唾液內(nèi)含有淀粉酶，但分解淀粉能力很弱。

豚鼠有五對(duì)唾液腺、腮腺、頜下腺、顴腺、大舌下腺和小舌下腺。此外，唇角附近有唇腺，口腔側(cè)壁的頰內(nèi)有頰腺。

大鼠和小鼠的唾液腺有三對(duì)，即耳下腺、頜下腺和舌下腺。

兔舌的表面有許多乳頭，為味覺(jué)感受器，舌尖和兩側(cè)分布的最為密集。狗舌前部寬而薄，后部較厚，舌的背面中央有縱溝，表面上覆有一層密集的絲狀乳突。舌的兩側(cè)緣分布有蕈狀乳突，在舌背面的后部，除絲狀乳突外還有錐狀乳突，它們都是味覺(jué)感受器。大鼠門(mén)齒后面接近中線處有1對(duì)小的唾液腺乳頭�？拷�舌基部有輪廓乳頭，舌背有圓錐乳頭和絲狀乳頭。

狗口腔的形狀和大小，與其頭骨形成有密切關(guān)系。長(zhǎng)頭型的狗口腔長(zhǎng)而狹窄，短頭型的則口腔短而寬。狗的口裂很大，口角約與第3或4臼齒相對(duì)。唇薄而活動(dòng)靈活，表面長(zhǎng)有觸毛，上唇中央部有一小區(qū)無(wú)觸毛，而有一中央溝（人中)，下唇側(cè)緣有鋸齒狀突。

二、動(dòng)物的選擇與應(yīng)用

（一)獼猴和狨猴

獼猴是口腔醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究的首選動(dòng)物。特別是口腔矯形學(xué)和口腔內(nèi)科學(xué)研究更為常用，如用于再植牙的效果觀察；組織病理變化；干槽癥組織病理變化的研究；以及探討各種治療方法、治療材料組織愈合的影響等，以求得最佳的臨床治療效果。

獼猴的牙齒數(shù)目和人類(lèi)一樣，牙齒的排列類(lèi)似于人類(lèi)，口腔內(nèi)存在的許多微生物也相同于人類(lèi)口腔中存在的微生物，如給獼猴的食物中加大糖的含量喂動(dòng)物后�？梢哉T發(fā)乳牙恒牙齲齒，發(fā)生的齲齒變化類(lèi)似于人類(lèi)，故可選用獼猴進(jìn)行齲齒病因、發(fā)病和治療等方面的研究。

狨猴的牙周組織對(duì)一般的代謝改變極為敏感。老年狨猴的牙周膜改變極類(lèi)似于老年人的牙周膜改變，另外，狨猴牙周炎的發(fā)生過(guò)程以及組織病理學(xué)改變也類(lèi)似于人類(lèi)，所以狨猴作為牙周疾病的研究是極為理想的動(dòng)物。

獼猴也用于牙齒折裂方式、程度以及處理時(shí)間、處理方法和組織病理變化的研究，以探討治療效果；還常用于補(bǔ)牙材料、鑲牙材料對(duì)牙髓及牙周組織及骨組織的毒性、致癌性等的研究。

（二)家兔

家兔頸部和頜面部的血管分布類(lèi)似人類(lèi)。人類(lèi)頸面部的手術(shù)常需要結(jié)扎頸外動(dòng)脈，對(duì)于結(jié)扎后產(chǎn)生的一系例問(wèn)題如：血液循環(huán)障礙、血行恢復(fù)時(shí)間等，可以選用成年家兔結(jié)扎單側(cè)的頸外動(dòng)脈，觀察其分布區(qū)域的血管象變化，以探討血管象的恢復(fù)和側(cè)枝循環(huán)徑路的發(fā)展情況。

唇裂俗稱(chēng)兔唇，家兔是研究唇裂和腭裂病因（如遺傳、藥物、環(huán)境等)與其它先天缺陷（如腦水腫、脊柱裂、呆小癥、軟骨發(fā)育不良等)關(guān)系的極好動(dòng)物。

兔下頜骨突出已有報(bào)導(dǎo)，引起突出的原因與人相似。可以用于下頜骨突出原因（如遺傳、咬合不正、肢端肥大癥)的研究，以及下頜骨突出措施的探討，以指導(dǎo)臨床。

家兔是觀察牙髓Arthus炎癥反應(yīng)的敏感動(dòng)物。Arthus反應(yīng)是給已接觸過(guò)抗原的動(dòng)物皮內(nèi)注入同種抗原后，數(shù)小時(shí)內(nèi)局部出現(xiàn)水腫、紅斑、硬結(jié)、壞死等為特征的炎癥反應(yīng)，其反應(yīng)機(jī)理屬于Ⅲ型變態(tài)反應(yīng)，臨床上常用于檢測(cè)體內(nèi)是否有特異性循環(huán)抗體。實(shí)驗(yàn)選用雄性2.5kg，用O溶血素致敏家兔，直到抗體效價(jià)上升，出現(xiàn)Arthus皮膚反應(yīng)之后，再用同一抗原在切牙髓作局部攻擊，此后不同時(shí)間取出牙髓，用組織學(xué)方法和免疫螢光技術(shù)進(jìn)行觀察，光鏡檢查證實(shí)牙髓中存在急性炎癥，免疫螢光證實(shí)牙髓組織中有免疫復(fù)合物，特異螢光主要在血管壁，證實(shí)牙髓中存在著Arthus炎癥反應(yīng)，借助此反應(yīng)，說(shuō)明機(jī)體若通過(guò)牙髓再次受到同種抗原的作用，骨髓組織就出現(xiàn)炎癥，這種炎癥是抗原一抗體局部反應(yīng)的結(jié)果。

