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實驗動物科學(xué):第七節(jié) 計劃生育研究中實驗動物的選擇和應(yīng)用

一、常用實驗動物的生殖功能、結(jié)構(gòu)特點實行計劃生育是我國的一項基本國策。到本世紀(jì)末,力爭把我國人中控制在12億以內(nèi),此項任務(wù)十分艱巨。如果人口控制不住,就會影響經(jīng)濟(jì)振興,影響現(xiàn)代化,甚至影響社會的安定。廣大人民群眾迫切需要更多、更安全的、使用方便的節(jié)育措…

一、常用實驗動物的生殖功能、結(jié)構(gòu)特點

實行計劃生育是我國的一項基本國策。到本世紀(jì)末,力爭把我國人中控制在12億以內(nèi),此項任務(wù)十分艱巨。如果人口控制不住,就會影響經(jīng)濟(jì)振興,影響現(xiàn)代化,甚至影響社會的安定。廣大人民群眾迫切需要更多、更安全的、使用方便的節(jié)育措施。為了尋找更多的有效措施來控制人類的生育,保證避孕藥物或其他節(jié)育措施的有效和安全,必須首先在實驗動物身上進(jìn)行實驗研究。因此,保證實驗動物www.med126.com的質(zhì)量和了解實驗動物生殖和發(fā)育等特點,是十分重要。

(一)常用實驗動物的繁殖周期特點

計劃生育研究中常用的實驗動物有小鼠、大鼠、豚鼠、狗、恒河猴等,各種動物的性周期、排卵時間及妊娠期都各不相同。如狗是季節(jié)性單發(fā)情,季節(jié)性多次發(fā)情,而鼠、豚鼠全年都有動情周期的循環(huán),靈長類有月經(jīng)周期,但只有一定季節(jié)才排卵(見下頁表10-37)

(二)常用實驗動物排卵和性周期特點

哺乳動物的排卵可分為兩種類型,一般動物是按一定的周期進(jìn)行排卵的,這類動物不交配也可正常排卵,此稱為自發(fā)排卵或非刺激性排卵;而兔子、貓、雪貂(白鼬)、水貂等,只有經(jīng)過交配的刺激才能進(jìn)行排卵,此稱為誘發(fā)排卵,也稱刺激性排卵或反射性排卵。例如兔子的卵巢幾乎連續(xù)不斷地產(chǎn)生卵子,但成熟的卵泡只有經(jīng)過雄兔交配后才能排卵。這是因為雌兔受到雄兔爬跨時,垂體受到興奮而引起的刺激,這種刺激出現(xiàn)在交配后1小時,此時垂體釋放排卵素(黃體生物素),在促排卵素的影響下大約在交配后10~12小時發(fā)生排卵。如果沒有交配刺激,成熟的卵泡自行退化,經(jīng)10~16小時逐漸被吸收,而新的卵泡又開始成熟。

雌性哺乳動物的性周期可分為三型

第一型包括狗、馬、牛以及其他哺乳動物的性周期。該型性周期又可分為前半期和后半期。前半期由雌激素所控制,雌激素的效果逐漸變強,至發(fā)情期達(dá)到最高程度。這個時期,卵巢內(nèi)卵泡成熟,隨后便引起排卵,隨著排卵,雌激素的作用逐漸減弱,以后即轉(zhuǎn)入以孕激素所控制的后半期。如果沒有妊娠,黃體退化,則又轉(zhuǎn)為由雌激素所控制的新的性周期?傊,在這一性周期中,雌激素作用的期間和孕激素作用的期間是相繼出現(xiàn)的,在兩期之間排卵。第一型是基本型。

第二型包括小白鼠、大白鼠、田鼠類、土拔鼠和沙鼠的性周期。這類動物在發(fā)情期排卵,也形成黃體,但生成的黃體不能分泌孕激素并立即退化,即沒有第一型的后半期,所以性周期是短的。如果妊娠了,黃體繼續(xù)存在,稱為妊娠黃體,能分泌黃體酮

