一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/STRONG> 1、了解薄層色譜基本原理 2、掌握薄層色譜的基本方法 二、實(shí)驗(yàn)原理 薄層色譜，或稱(chēng)薄層層析(thin—1ayer chromatography)，是以涂布于支持板上的支持物作為固定相，以合適的溶劑為流動(dòng)相，對(duì)混合樣品進(jìn)行分離、鑒定和定量的一種層析分離技術(shù)。這是一種快速分離諸如脂肪酸、類(lèi)固醇、氨基酸、核苷酸、生物堿及其他多種物質(zhì)的特別有效的層析方法，從50年代發(fā)展起來(lái)至今，仍被廣泛采用。
(一)基本原理
薄層層析是把支持物均勻涂布于支持板(常用玻璃板，也可用滌綸布等)上形成薄層，然后用相應(yīng)的溶劑進(jìn)行展開(kāi)。薄層層析可根據(jù)作為固定相的支持物不同，分為薄層吸附層析(吸附劑)、薄層分配層析(纖維素)、薄層離子交換層析(離子交換劑)、薄層凝膠層析(分子篩凝膠)等。一般實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較多的是以吸附劑為固定相的薄層吸附層析。
吸附是表面的一個(gè)重要性質(zhì)。任何兩個(gè)相都可以形成表面，吸附就是其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解于其中的溶質(zhì)在此表面上的密集現(xiàn)象。在固體與氣體之間、固體與液體之間、吸附液體與氣體之間的表面上，都可能發(fā)生吸附現(xiàn)象。
物質(zhì)分子之所以能在固體表面停留，這是因?yàn)楣腆w表面的分子(離子或原子)和固體內(nèi)部分子所受的吸引力不相等。在固體內(nèi)部，分子之間相互作用的力是對(duì)稱(chēng)的，其力場(chǎng)互相抵消。而處于固體表面的分子所受的力是不對(duì)稱(chēng)的，向內(nèi)的一面受到固體內(nèi)部分子的作用力大，而表面層所受的作用力小，因而氣體或溶質(zhì)分子在運(yùn)動(dòng)中遇到固體表面時(shí)受到這種剩余力的影響，就會(huì)被吸引而停留下來(lái)。吸附過(guò)程是可逆的，被吸附物在一定條件下可以解吸出來(lái)。在單位時(shí)間內(nèi)被吸附于吸附劑的某一表面積上的分子和同一單位時(shí)間內(nèi)離開(kāi)此表面的分子之間可以建立動(dòng)態(tài)平衡，稱(chēng)為吸附平衡。吸附層析過(guò)程就是不斷地產(chǎn)生平衡與不平衡、吸附與解吸的動(dòng)態(tài)平衡過(guò)程。
薄層層析有許多優(yōu)點(diǎn)：它保持了操作方便、設(shè)備簡(jiǎn)單、顯色容易等特點(diǎn)，同時(shí)展開(kāi)速率快，一般僅需15～20分鐘；混合物易分離，分辨力一般比以往的紙層析高10～100倍，它既適用于只有0．01μg的樣品分離，又能分離大于500mg的樣品作制備用，而且還可以使用如濃硫酸、濃鹽酸之類(lèi)的腐蝕性顯色劑。薄層層析的缺點(diǎn)是對(duì)生物高分子的分離效果不甚理想。
(二) 固定相支持劑的選擇和處理
在薄層層析時(shí)，對(duì)支持劑的選擇主要考慮兩方面：一是支持劑的性質(zhì)與適用范圍；二是支持劑的顆粒大小。一般來(lái)說(shuō)，所選吸附劑應(yīng)具有最大的比表面積和足夠的吸附能力，它對(duì)欲分離的不同物質(zhì)應(yīng)有不同的吸附能力，即有足夠的分辨力；所選吸附劑與溶劑及樣品組分不會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。吸附力的強(qiáng)弱規(guī)律可概括如下：吸附力與兩相間界面張力的zxtf.net.cn/sanji/降低成正比，某物質(zhì)溶液中被吸附的程度與其在溶劑中的溶解度成反比。極性吸附劑易吸附極性物質(zhì)，非極性吸附劑易吸附非極性物質(zhì)。同族化合物的吸附程度有一定的變化方向，例如，同系物極性遞減，而被非極性表面吸附的能力將遞增。 1、支持物的性質(zhì)與適用范圍
