方法名稱： |
北草烏--生物堿含量測定--HPLC法 |
應(yīng)用范圍： |
確定其主要生物堿含量，以供用藥參考 |
方法原理： |
北草烏根粉分別以不同溶劑，采用不同提取方法進(jìn)行提取，提取液經(jīng)液相色譜分離，在235nm處測定峰面積，外標(biāo)法計算含量。 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
儀器設(shè)備 日本島津公司LC-10A 液相色譜儀帶SPD-M10A 二極管陣列紫外檢測器和CLASS-LC10 工作站；ZFQ-5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（天津玻璃儀器廠)；8893E-MT 超聲波清洗器（美國Coli-Parmer) 色譜條件 ODS柱（25mm×4.6mm)，流動相：甲醇-水-乙腈（67：33：2)，內(nèi)含6mmol/lSDS，0.02mol/lNaH2PO4)，流速：1.0ml/min，檢測波長:235 nm |
試樣制備： |
對照品溶液的配制 準(zhǔn)確稱取新烏頭堿3.0mg，次烏頭堿2.7mg，烏頭堿2.4mg，用流動相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀釋至刻度，搖勻，即得. 供試品溶液的配制 分別取8份過6 目標(biāo)準(zhǔn)篩的北草烏根粉各200g盛于2500ml的細(xì)口瓶中，四份用于溶劑浸提，4份用于溶劑超聲輔助浸提。分別加10%氨水300ml，放置2h充分浸潤，然后分別兩兩加入1000ml苯、氯仿、乙醇、乙醚作為浸提溶劑，溶劑浸提時間為12h，每隔1h用力振搖，使分散均勻，當(dāng)進(jìn)行6h后，傾出溶劑，重新補(bǔ)加1000ml溶劑；超聲輔助浸提兩次，每次各1h，并不時用力振搖，當(dāng)進(jìn)行1h后，傾出溶劑，補(bǔ)加另1000 ml 溶劑，繼續(xù)超聲輔助浸提，浸提結(jié)束后，過濾，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將溶液濃縮，回收溶劑，用2%的鹽酸萃取4次，合并萃取液，加濃氨水調(diào)pH值至9，產(chǎn)生白色絮狀沉淀，靜止過濾后，干燥恒重得烏頭生物堿.。取總烏頭堿10.8mg，用流動相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀釋至刻度，搖勻，即得。 |
操作步驟： |
分別精密吸取試品溶液10μl，按上述色譜條件測定，外標(biāo)定量法計算樣品中北草烏生物堿的含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻(xiàn)： |
李慧，王劍鋒.北草烏生物堿的超聲輔助浸提及含量測定.大連民族學(xué)院學(xué)報.2002，4(1):9-11 |