第三型包括兔子、貓等的性周期,這類動物如果不交配就不引起排卵,也不形成黃體,成熟的卵泡逐漸退化消失,隨后又有新的卵泡成熟,并不斷反復(fù)進(jìn)行更新,這種情況下的性周期約為15~16天(成熟卵泡的壽命為13天,卵泡退化約1~2天);如果進(jìn)行交配,則引起排卵,產(chǎn)生黃體,分泌孕激素;若沒有受精,則所形成的假妊娠黃體約經(jīng)20天退化。

表10-37 實驗動物繁殖周期

動物種類第一次交配年齡發(fā)情周期(天)發(fā)情持續(xù)期排卵時間受精卵進(jìn)入子宮時間植入開始時間妊娠期
1(1/2)~2歲雄狗2歲發(fā)情期間隔4~8個月,春秋以品種不同而不同9(4~13)天發(fā)情第3或4天交配后5~6天交配后15天60天(58~63)
6~8月齡季節(jié)性強,春秋季節(jié)多次發(fā)情15~284(3~10)天誘發(fā)排卵,交配后27小時排卵后4天交配后13天63天(52~69)
4~5月齡多次發(fā)情時間界限不明顯誘發(fā)排卵,交配后10.5小時交配后4天交配后7~8天32天(29~36)
大白鼠8~10月齡4.5(4~5)14小時發(fā)情開始后10小時交配后3~4天交配后5~6天22天(19~23)
小白鼠6~8月齡5(4~7)6~24小時發(fā)情開始后2~3小時交配后3~4天交配后4~5天19-21天
豚鼠雄性6月齡雌性5月齡16.5(12~18)8小時發(fā)情開始后10小時交配后3~4天交配后5~7天70天(69~75)
恒河猴第3~5次性周期后才可進(jìn)行交配月經(jīng)周期28(23~33)時間界限不明顯一般為4~6小時月經(jīng)周期9~20天接近發(fā)情結(jié)束時交配后4天交配后9天164天(156~180)

實驗動物性季節(jié)(繁殖季節(jié))差異較大,兔、小白鼠、大白鼠、豬等一年四季都有性的活動(妊娠時除外),這類動物稱為“常年多次發(fā)情(或常年發(fā)情動物)”,其繁殖力很強。狗的發(fā)情有一定的季節(jié)性,雌狗一年內(nèi)發(fā)情兩次,多在春秋兩季,每次發(fā)情持續(xù)14~21天,每次發(fā)情的間隔期約7個月。貓的繁殖季節(jié),北半球是3~8月分,南半球是9月到次年的2月份。歐洲田鼠的繁殖季節(jié)是4~8月份。羊的繁殖季節(jié)在秋季(7~10月份),羊也是“季節(jié)性多次發(fā)情”。

實驗動物性周期一般分為四期:發(fā)情前期,發(fā)情期、發(fā)情后期和發(fā)情間期(休情期)。有的還將發(fā)情后期分為二期(后情一期和二期)。

小鼠動情周期一般分為五期(其中動情后分為二期),約120~144小時。大鼠動情周期為96~120小時。

哺乳類雌性動物在性成熟后出現(xiàn)動情周期變化,其中嚙齒類動物在動情周期不同階段,陰道粘膜發(fā)生比較典型的變化。因次,根據(jù)陰道涂片法的細(xì)胞學(xué)改變,可以推斷卵巢功能的周期變化。方法是用圓頭滴管吸少許生理鹽不滴入陰道口,輕輕沖吸一點陰道液體作涂片,待涂片干燥后,用10%福爾馬林或95%酒精固定,經(jīng)蘇木精一伊紅染色后作鏡檢(表10-38)。