家兔的建立口腔粘膜潰瘍病的模型動(dòng)物�？谇徽衬�潰瘍極為多見(jiàn)，一般認(rèn)為是由于自身免疫或免疫功能受損所致�？乖�選用正常產(chǎn)死嬰（死亡時(shí)間不超過(guò)2～3小時(shí))，在無(wú)菌條件下采集口腔粘膜，生理鹽水沖洗干凈后放入0.1MpH7.4的磷酸鹽緩沖液中，將粘膜剪碎研磨成組織勾漿，加入等量福氏完全佐劑或不完全佐劑，混勻呈乳狀液，家兔脊柱二側(cè)皮內(nèi)注射該液，其注8～10個(gè)點(diǎn)，每隔www.med126.com1周注1次，共4次，第1次0.5ml，第2～4次注1～3ml。第4次注后第3天即開(kāi)始出現(xiàn)口腔粘膜潰瘍，以后反復(fù)發(fā)生，直到觀察到第4個(gè)月仍有潰瘍出現(xiàn)。

家兔適宜進(jìn)行碎松質(zhì)一骨髓移植的實(shí)驗(yàn)研究。碎松質(zhì)骨一骨髓（Particulate　Cancellous　Bone　and　Marrow,PCBM)移植術(shù)是用髂嵴挖取的碎松質(zhì)骨，內(nèi)骨膜及骨髓等成分作移植物修復(fù)頜面部骨缺損。常選用健康家兔麻醉后右髂嵴切取1.5×0.5cm²髂骨塊，并挖取適量PCBM，然后再進(jìn)行修復(fù)術(shù)。

家兔還適用于作口腔整形材料的毒性實(shí)驗(yàn)。聚四氟乙烯復(fù)合材料是頜面外科及整形外科中一種比較理想的、應(yīng)用范圍比較廣泛的人工骨材料，既可代替骨，又可代替軟骨及軟組織。常選大白耳家兔作毒性實(shí)驗(yàn)。

家兔也用于口腔粘膜病、牙周病的病因、病理變化的研究，如損傷家兔三叉神經(jīng)的上頜支或下頜支，可造成家兔唇部的實(shí)驗(yàn)性營(yíng)養(yǎng)性潰瘍。也可用于矯形科的實(shí)驗(yàn)研究，如墊實(shí)驗(yàn)，探討牙功能調(diào)整機(jī)制。

（三)狗

狗在口腔醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用很廣泛，如狗2、3、4前磨牙拔除后，如去除根間骨隔，頗似人類(lèi)的拔牙創(chuàng)，用于干糟癥動(dòng)物模型的研究。拔除狗牙時(shí)，具牙周韌帶堅(jiān)韌，牙髓腔較大，往往牙齒折斷或牙槽骨折，牙周韌帶仍不易斷離，拔牙時(shí)應(yīng)先以細(xì)窄蛾眉鑿沿牙周反復(fù)增隙，盡可能鑿斷牙周韌帶，然后以窄牙挻將牙齒挻松，最后以牙鉗夾緊牙齒，順牙長(zhǎng)軸方向以錘叩擊牙鉗，將牙沖出，如以牙鉗拔除，往往造成斷根，拔牙后一般出血較多，應(yīng)認(rèn)真將拔牙窩刮凈，以紗卷止血，方可進(jìn)行以后的實(shí)驗(yàn)。

狗的牙周膜的組織學(xué)、牙周炎的組織病理學(xué)以及牙周病的流行病因與人的相類(lèi)似，所以狗作為牙周病動(dòng)物模型的研究是極為理想的。

在自體牙移植和放射治療的研究問(wèn)題上，狗是常用的動(dòng)物。狗的一些先天性疾病，如唇裂、腭裂、下頜骨突出等，有一定的遺傳因素。狗的下頜骨突出的方式相似于人下頜髂突出，所以，狗也可作為頜面部畸形的動(dòng)物模型研究。

（四)金黃地鼠

金黃地鼠頰囊部涂抹致癌劑二甲基苯并蒽（DMBA)，6周后全部動(dòng)物誘發(fā)生成上皮異常增生性白斑，與臨床病人口腔粘膜白斑病時(shí)病理變化相似，所以金黃地鼠是研究上皮異常增生性白斑較適宜的動(dòng)物，一般選60g體重金黃地鼠容易成功。