薄層層析的支持劑較常用的是硅膠、氧化鋁、硅藻土、纖維素、聚酰胺及DEAE—纖維素。
(1)硅膠 硅膠是應(yīng)用最廣泛的一種極性吸附劑。它的主要優(yōu)點(diǎn)是化學(xué)惰性，具有較大的吸附量，易制備成不同類(lèi)型、孔徑、表面積的多孔性硅膠，一般以SiO2?xH2O通式表示。硅膠的吸附活性取決于含水量，吸附層析一般采用含水量為10％～12％的硅膠，含水量小于1％的活性最高，而大于20％時(shí)，吸附活性最低。用加熱脫水法可使硅膠活化，降低吸附活性的硅膠能顯著改善分離性能，增加樣品的負(fù)載量。
硅膠適用于分離酸性和中性物質(zhì)，堿性物質(zhì)能與硅膠作用，因此如用中性溶劑展開(kāi)，堿性物質(zhì)有時(shí)留在原點(diǎn)不動(dòng)，或者斑點(diǎn)拖尾，而不能很好地分離。為了使某一類(lèi)化合物得到滿(mǎn)意的分離，可改變硅膠酸堿性。例如，可用稀酸或稀堿液(0．1～0．5mol／L)或一定pH值的緩沖溶液代替水制備酸性、堿性或某一pH值的薄層；也可在硅膠中加入氧化鋁(堿性)制成薄層；或在展開(kāi)劑中加入少量的酸或堿進(jìn)行展層。
使用硅膠和硅藻土?xí)r，通常要先加入粘合劑再在支持板上涂布。常用的粘合劑為煅石膏和淀粉，在硅膠、氧化鋁和硅藻土中分別加入5％～20％石膏后，稱(chēng)為硅膠G、氧化鋁G和硅藻土G。用煅石膏為粘合劑的薄層易從玻璃板上脫落，但具有耐腐蝕性試劑的優(yōu)點(diǎn)。加淀粉制成的薄層，機(jī)械性能較好，但不宜用腐蝕性強(qiáng)的試劑。
(2)氧化鋁 氧化鋁為微堿性吸附劑，適用于親脂性物質(zhì)的分離制備，氧化鋁具有較高的吸附容量，價(jià)格低廉，分離效果好，因此應(yīng)用也較廣泛。
在使用氧化鋁作吸附層析時(shí)，要注意選擇適當(dāng)活性及適當(dāng)酸堿度的產(chǎn)品。氧化鋁通�？砂粗苽浞椒ú煌譃閴A性、中性和酸性三種。堿性氧化鋁可應(yīng)用于碳?xì)浠衔锏姆蛛x；中性氧化鋁適用于醛、酮、醌、某些苷類(lèi)及酸堿溶液中不穩(wěn)定的酯、內(nèi)酯等化合物的分離；酸性氧化鋁適用于天然及合成的酸性色素以及醛、酸的分離。
(3)聚酰胺 聚酰胺由己二酸與己二胺聚合而成，也可用己內(nèi)酰胺聚合而成，因它們都含有大量酰胺基團(tuán)，故統(tǒng)稱(chēng)聚酰胺。
聚酰胺薄膜層析是1966年后發(fā)展起來(lái)的一種薄層層析方法，用此方法分析氨基酸衍生物DNP一氨基酸、PTH一氨基酸、DNS一氨基酸及DABTH一氨基酸時(shí)，具有靈敏度高、分辨力強(qiáng)、展層迅速和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。目前由國(guó)產(chǎn)原料制成的聚酰胺薄膜性能良好、效果滿(mǎn)意，已用于酚類(lèi)、醌類(lèi)、硝基化合物、氨基酸及其衍生物、核酸堿基、核苷、核苷酸、雜環(huán)化合物、合成染料；磺胺、抗菌素、環(huán)酮、殺蟲(chóng)劑及維生素B等16類(lèi)化合物的分析。