表10-38 動情周期陰道涂片的細(xì)胞變化特點

階 段經(jīng)過時間(小時)卵巢變化細(xì) 胞 變 化 特 點
小鼠大鼠
動情前期(P)(Proestrus Stage)1017~21卵泡加速生長全部是有核上皮細(xì)胞,偶有少量角化細(xì)胞
動情期(E)(Estrus Stage)429~15卵胞成熟排卵全部是無核角化細(xì)胞或間有少量上皮細(xì)胞
動情后期(M)(Metestrus Stage)1210~14黃體生成白細(xì)胞、角化細(xì)胞、有核上皮細(xì)胞均有
動情間期(DI)(Diestrus Stage)48~7260~70黃體退化大量白細(xì)胞及少量上皮細(xì)胞和粘膜

(三)常用實驗動物精子和卵子的運輸特點

1.精子的運輸哺乳動物精子從陰道到輸卵管是很快的。馬、豬和大鼠在交配后很短時間,子宮腔內(nèi)就看到了精子。這些動物由于在交配時宮頸口舒張,所以精子直接射到子宮腔內(nèi)。兔精子進(jìn)入子大約需要1~3小時。

精子獲能是一個生理過程,即精子獲得穿透新排出卵的透明帶的能力。這個過程對一些動物的受精作用是必需的。兔精子獲能需要6小時,大鼠2~3小時,羊約1.5小時,雪貂大約3.5小時。實驗證明兔、大鼠、小鼠、地鼠、羊和雪貂精子的獲能是必需的。

哺乳動物精子在進(jìn)入雌性生殖道以后,對卵的受精能力局限于很短一段時間。各種動物在雌性生殖道內(nèi)有生育能力的時間有很大變化(表10-39)。

表10-39 精子在雌性生殖道內(nèi)的生育力和活動力的時間

實驗動物生育力最長時間(小時)活動力最長時間(小時)
小 鼠613
大 鼠1417
豚 鼠21~2241
30~32-
雪 貂36~48;126-
28~5096
30~4848
144144
蝙 蝠135天159天

在整個動情期,小白鼠子宮為液體充滿而擴(kuò)張,子宮壁產(chǎn)生蠕動,可以推動精子隨液體進(jìn)入輸卵管,在輸卵管內(nèi),精子移動較慢,約在交配后15分鐘到1小時之內(nèi),始能到達(dá)輸卵管壺腹部。精子在輸卵管內(nèi)保持受精力不超過6小時,但活動力可長達(dá)13.5小時。精子要經(jīng)過在子宮或輸卵管中液體的處理后才能獲得受精能力。

2.卵的運輸當(dāng)卵泡破裂時,有一部分卵泡液隨之流出,卵被排到圍卵巢腔內(nèi),所以不發(fā)生漏到腹腔內(nèi)的現(xiàn)象。當(dāng)動情期時,圍卵腔變大并產(chǎn)生一種液體,能把卵帶到輸卵管傘部,加之漏斗部的絨毛活動和輸卵管的收縮幫助卵運輸?shù)捷斅压芟露巍?/p>

卵子的大小并不取決于動物的個體,而幾乎完全取決于所積累的卵黃含量的多少。各種常用實驗動物的卵子直徑(μm)如下:

鼷鼠 75~87.8 狗 135~145 貓 120~130

小白鼠 70~75 豚鼠 75~85 水貂 107

大白鼠 70~75 兔 120~120 猴 125~143

卵由卵巢濾泡運輸?shù)阶訉m腔的時間約3~4天,常用實驗動物輸卵管內(nèi)卵的運輸情況和受精時間見表10-40和10-41。

表10-40 卵子經(jīng)過輸卵管的時間

動 物出發(fā)點卵在輸卵管的時間(天)進(jìn)入子宮時間
排 卵312個細(xì)胞
排 卵416個細(xì)胞
交 配3-4桑椹早期總胚泡后期
倉 鼠交 配2.54-8個細(xì)胞
豚 鼠交 配44-8個細(xì)胞
大 鼠交 配3.5-5桑椹早期至胚泡后期
小 鼠交 配3桑椹早期至胚泡后期
排 卵3-48-16個細(xì)胞
交 配4-53-4個細(xì)胞
交 配3-4-

