方法名稱： |
云南紅豆杉枝葉—10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的含量測(cè)定—HPLC-DAD |
應(yīng)用范圍： |
用于云南紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的含量測(cè)定 |
方法原理： |
本品粉末用超聲提取、萃取、過(guò)柱等一系列處理后，經(jīng)液相色譜儀分離，在227nm處測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
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儀器設(shè)備 HP1100型HPLC色譜儀(二極管陣列檢測(cè)器，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器)。 | 色譜條件 色譜柱：C18 (250mm×4.6 mm，5μm )；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水(5∶35∶6)；檢測(cè)波長(zhǎng)：227 nm ；流速：0.8mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μL。 |
試樣制備： |
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對(duì)照品溶液的制備 精密稱取10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ對(duì)照12.42mg于50mL 量瓶中以甲醇溶解并定容，即得對(duì)照品儲(chǔ)備液(0.2345mg/ mL )。精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液 1、2、5、10、20 ml，分別置于25 ml容量瓶中，加甲醇，振搖，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜 (0.45μm) 濾過(guò)，依次吸取 10μl進(jìn)樣。以 10-去乙酰巴卡亭 Ⅲ峰面積平均值為縱坐標(biāo)，10- 去乙酰巴卡亭 Ⅲ 進(jìn)樣量 (μg) 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y = 1351.973X + 1.903，R2= 0.999，表明10-去乙酰巴卡亭 Ⅲ在 0.096～1.947μg范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。 | 供試品溶液的制備 取干燥、粉碎、過(guò)60目篩后的云南紅豆杉藥材枝葉10g，用95%乙醇∶乙酸乙酯 ( 90∶10) 150ml超聲提取30min，抽濾，提取三次，合并濾液，50℃ 減壓回收溶劑至濃膏，加入水∶石油醚 ( 1∶1) 40ml萃取，去石油醚層，再加20ml石油醚萃取水層，多次萃取，直到萃取至石油醚無(wú)色，加入二氯甲烷 10 ml萃取水層，萃取多次，合并下層二氯甲烷萃取液，減壓蒸干，用少量甲醇溶解，拌少量的硅膠揮干后過(guò)硅膠柱，硅膠柱用氯仿濕法裝柱，分別用氯仿、氯仿∶甲醇 ( 97∶3)、氯仿：甲醇 (90∶10) 進(jìn)行梯度洗脫。收集氯仿∶甲醇 (97∶3) 的洗脫液，揮干，用少量甲醇溶解，定容到1ml，微孔濾膜(0.45μm) 濾過(guò)，作為供試樣品。 |
操作步驟： |
精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，依上述色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻(xiàn)： |
安春志，羅佳波，劉莉等.HPLC 法測(cè)定云南紅豆杉枝葉中10-脫乙酰巴卡亭Ⅲ的含量.廣州醫(yī)藥.2006，37（5)：47～49 |