(4)硅藻土和纖維素 它們是中性支持劑，需在吸附水、緩沖溶液或甲酰胺等之后，才能用于薄層層析。 2、支持劑的顆粒大小 用作薄層層析固定相的支持劑顆粒，要求大小適當(dāng)、均勻。顆粒過(guò)大，展開(kāi)時(shí)溶劑推進(jìn)速率太快，分離效果不好；顆粒太小，展開(kāi)太漫，斑點(diǎn)拖尾不集中，分離效果也差。顆粒大小固定在一定范圍內(nèi)并且薄層厚度均勻一致時(shí)，每次得出的Rf值即可保持恒定。無(wú)機(jī)類(lèi)支持劑的顆粒以150～200目(直徑為0．07～0．1mm)、薄層厚度為0．25～1mm較合適。有機(jī)吸附劑如纖維素等的顆粒為70～140目(直徑0．1～0．2mm)、薄層厚度為1～2mm最恰當(dāng)。 (三)薄層板制作 薄層板制作簡(jiǎn)稱(chēng)制板，是指作為固定相的支持劑被均勻地涂布在玻板上，形成一薄層。所用的玻板要求表面平滑、清潔。玻板的大小按需要選定，常用的規(guī)格為6cm×20cm、20cm×20cm及2．5cm×7．5cm。 1、軟板制作
軟板也稱(chēng)干板，是不加粘合劑，將支持劑干粉直接均勻地鋪在玻板上制成的。這種薄層板制作簡(jiǎn)單，展開(kāi)快，但極易吹散。其具體制作方法如下： (1)選用直徑約為0．5cm的玻璃管一根，根據(jù)薄層的厚度(一般為0．4～1mm)在其兩端繞膠布數(shù)圈。
(2)將支持物干粉倒在玻板上，固定玻板一端以防玻璃推進(jìn)時(shí)移動(dòng)。 (3)將玻璃管壓在玻板上，將支持劑干粉由一端推向另一端即成薄層。 2、硬板制作 &nb執(zhí)業(yè)護(hù)士網(wǎng)sp;硬板或稱(chēng)濕板，是將支持劑加粘合劑和水或其他液體后，均勻地鋪在玻璃板上，再經(jīng)烘干而成的薄層板。制作方法可用專(zhuān)門(mén)的薄層制板器，也可用手工，均能得到滿(mǎn)意的效果。下面介紹三種手工涂布制板的方法： (1)玻棒涂布 將支持劑用水或適當(dāng)溶劑調(diào)成膠漿，倒在玻板上，然后依軟板制作相同方法，用玻棒在玻板上將支持劑由一端向另一端推動(dòng)，即成薄層。 (2)玻片涂布 在玻板兩旁放置兩塊稍厚的玻板，把支持劑膠漿倒在中間的玻板上，然后用另一塊玻片的邊緣將膠漿刮向另一端，即成一定厚度的薄層。干燥后用刀刮去薄板兩側(cè)的支持劑。更換玻板兩旁不同厚度的玻片，即可調(diào)節(jié)薄層的厚度。 (3)傾斜涂布 將支持劑膠漿倒在玻片上，然后將玻板傾斜，使膠漿均勻涂布于玻板上。上述任何一種方法將支持劑均勻涂布于玻板上后，靜置片刻，待薄層表面無(wú)水漬后，置烘箱中，讓溫度升到100℃，持續(xù)1小時(shí)。關(guān)閉電源，待溫度降至接近室溫時(shí)，取出薄層板，放入干燥器備用。此一步驟稱(chēng)為活化。 (四)點(diǎn)樣 點(diǎn)樣是將經(jīng)處理后的樣品點(diǎn)加在薄層的特定部位，這是一項(xiàng)需要十分仔細(xì)的操作步驟，點(diǎn)樣的好壞會(huì)直接影響分離效果。點(diǎn)樣可用玻璃毛細(xì)管，如作定量測(cè)定，應(yīng)使用微量移液管或微量注射器，市售血球計(jì)數(shù)管經(jīng)加工磨尖頭部并標(biāo)定體積后使用也甚理想。點(diǎn)樣的位置，上行展開(kāi)法一般點(diǎn)樣在離薄層下端4～5cm處，下行展開(kāi)法在離上端6～8cm處。如作雙相紙層析分離，點(diǎn)樣處應(yīng)位于距薄層右側(cè)邊5cm與距底邊5cm直線(xiàn)的交點(diǎn)。 薄層層析點(diǎn)樣方法應(yīng)注意以下幾點(diǎn)： (1) 樣品最好用具揮發(fā)性的有機(jī)溶劑(如乙醇、氯仿等)溶解，不應(yīng)用水溶液，因水分子與吸附劑的相互作用力較弱，當(dāng)它占據(jù)了吸附劑表面上的活性位置時(shí)，就使吸附劑的活性降低，而使斑點(diǎn)擴(kuò)散。