10-41 哺乳動物卵的受精時間

動 物受精時間(小時)
6-24
23
6-8
倉 鼠5
豚 鼠20
大 鼠12
小 鼠8
雪 貂30
18-20
綿 羊24

(四)常用實驗動物著床、哺乳、胚胎發(fā)育特點

常用實驗動物著床、哺乳、胚胎發(fā)育特點可參考表10-42至10-44。

表10-42 各種動物著床時間

品 種著 床 時 間
小 鼠5天
大 鼠5-6天
豚 鼠6-7天
6-7天
7-8天
雪 貂7-8天
獼 猴9-11天
約11天
13-14天
13-14天
綿 羊17-18天
30-35天
8-9星期

表10-43 各種動物的哺乳期和乳腺數(shù)

動 物哺 乳 期乳 腺 數(shù)
60天5對
7周(也有4~5周斷奶的)4~6對
兔 子42天8~12對
豚 鼠21天1對
大白鼠20~25天6對(胸腺各3對)
小白鼠17~20天5對(胸部3對腹部2對)
田 鼠21(20~25)天7~8對
沙 鼠21天 
老 鼠20天 
60天5~7對
綿 羊4個月1對
山 羊3個月1對

表10-44 實驗小鼠和大鼠各胚胎發(fā)育時期的變化

時期胎齡(日)胚 胎 發(fā) 育
小 鼠大 鼠
111單核細(xì)胞(輸卵管內(nèi))
2 22細(xì)胞期(輸卵管內(nèi))
323.254細(xì)胞期(輸卵管內(nèi))
42.53.58-12細(xì)胞期(輸卵管內(nèi))
533.桑椹期(輸卵管—子宮上部)
63.54囊胚初期(子宮內(nèi))
745囊胚期
84.56植入開始
956.75內(nèi)外胚層分化
105.57.25植入末期,卵黃腔形成,分化成內(nèi)外胚層,
116.57.75植入完畢,出現(xiàn)羊膜。
1278.5出現(xiàn)中胚層和原條。
137.59出現(xiàn)神經(jīng)板,頭部突起,出現(xiàn)尿膜褶。
147.759.5體節(jié)1-4(頭部)完成外層胎盤。
158~8.510腔,胚外體腔內(nèi)和羊膜腔發(fā)育。體節(jié)5-12(頸椎部)
   形成神經(jīng)溝,胚回轉(zhuǎn)開始。
168.5~910.5體節(jié)13-20(胸椎前部)胚回轉(zhuǎn)結(jié)束。
179.511體節(jié)21-25(胸椎后部),神經(jīng)溝閉鎖。
181011.5體節(jié)26-28(腰椎前部),前肢出現(xiàn)。
1910.2511.75體節(jié)29-31(腰椎后部),后肢出現(xiàn)。
20  體節(jié)32-33(薦椎后部)。
21 12體節(jié)34、35(薦椎后部)。
2210.5 體節(jié)36(第一層尾椎)鼻窩形成
23  體節(jié)37、38(尾椎)。
24  體節(jié)39、40(尾椎)。
251112.5體節(jié)41、42,前肢變大。
26  體節(jié)43-45(尾椎)手指分化。
271213體節(jié)46-48(尾椎)臍疝明顯。
2812.513.5體節(jié)49-51(尾椎),鼻上頜閉鎖。
29 14體節(jié)52-55(尾椎)。
301314.5體節(jié)56-60(尾椎),耳孔開,耳殼形成
3113.5~1415體節(jié)61-63(尾椎),口蓋板閉鎖
3214.515.5體節(jié)64(尾椎)、體表出現(xiàn)毛囊。
331516體節(jié)65(最終尾椎)
3416-16.517-18臍疝消失,眼臉、耳殼閉鎖。
3517-1919-22胎盤發(fā)育顯著。臨產(chǎn)。

