體外實(shí)驗(yàn)表明,載脂蛋白B是難溶于水的蛋白質(zhì)。目前所知,ApoB族可分為兩個(gè)亞類,即ApoB48和ApoB100。ApoB主要成份是B100,其次為B48,其他形式如ApoB75,ApoB41,ApoB36等均為ApoB100的不同降解產(chǎn)物。
從1966年Margoli和Landgon開始研究ApoB100的結(jié)構(gòu),不同實(shí)驗(yàn)室以特異性蛋白水解酶或化學(xué)裂解法研究ApoB的結(jié)構(gòu),所得ApoB純度均不盡人意。作者曾于1986年采用特殊的沉淀抽提法獲得高純度的血清ApoB100純品,以化學(xué)裂解法在國內(nèi)首先報(bào)道了ApoB100純品的氨基酸組成,與Ologsson報(bào)道的結(jié)果基本一致,如表3-1所示。
表1 人的ApoB100的氨基酸組成
種類 | mol/103mol氨基酸 | ||||
作者制備的 | Ologsson | Avogaro | Yang | Yang | |
ApoB100 | ApoLDL | ApoB | ApoB100 | ApoB100 | |
Lys | 65.26 | 76.9±1.0 | 69.3±1.9 | 67.3 | 78.9 |
His | 18.46 | 25.1±0.5 | 19.5±1.zxtf.net.cn/kuaiji/7 | 25.4 | 23.4 |
Arg | 34.97 | 35.4±3.3 | 37.0±6.8 | 32.1 | 31.7 |
Asp | 100.96 | 83.6±1.6 | 94.5±7.4 | 106.2 | 103.6 |
Thr | 65.12 | 58.1±2.1 | 64.8±3.1 | 63.7 | 67.8 |
Ser | 81.30 | 72.3±1.8 | 82.0±4.0 | 81.3 | 87.1 |
Glu | 120.91 | 122.4±2.2 | 130.1±3.1 | 123.8 | 117.4 |
Pro | 41.07 | 43.7±3.5 | 46.2±3.1 | 37.8 | 40.3 |
Gly | 57.45 | 54.0±2.4 | 65.3±7.9 | 48.2 | 46.3 |
Ala | 111.29 | 67.4±1.3 | 72.6±2.7 | 61.1 | 59.5 |
Val | 59.48 | 59.7±1.3 | 57.0±2.7 | 61.1 | 57.5 |
1/2Cystine | 6.72 | 8.0±1.4 | 14.5±2.6 | 6.7 | 5.6 |
Met | 14.45 | 19.7±0.5 | 16.7±1.4 | 18.1 | 16.4 |
Ile | 61.97 | 65.4±1.9 | 51.7±1.9 | 61.1 | 58.8 |
Leu | 123.94 | 130.7±2.5 | 121.2±4.4 | 118.0 | 120.6 |
Tyr | 34.55 | 34.8±1.4 | 31.0±1.6 | 29.5 | 31.8 |
Phe | 54.01 | 55.4±2.3 | 38.4±2.6 | 52.8 | 47.6 |
Trp | 未測 | 未測 | 未測 | 5.7 | 6.5 |
1986年楊朝諭采用生物化學(xué)方法,得到人LDL的ApoB100純品并測出了ApoB100一級結(jié)構(gòu)的氨基酸排列順序,其結(jié)果與從cDNA推導(dǎo)的序列完全一致,從而解決了二十余年懸而未決的難題。
ApoB100是單鏈糖蛋白,分子量為510kD,主要在肝臟,少數(shù)在小腸合成。ApoB100包括27個(gè)(或24)氨基酸信號肽和4536個(gè)氨基酸殘基的成熟單體蛋白。1986年ApoB100的全部氨基酸殘基排列順序結(jié)構(gòu)已闡明。ApoB100分子中含有25個(gè)Cys殘基,其中有11個(gè)Cys殘基集中分布在前面500氨基酸組成區(qū)域,形成鏈內(nèi)二硫健,所以N端高度交聯(lián)成典型球形結(jié)構(gòu),Cys殘基通過硫脂鍵與軟脂酸硬脂酸以共價(jià)鍵相結(jié)合,使ApoB牢固地連接著脂質(zhì)成份。ApoB100中對脂類結(jié)合的必要的結(jié)構(gòu)區(qū)域在2035~2506和4002~4527氨基酸殘基之間,這兩個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)域重復(fù)出現(xiàn)兩性親脂α-螺旋區(qū)段。另有一種結(jié)合脂質(zhì)的重要結(jié)構(gòu)是含疏水和親水性氨基酸交替排列兩性親脂β-折疊結(jié)構(gòu),這種結(jié)構(gòu)分布在整個(gè)分子序列中,但集中于四個(gè)富含脯氨酸域,這種富含脯氨酸的重復(fù)序列是ApoB100所特有的,使ApoB100能夠?qū)⒘字瑐?cè)鏈深埋其間并使之緊密結(jié)合。由于ApoB100的兩性α-螺旋和富含脯氨酸的疏水肽及可被脂酰化的Cys殘基形成特殊結(jié)構(gòu),使得ApoB100能夠與單層極性脂牢固地結(jié)合并有許多脂質(zhì)結(jié)合區(qū),并使其在VLDL和LDL從分泌到被清除的整個(gè)過程中,ApoB100不在脂質(zhì)白分子間轉(zhuǎn)換,這是與其他載脂蛋白不同之處。LDL上的ApoB100結(jié)構(gòu)如圖3-1所示。
圖3-1 LDL上的ApoB100結(jié)構(gòu)圖
ApoB100生理功能有:①合成裝配和分泌富含甘油三酯的VLDL;②是LDL的結(jié)構(gòu)蛋白;③是LDL受體的配體,調(diào)節(jié)LDL從血漿中的清除速率。
Apozxtf.net.cn/yishi/B48因分子量是ApoB100的48%而得名。存在于CM中,不與其他脂蛋白分子交換。ApoB48在小腸合成,是組裝CM所必需的載脂蛋白。由小腸細(xì)胞分泌后進(jìn)入淋巴液,并通過胸導(dǎo)管再進(jìn)入血液循環(huán),CM再分布到毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞,主要是骨骼肌和脂肪組織的毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞,脂肪酶可水解CM中甘油三酯的80%~90%,剩下的脂蛋白顆粒則稱為CM殘粒,再送到肝臟,被肝脂酶進(jìn)一步水解代謝,最后被能識別ApoE的殘粒受體攝取。該殘粒受體是LDL受體,還是LDL受體相關(guān)蛋白或其他蛋白質(zhì),目前還不清楚。
ApoB48在血漿中生物半壽期僅5~10min,因?yàn)榉纸馑俣群芸,在血清中的濃度很低,約相當(dāng)于ApoB100的0.1%。經(jīng)SDS-PAGE電泳染色在VLDL組分中,仍可檢出痕量的ApoB48。攝入含脂肪豐富的食物后,ApoB48/ApoB100比值明顯增加。