| 公開(公告)號 | CN1228442C |
| 公開(公告)日 | 2005.11.23 |
| 申請(專利)號 | CN03139762.X |
| 申請日期 | 2003.07.09 |
| 專利名稱 | 胚胎干細胞定向誘導分化為肝細胞的方法 |
| 主分類號 | C12N5/00 |
| 分類號 | C12N5/00;C12N5/06 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 暨南大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 胡安斌;蔡繼業(yè) |
| 地址 | 510632廣東省廣州市天河區(qū)石牌 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 廣州華進聯(lián)合專利商標代理有限公司 |
| 代理人 | 王東亮 |
| 國省代碼 | 廣東;44 |
| 主權項 | 一種胚胎干細胞定向誘導分化為肝細胞的方法，其特征是：其具體的誘導分化步驟如下：(1)、ES細胞培養(yǎng)：將保存在液氮中的BALB/c系小鼠的ES細胞取出，立即置于37-39℃的環(huán)境中解凍復蘇，離心棄上清去除DMSO以及殘存的胰酶，加入ES培養(yǎng)基吹散，以2×104cells/ml的密度將細胞轉至一次性塑料培養(yǎng)瓶中，每天換液一次，每2-3天傳代一次；(2)、ES細胞發(fā)育為EBs：上述的ES細胞換用EBs培養(yǎng)基，將細胞轉至未經過促細胞黏附作用處理、瓶底光滑的玻璃培養(yǎng)瓶中用搖動培養(yǎng)法培養(yǎng)，每1小時搖動細胞一次，使其懸浮生長發(fā)育為EBs，第2-3天每3小時搖動一次，第4-5天每小時搖動一次；EBs的發(fā)育分化期間每1-2天換液一次，搖動培養(yǎng)法培養(yǎng)5天；(3)、肝細胞定向誘導分化：EBs懸浮發(fā)育生長5天后，于第6天轉至0.1％白明膠處理過的6孔培養(yǎng)板和24孔培養(yǎng)板上，讓其充分貼壁生長分化，每2天換液一次，胚體貼壁并向四周生長分化；第7天-第11天，加入aFGF，終濃度為100ng/ml；第7天-19天，加入TGF，終濃度為20ng/ml，AFP，終濃度為20ng/ml；第11天-第19天，加入HGF和OSM，終濃度分別為20ng/ml和10ng/ml，10-7M地塞米松，5μg/ml胰島素，5μg/ml轉鐵蛋白，5μg/ml亞硒酸。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種胚胎干細胞誘導分化為肝細胞的方法，ES分化用的細胞生長因子分別是轉化生長因子TGF，甲胎蛋白AFP，酸性纖維細胞生長因子aFGF，肝細胞生長因子HGF，制瘤素OSM，地塞米松DEX，以及胰導素、轉鐵蛋白、亞硒酸(ITS)，其肝細胞分化率為30％以上。 |
| 國際公布 |