(五)8常用實驗動物的生殖結(jié)構(gòu)特點

1.乳腺分布特點

常用實驗動物乳腺分布特點見圖10-9。

圖10-9 常用實驗動物乳腺分布特點

2.子宮結(jié)構(gòu)特點

家兔的子宮屬于雙子宮型,是由一對幾乎獨立的、游離的子宮彎曲而成,兩個子宮各有一個子宮頸分別與同一個陰道相通,即兩個子宮的子宮頸共同開口于同一個陰道。所以,兔的子宮無所謂子宮角或子宮體,只是一對筒狀結(jié)構(gòu),每只長度平均約7厘米,寬約3-4mm,但妊娠后期的子宮,在腹腔內(nèi)可以擴(kuò)展到很大的范圍。

嚙齒類動物的子宮均屬雙子宮型。其中,大白鼠的子宮呈Y字形排列,左左兩個子宮頸開口于共同陰道和家兔的子宮一樣,屬于雙子宮,雙子宮頸,單陰道類型。

豚鼠的子宮屬于雙角型子宮,兩個子宮角長約3~5cm,直徑約5mm,背腹扁平。子宮體長約2cm,直徑6mm,亦是背腹壓扁。比子宮角略寬一點。子宮頸有兩個內(nèi)口,但只有一個公共外口。

肉食動物的子宮屬于雙角型子宮。具有發(fā)育良好的二個子宮角,單子宮體,單子宮頸和單陰道,不過左右兩個子宮腔愈合范圍較大,未愈合部分則形成弓狀彎曲的子宮角。狗的子宮角細(xì)而長,子宮體很短,角體比例在5~6:1。中等體形的狗,子宮角長約12~15厘米,子宮體長約2~3厘米。另外,狗的子宮角腔內(nèi)徑均勻,沒有彎曲,近乎直線。子宮頸很短,含有厚的肌肉層。

貓的雙角子宮也很明顯,但子宮體約4厘米,無論是相對比例還是絕對長度均比狗的子宮體長。

靈長類的子宮屬于單子宮型、梨狀,無子宮角,輸卵管直接開口于子宮腔。常用實驗動物子宮類型見圖10-10。

3.胎盤類型牛、馬、豬為上皮絨膜型;綿羊、山羊為結(jié)締絨膜型;狗、貓為內(nèi)皮絨膜型;兔為血內(nèi)皮型;大鼠、豚鼠、恒河猴為血絨膜型。

4.生殖腺結(jié)構(gòu) 可參看表10-45和10-46。

圖10-10 常用實驗動物子宮類型

表10-45 雄性動物生殖結(jié)構(gòu)的比較解剖特點

動物種類睪丸壺腹腺儲精囊前列腺尿道球部腺體前列周圍腺體陰莖骨尿道腺體球腺體包皮腺體腹股溝腺體
蝙蝠3×24×15A5×31×1AFFAAA
14×8AA5×24×3AFAAAA
40×30FA25×16AAFAAAA
沙土鼠14×96×520×129×76×4AFFAAA
豚鼠25×15A115×715×88×5AFAAPDA
田鼠14×113×311×68×64×3AFFA3×1A
貂類11×8FA10×5AAFAAAA
小鼠6×42×113×44×43×2AFFA6×5A
兔(美國)35×1515×419×719×66×36×2AAAA15×7
袋鼠15×11AA40×919×15AAAAAA
35×17FA25×66×2AAAAA10×4
大鼠20×124×420×1013×105×3AFFA16×4A
地鼠3×23×1A3×1.51×1AAAA分散的A
松鼠30×12F7×428×1813×13AFA10×7AA
地松鼠14×8F8×718×188×6AFA10×8FA
類人猿10×7A14×76×5AAFAA分散的A
雪貂FFAFAAFAAA 

