| 公開(公告)號(hào) | CN1448507A |
| 公開(公告)日 | 2003.10.15 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN02108299.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.03.29 |
| 專利名稱 | 基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝 |
| 主分類號(hào) | C12N9/08 |
| 分類號(hào) | C12N9/08;C07K1/16;C07K1/18 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 四平市科學(xué)技術(shù)研究院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 董偉東;劉兆柯;路海源 |
| 地址 | 136000吉林省四平市師院南路1號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 四平市新時(shí)代專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 孫國(guó)振 |
| 國(guó)省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種生物工程基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝，其特征是：(1)、挑取工程菌單菌落接種在含氨芐的LB培養(yǎng)基斜面培養(yǎng)，然后接種到含AMP100μg/ml的LB培養(yǎng)基的三角瓶中，30℃、180轉(zhuǎn)/分，振蕩培養(yǎng)10小時(shí)，OD值達(dá)到1.0時(shí)，收集菌液；(2)、取上述菌液，以1∶10的比例，接種到含有AMP100μg/ml的改良M9培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，30℃培養(yǎng)6小時(shí)，OD值達(dá)2.5-3.0時(shí)，迅速升溫至42℃，熱激誘導(dǎo)表達(dá)，然后再培養(yǎng)3-4小時(shí)，離心收集菌體；(3)、取菌體，用0.9％的NaCl洗兩次，然后用PH7.8TES緩沖液懸浮菌體，冰浴條件下攪拌30分鐘，加入稀釋6倍的TES溶液，冰浴條件下攪拌40分鐘，離心取上清液，離心的菌體加TES溶液冷凍，取出速暖至冰水混合物狀，加入稀釋6倍的TES溶液，攪拌40分鐘，離心取上清液，將上述，上清液經(jīng)超濾濃縮，得粗酶液；(4)、粗酶液經(jīng)透析：DEAE-Sephadex-A50離子交換柱層析，其全部進(jìn)入膠面后，再用PBS緩沖液進(jìn)行梯度洗脫，收集目的蛋白峰溶液，再用Sephadex-200分子篩柱層析，收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部分，用PH7.8PBS溶液洗脫，自動(dòng)餾分收集器收集，冷凍、干燥。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種生物工程，基因重組人源銅鋅超氧化物歧化酶的制備工藝，其特征是首先進(jìn)行工程菌發(fā)酵擴(kuò)增，熱激誘導(dǎo)，收集菌體。經(jīng)緩沖液抽提、再經(jīng)離子交換、分子篩柱層析分離純化。本發(fā)明具有工藝流程簡(jiǎn)單、SOD半衰期長(zhǎng)、產(chǎn)量高、單位成本低等優(yōu)點(diǎn)，本產(chǎn)品可廣泛應(yīng)用在化妝品、保健食品、醫(yī)療等領(lǐng)域。 |
| 國(guó)際公布 |
