| 公開(公告)號 | CN1171899C |
| 公開(公告)日 | 2004.10.20 |
| 申請(專利)號 | CN02100558.3 |
| 申請日期 | 2002.02.05 |
| 專利名稱 | 一種新型纖溶酶原激活劑(TPA)突變體的結(jié)構(gòu)與用途 |
| 主分類號 | C07H21/00 |
| 分類號 | C07H21/00;C07K14/00;C12N15/64;A61K38/16;A61P9/10 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍空軍總醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 朱美財;李文;占志;王蔭靜 |
| 地址 | 100036 北京市阜成路30號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | TPA突變體的核苷酸序列(5’-3’)：1 atgtcttaccaaggaaacagtgactgctactttgggaatgggtcagcctaccgtggcacg 6061 cacagcctcaccgagtcgggtgcctcctgcctcccgtggaattccatgatcctgataggc 120121 aaggtttacacagcacagaaccccagtgcccaggcactgggcctgggcaaacataattac 180181 tgccggaatcctgatggggatgccaagccctggtgccacgtgctgaagaaccgcaggctg 240 |
| 摘要 | 本發(fā)明是根據(jù)TPA的結(jié)構(gòu)特點，在將TPA分子中指狀區(qū)和Kringlel區(qū)去掉的基礎(chǔ)上，將TPA分子中PAI-1結(jié)合位點氨基酸進行突變，構(gòu)建具有TPA活性且其活性不被PAI-1抑制的新一代TPA突變體。主要內(nèi)容是擴增出天然TPA氨基酸1-3和176-527的DNA序列。將TPA DNA中PAI-1結(jié)合位點，核苷酸序列373-384的AAG CAC AGG AGG改變?yōu)镚CG GCC GCG GCG，使相應(yīng)的氨基酸KHRR突變?yōu)锳AAA，構(gòu)建了新的TPA突變體，并克隆于大腸桿菌表達載體。在大腸桿菌中得到高效表達。表達蛋白占總菌體蛋白的30％，以包涵體形式存在。經(jīng)蛋白質(zhì)復(fù)性，得到了有活性的TPA突變體。將新的TPA突變體，克隆于比赤酵母分泌型表達載體，在培養(yǎng)上清中得到高活性的TPA突變體。在大腸桿菌和比赤酵母表達的新的TPA突變體與PAI-1反應(yīng)后TPA活性無抑制。說明核苷酸序列373-384和其相對應(yīng)的氨基酸序列影響PAI-1結(jié)合活性，而不影響其纖溶酶原水解活性。故本發(fā)明涉及針對一種新型TPA突變體的核苷酸序列和結(jié)構(gòu)及其成為治療活性好、用量少的治療心肌梗塞和腦血栓等血栓性疾病的新型生物工程藥物。 |
| 國際公布 |