注①F表示屬于一種功能性腺體不能估量

②A表示這種結(jié)構(gòu)不發(fā)生

③PD表示這種腺體是不發(fā)達(dá)的

④測量的單位為毫米

表10-46實驗動物的副性腺

動 物精 囊前 列 腺尿道球腺凝 固 腺包 皮 腺
----
---
--
豚鼠--
鼠類(大、小鼠)
--
--

狗缺少精囊和尿道球道腺,貓也沒有精囊,雄兔還有前列旁腺,鼠類多一種凝固腺,大鼠和小鼠有包皮腺。

二、動物的選擇與應(yīng)用

(一)口服避孕藥物的篩選研究

目前國內(nèi)外廣泛應(yīng)用的口服避孕藥(孕激素與雌激素的復(fù)合片以及單純孕激素藥片)其避孕效果都非常好,但還存在一定副作用。為了提高口服避孕藥的可接受率,有必要尋找更加理想的、有效、安全、經(jīng)濟(jì)、方便的藥物。

篩選口服避孕藥的實驗動物多使用嚙齒類實驗動物,因為它們具有規(guī)律的動情周期,排卵有明顯的指標(biāo),易于檢測,價格便宜,而具有月經(jīng)周期的靈長類動物反而不是都被選擇的對象。因為這類動物來源困難,價格昂貴,排卵和月經(jīng)周期難于檢測。

當(dāng)動物實驗證實某藥物有抗生育的效果后,還必須進(jìn)行各種藥理實驗。

1.孕激素活性測定 根據(jù)Mcphail的方法,以未成熟雌性家兔子宮內(nèi)膜的變化為觀察指標(biāo);

2.妊娠維持實驗 一般選大鼠為動物模型;

3.雌激素活性及抗雌激素活性測定 用未成年或去卵巢未成熟大鼠為動物模型,以子宮稱重或陰道涂片為觀察指標(biāo);

4.雄激素活性及抗雄激素活性測定 用大鼠或小鼠為動物模型,以前列腺腹側(cè)及儲精囊稱重為觀察指標(biāo);

5.對促性腺激素分泌的影響 用嚙齒類或其它種類動物為實驗?zāi)P,以是否抑制排卵或測定外周血的促性腺激素含量為觀察指標(biāo);

6.蛻鎮(zhèn)痛形成實驗 用小鼠為動物模型;

7.糖皮質(zhì)激素活性測定 用大量為動物模型。

以上7個為基本實驗,根據(jù)需要還可以增添其它實驗。

(二)避孕藥物的藥理研究

1. 女用避孕藥物 研究最基本方法是抗生育實驗,就是在與雄性動物合籠前和合籠交配期間,給雌性動物服藥,觀察藥物對生育的影響。以檢查雌性動物懷孕百分率和每只孕鼠之胚胎數(shù)為指標(biāo)。如果能找到一種藥具有防止受精卵著床的作用或中斷早期妊娠的作用,那就不必天天服藥,而只在需要時服用。這是避孕藥研究工作者多年來的一項設(shè)想。常需要作抗著床和抗早孕實驗?怪矊嶒炇菍⒋剖笈c雄鼠合籠,每天上午檢查雌鼠陰道口有無陰栓,于出現(xiàn)陰栓后第1~5天,每日給藥一次,于陰栓出現(xiàn)后第12天處死動物,以胚胎數(shù)和懷孕百分率為指標(biāo)。陰栓是某些嚙齒類動物在交配后,隨即形成的一種白色漿液性物質(zhì),堵塞在陰道至子宮頸的腔內(nèi),稱為陰栓(Vaginal plug)。是檢查動物已否交配的一種標(biāo)志,將出現(xiàn)陰栓的當(dāng)天算為妊娠“零天”。陰栓是由雄鼠精囊腺和凝固腺的分泌物在陰道內(nèi)凝固而成的產(chǎn)物。小白鼠一般在交配后4~5分鐘內(nèi)形成。大的陰栓可凸出于陰道口,小的陰道或子宮頸內(nèi),需要翻開陰道口才能查見。陰栓一般在交配后一小時起漸漸軟化,經(jīng)16~24小時后脫落。但也有只存在4~5小時,而最多的可存在48小時以上。小鼠陰栓比較牢固,大鼠的陰栓不牢固,容易脫落,所以檢查大鼠陰栓時,除檢查陰道外,還應(yīng)在籠底尋找陰栓。亦可用生理鹽水沖洗陰道,在顯微鏡下檢查沖洗液中有無精子,有精子表示已交配?乖缭袑嶒炇窃谥玻ǔ霈F(xiàn)陰栓后第5天著床)以后給藥,一般于陰栓出現(xiàn)后第6~9天連續(xù)給藥4天,第12天處理,以檢查胚胎數(shù)和死胎為指標(biāo)。抗生育、抗著床和抗早孕實驗中最常用的動物為壯年的28~35g的小鼠,也可用體重200~250體重的大鼠。在探討一個避孕藥的作用原理時,有時需要檢查一個藥物有沒有抑制排卵作用。需要進(jìn)行抗排卵實驗,常選用體重2~3.5kg的雌兔進(jìn)行實驗。

