| 公開(公告)號 | CN1257180C |
| 公開(公告)日 | 2006.05.24 |
| 申請(專利)號 | CN02139818.6 |
| 申請日期 | 2002.12.11 |
| 專利名稱 | 采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒快速抽提純化DNA的方法 |
| 主分類號 | C07H21/04(2006.01)I |
| 分類號 | C07H21/04(2006.01)I;C07H1/08(2006.01)I;C12N15/10(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 湖南大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 王柯敏;何曉曉;李 杜;譚蔚泓;黃杉生;林 霞 |
| 地址 | 410082湖南省長沙市河西岳麓山湖南大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 湖南兆弘專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 趙 洪 |
| 國省代碼 | 湖南;43 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法，其特征在于：以帶正電荷且具磁性的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細(xì)胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒與組織裂解液或細(xì)胞裂解液中帶負(fù)電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復(fù)合物，在外磁場的作用下實(shí)現(xiàn)納米顆粒-DNA復(fù)合物與組織裂解液或細(xì)胞裂解液的分離，再通過解離液將結(jié)合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實(shí)現(xiàn)對DNA的抽提純化；所述的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒用以下方法制得：第一步首先制備納米四氧化三鐵膠體，即將現(xiàn)配的20mL1mol/L三氯化鐵水溶液與5mL2mol/L的二氯化鐵溶液混合，其中2mol/L的二氯化鐵溶液用2mol/L鹽酸配制，加入250mL0.7mol/L的氨水，室溫下攪拌半小時后，用磁鐵分離，倒掉上清液，所得沉淀用30mLlmol/L四甲基氫氧化銨溶解，然后加入二次蒸餾水至250mL，用孔徑為40-80μm的砂芯漏斗過濾，除去聚集的大顆粒；第二步：將體積比為4.2∶1∶1的環(huán)己烷、表面活性劑曲拉通X-100和正己醇混合均勻，加入360μL水作為分散相，攪拌5min后形成油包水的微膠囊，加入200μL納米四氧化三鐵膠體，攪拌均勻；再將體積比為1∶1的100μL正硅酸乙酯和100μLN-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷混合均勻后加入到微膠囊體系中，攪拌均勻后，加入100μL的氨水催化它們在微膠囊中的同步水解，整個反應(yīng)時間為24小時，反應(yīng)完備后用丙酮破乳，在外磁場下收集顆粒，即可制備氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒。 |
| 摘要 | 采用氨基化二氧化硅殼磁性納米顆�？焖俪樘峒兓疍NA的方法，以帶正電荷且具磁性的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒為載體，直接與組織裂解液或細(xì)胞裂解液相互作用，帶正電荷的氨基化二氧化硅殼磁性納米顆粒與組織裂解液或細(xì)胞裂解液中帶負(fù)電荷的DNA通過靜電作用形成納米顆粒-DNA復(fù)合物，在外磁場作用下實(shí)現(xiàn)納米顆粒-DNA復(fù)合物與組織裂解液或細(xì)胞裂解液的分離，再通過解離液將結(jié)合在納米顆粒表面的DNA解離下來，從而實(shí)現(xiàn)DNA的快速抽提純化。該方法不需用酚/氯仿抽提法除去核酸溶液中的蛋白質(zhì)，簡化了步驟，提高了效率，同時免去酚/氯仿對環(huán)境的污染和對人體的毒害作用；該方法為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)、突變檢測、基因診斷和治療等研究和應(yīng)用中DNA的純化提供了一種新手段。 |
| 國際公布 |