慢性機(jī)械損傷煙酒刺激金黃地鼠或大鼠的硬腭后部軟腭前部，可成功地誘發(fā)出與人類(lèi)相同的口腔粘膜白斑，所形成的動(dòng)物粘膜白斑和人類(lèi)口腔粘膜白斑的臨床及病理均基本相似，其恒定期較長(zhǎng)，病損在實(shí)驗(yàn)期內(nèi)未惡變，停止刺激后，在短期內(nèi)也不消退。

金黃地鼠也用于舌癌的研究，1973年Fujita等在采用根管拔髓針搔傷舌體后，再涂抹含有DMBA的丙酮液，經(jīng)13～25周，使100%的動(dòng)物產(chǎn)生了舌癌。

（五)大鼠和小鼠

大鼠的切牙基底部迅速增生的上皮和間葉造牙本質(zhì)細(xì)胞對(duì)環(huán)磷酰胺最為敏感，其靠釉上皮可耐受40mg/kg環(huán)磷酰胺的細(xì)胞毒作用，可以用此來(lái)探討環(huán)磷酰胺細(xì)胞毒性對(duì)切牙生長(zhǎng)的影響。

大鼠腭粘膜下含有大量腭腺，導(dǎo)管開(kāi)口于粘膜表面，此結(jié)構(gòu)可以作為致癌劑侵入的極好門(mén)戶。通過(guò)手術(shù)，把致癌劑植入大鼠下頜骨，可以成功地誘發(fā)下頜骨的骨肉癌，作為骨肉癌的動(dòng)物模型研究。

大鼠舌部涂沫DMBA誘發(fā)的白班形成的潛伏短期，比例高，100%的動(dòng)物能生成白斑，但難以誘發(fā)生成上皮異常增生性白斑，而且病變形成后，逐漸消退，可能與大鼠抗病強(qiáng)、口腔內(nèi)唾液分泌、舌運(yùn)動(dòng)對(duì)所涂藥品有清潔作用等有關(guān)。實(shí)驗(yàn)的部位不同，其結(jié)果也不同。然而，可通過(guò)人工方法減少大鼠對(duì)所涂藥物的清潔作用，提高致癌率，如設(shè)計(jì)下唇粘膜上皮襯里的人工育袋，再涂上致癌劑，以延長(zhǎng)致癌物質(zhì)對(duì)粘膜作用的持續(xù)時(shí)間，這樣可以成功地誘發(fā)大鼠口腔粘膜癌。

大鼠是念珠菌性白斑變化的適宜動(dòng)物。念珠菌感染與某些類(lèi)型白斑，特別是顆粒型白斑的產(chǎn)生有一定關(guān)系。常選用6月齡大鼠，舌背接種白念菌后，舌正常乳頭結(jié)構(gòu)消失，白念菌絲侵入正常角化上皮的角質(zhì)層，并引起增生和炎癥改變，上皮逐漸變成或不全角化上皮，最后的外類(lèi)似人念珠菌性白斑變化，但唇粘膜末出現(xiàn)不全角化層。

小鼠的唇裂和腭裂與人的相似。據(jù)報(bào)導(dǎo)，其遺傳情況也相類(lèi)似，因此，小鼠非常適合于做唇裂和腭裂的動(dòng)物模型。

鼠類(lèi)牙齒的釉質(zhì)厚度較人齒薄，而且鼠類(lèi)無(wú)制齲的功能，故一旦發(fā)生齲齒，其發(fā)展較快，損壞嚴(yán)重，所以，在實(shí)驗(yàn)分析時(shí)需注射這一特性。另外，鼠的門(mén)齒是不斷生長(zhǎng)的，因此，其門(mén)齒不適宜于齲齒的研究。

鼠類(lèi)的品種、品系、年齡不同，對(duì)齲齒易感性也不同。如幼年NIH大鼠的敏感性顯著低于Sprague-Dawley大鼠；變形鏈珠菌致小鼠的齲齒變范圍遠(yuǎn)不如地鼠和大鼠，而變形鏈球菌誘發(fā)地鼠的平滑面齲比大鼠更為廣泛。隨著年齡的增長(zhǎng)，鼠類(lèi)對(duì)齲齒變得不敏感，這可能是由于釉質(zhì)成熟的原因。因此，多數(shù)齲齒實(shí)驗(yàn)需在動(dòng)物17～24日齡開(kāi)始。

不同品系小鼠對(duì)牙周病的感受性不同。如STR/N小鼠對(duì)牙周病易感，而DBA/2A小鼠對(duì)牙周病有抗力。

小鼠和大鼠的唾液腺較為發(fā)達(dá)，可用來(lái)復(fù)制唾液腺疾病的動(dòng)物模型。

巴豆油對(duì)單純皰疹病毒誘發(fā)小白鼠唇癌有促進(jìn)作用，常選用2月齡小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

Sprague-Dawley大鼠、Charles　River　COBC大鼠、Fisher大鼠、Osborn-Mendel大鼠、Wistar大鼠和金黃地鼠、獼猴、豬等動(dòng)物的磨牙面有窩溝，解剖形態(tài)與人類(lèi)磨牙相似，若給致病菌叢和致齲食物可以產(chǎn)生肉眼和組織病理方面與人牙一樣的齲損，利用這些動(dòng)物可以建立研究齲齒的動(dòng)物模型。