2.男用避孕藥物研究 長期以來,對男用避孕藥的研究不很重現(xiàn),進(jìn)展緩慢。藥物能抑制精子的生成過程,干擾男性生殖活動的激素調(diào)節(jié);干擾副性腺和改變精液的理化特性等,均可達(dá)到不孕的目的,F(xiàn)在認(rèn)為,精子形態(tài)的成熟是在睪丸,而生理的成熟是在副睪。藥物作用于副性腺,干擾精子成熟或改變精液理化性質(zhì)所引起的男性不孕似較理想。常選用成年雄性大白鼠作實驗,如觀察藥物對大白鼠生育力的影響;對大白鼠精子數(shù)的影響;對大白鼠精子活動力的影響以及對雄性激素的作用等。

實驗中常需要采集實驗動物的精液,采集的方法有電刺激法、假陰道法、按摩法以及直接殺取法。電刺激法適用于多種實驗動物,尤其是野生實驗動物的采精,其原理是通過刺激輸卵管壺腹附近的神經(jīng)末稍,引起低級射精中樞興奮而促使動物射精。所用電刺激采精器的主要技術(shù)參數(shù)為:電源電壓-交流220V;輸出可調(diào)電壓0~20V;可高頻率20~60Hz:輸出電流0~1000mA:輸出波形-正弦波或方波。假陰道法是用硬質(zhì)外殼襯以膠質(zhì)內(nèi)胎制成的采精器械,內(nèi)部注以溫水和充氣,適當(dāng)加以潤滑,使其與雌性動物生殖道的內(nèi)環(huán)境相似,以誘起雄性動物射精常,常適用于兔的采精。貓在有發(fā)情母貓引誘情況下,當(dāng)公貓爬跨時,也可使用此法采精,但象水貂那樣在交配時雌雄動物長時間緊密擁抱的動物,無法使用假陰道。按摩法主要用于狗的采精,這是因為狗在交配時,雄狗陰莖的球狀海綿體充血脹大并和雌狗的陰道鎖結(jié),采取假陰道法采精有一定困難,故多采用按摩法。狗的射精分為3段,前段為尿道腺的分泌物,約為0.25~2.0ml的透明液體:中段排出的是濃精,約0.5~3.0ml;第3段則為大量透明的前列腺分泌物,量可達(dá)3~20ml,但幾乎不含精子。按摩法對于調(diào)教好的雄狗方便易行,并可存細(xì)胞觀察射精情況,收集所需部分,無需特殊設(shè)備。但不能用于野生犬科或陌生猛犬。直接殺取法適于前面幾種方法不適用時采用,如小白鼠、水貂等,系將動物處死,取其輸卵管和附睪丸,用生理鹽水或其它專門稀釋液沖洗,制成精子懸浮液備用。常用實驗動物采精方法和精液特點見表10-47。

表10-47 各種動物精液采取方法和精液特點

動物采取法交配時間射精時間顏色精液量(毫升)精液密度萬/立方毫米活力畸形率%pH
假陰道法電刺激法瞬間瞬間乳白5~690~100卅70<106.6~6.8
假陰道法陰道內(nèi)采取暫時數(shù)秒至10數(shù)秒50~15020~30同上57.2~7.6
假陰道法10分5~10分灰白200~30020同上5~106.4~7.4
綿羊假陰道法電刺激法瞬間瞬間乳白0.5~0.2300同上同上6.4~7.2
山羊同上同上同上乳白帶黃同上同上同上同上同上
按摩法 假陰道法10分1分乳白0.5~3.010~15同上10~156.6~6.8
家兔假陰道法陰道內(nèi)采取10秒瞬間乳白0.5~1.050~60同上同上6.6~6.8
大鼠乙醚麻醉同上同上乳白同上0.1 同上-
電刺激法2秒1秒同上0.1~0.5200~500卄卅 70<<206.5~7.4

(三)中樞神經(jīng)系統(tǒng)對促性腺激素分泌的調(diào)節(jié)作用研究

不同動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)對垂體促性腺激素分泌的調(diào)節(jié)是有很大差異的。如靈長類和大鼠的垂體以同樣的方式對促黃體素釋放激素起反應(yīng),并以同樣的形式被大劑量雌激素或雄激素所抑制。這兩種動物的中樞神經(jīng)系統(tǒng),在自發(fā)性排卵中都是必不可少的,這是它們的共同點。但調(diào)節(jié)大鼠促性腺激素釋放的中樞是視前結(jié)節(jié)系統(tǒng),若視前區(qū)受損,則在排卵前雌激素不能導(dǎo)致促黃體激素的釋放。而這一區(qū)域受損不影響恒河猴促黃體激素的釋放,因為恒河猴促性腺素釋放的調(diào)節(jié)中樞是結(jié)節(jié)漏頭斗狀系統(tǒng),這是它們的不同點。

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)對促性腺激素調(diào)節(jié)的研究中,大鼠是常用的動物模型,因這方面已積累了大量的有關(guān)研究資料:價格便宜,易于飼養(yǎng),有規(guī)律的性周期便于檢測,且周期短,易于安排實驗,排卵前有自發(fā)的LH峰,所得的結(jié)果一般易于在猴子身上得到重復(fù)。

陰道涂片可以準(zhǔn)確地判斷大鼠和小鼠動情周期的各個階段,從而可推測排卵前LH峰及排卵,但此方法很少用于田鼠,因為田鼠在動情周期陰道有滲出物,所以不一定要做陰道涂片。推測靈長類LH峰,須測定外周血的孕激素水平,如單獨根據(jù)月經(jīng)出血期來推測有可能導(dǎo)致判斷的錯誤。

大鼠、小鼠和田鼠的黃體期不能自發(fā)地變成功能性黃體,在正常情況下,需交配誘發(fā)黃體激素的分泌,而恒河猴和人則自發(fā)性功能黃體。家兔和貓是誘發(fā)性(交配)排卵,一旦排卵發(fā)生,則黃體能自發(fā)地變?yōu)楣δ苄缘摹?/p>

(四)神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)研究

通過對人性行為的內(nèi)分泌研究,發(fā)現(xiàn)人類性活動大多可以用動物實驗來闡明,而最好的動物模型不一定是靈長類。Nadle分析了大猩猩、黑猩猩和猩猩的性活動行為,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在新皮層發(fā)育及智能上,他們大體上是相等的,但在性活動方面卻有很大的不同,大猩猩交配大多集中在月經(jīng)周期中期,且雌性動物起主導(dǎo)作用,猩猩可以在周期的任何時期進(jìn)行交配,沒有明顯的排卵標(biāo)志,雄性動物的性要求很強烈,在交配中占主導(dǎo)地位,黑猩猩屬這兩者之間。所以雖然靈長類最接近人類,但用它作神經(jīng)內(nèi)分泌學(xué)研究所得的結(jié)果也能完全適用于人,而較小的動物如大鼠,其性活動與人也有共同點,如在大鼠的動物實驗及人類的臨床觀察中,均存在維持性功能的雄性激素水平比維持生育功能的水平低,人類性功能隨年齡的增長而減退,某些器官出現(xiàn)肥大等變化在大鼠也都有發(fā)生,所以大鼠用于性活動研究,也是一個較好的模型。

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