(2) 點(diǎn)樣量不宜太多，否則會(huì)降低Rf值，一般為幾到幾十μg，體積為1～20μg。 (3) 原點(diǎn)直徑要控制在2mm以?xún)?nèi)。欲達(dá)此目的，就須分次點(diǎn)樣，邊點(diǎn)樣，邊用冷、熱風(fēng)交替吹干。 (4) 薄層板在空氣中不能放置太久，否則會(huì)因吸潮降低活性。 (五)展開(kāi) 1、展開(kāi)劑的選擇 選擇展開(kāi)劑須視被分離物的極性及支持劑的性質(zhì)而定。對(duì)初選展開(kāi)劑合適與否的評(píng)價(jià)，要根據(jù)其分離有效成分的效果來(lái)確定。如果不合適，還需進(jìn)行極性調(diào)整，直到達(dá)到對(duì)有效成分的完全分離為止。
如果薄層層析所用的支持劑是吸附劑，在同一吸附劑上，不同化合物的吸附性質(zhì)有如下規(guī)律：①飽和碳?xì)浠衔锊灰妆晃�；②不飽和碳�(xì)浠衔镆妆晃剑肿又须p鍵愈多，則吸附得愈緊密；③當(dāng)碳?xì)浠衔锉灰粋�(gè)功能基取代后，吸附性增大。吸附性較大的化合物，一般需用極性較大的溶劑才能推動(dòng)它。 選擇展開(kāi)劑的另一個(gè)依據(jù)是溶劑的極性大小。一般而論，在同一種支持劑上，凡溶劑的極性愈大，則對(duì)同一性質(zhì)的化合物的洗脫能力也愈大，即在薄層上能把此化合物推進(jìn)得愈遠(yuǎn)，Rf值也愈大。如果用一種溶劑去展開(kāi)某一成分，當(dāng)發(fā)現(xiàn)它的Rf值太小時(shí)，可考慮換用一種極性較大的溶劑，或在原來(lái)的溶劑中加入一定量極性較大的溶劑進(jìn)行層層。溶劑極性大小的次序是：
石油醚<二硫化碳<四氯化碳<三氯乙烯<苯<二氯甲烷<氯仿<乙醚<乙酸乙酯<乙酸甲酯<丙酮<正丙醇<甲醇<水。 關(guān)于溶劑混溶性，一般根據(jù)相似相溶原則，需要注意，極性相差大的不混溶，比如正己烷與甲醇。多元展開(kāi)劑，主體的兩種溶劑不能混溶，就需要通過(guò)第三種溶劑來(lái)調(diào)和。比如：石油醚、正庚烷、正已烷、戊烷、環(huán)已烷和甲醇、水之類(lèi)的。 2、展層 展層裝置種類(lèi)較多，根據(jù)展層方式基本上可分上行、下行、連續(xù)及水平式四種。不加粘合劑的薄層只能作近水平式(板與水平成10度～20度角)的上行或下行展開(kāi)。不論何種展層方式，展層容器必須關(guān)閉，并事先要使展開(kāi)劑蒸氣達(dá)到飽和。容器的體積大小要視薄層板的面積而定，因?yàn)榇笕萜饕_(dá)到溶劑蒸氣飽和所需的時(shí)間比小的長(zhǎng)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)證明，在不飽和的展層裝置中，由于混合展開(kāi)劑內(nèi)含有幾種揮發(fā)性試劑，致使薄層板邊緣與中間的試劑比例不同，因此樣品在邊緣和中間展層的距離也不同，這種現(xiàn)象稱(chēng)為邊緣效應(yīng)，嚴(yán)重時(shí)會(huì)影響分離效果。 薄層層析時(shí)為了獲得更好的分離效果，可采用雙向展層和分次展層。分次展層是先用一種溶劑展開(kāi)至一定距離后，將薄層板取出，待溶劑揮發(fā)后再按同一方向用第二種溶劑展開(kāi)。 (六)顯色和定量
薄層板展開(kāi)完成后，從展開(kāi)裝置中取出，于室溫或烘箱中干燥，然后根據(jù)被分離物質(zhì)的種類(lèi)和性質(zhì)，選用相應(yīng)的顯色劑噴霧顯色，或用紫外燈檢測(cè)被分離的物質(zhì)斑點(diǎn)，測(cè)量和計(jì)算各斑點(diǎn)的Rf值。通過(guò)薄層層析被分離的各種溶質(zhì)組分在濾紙上移動(dòng)的速率通常用Rf表示：
Rf＝組分移動(dòng)的距離／溶劑前沿移動(dòng)的距離
＝原點(diǎn)至組分斑點(diǎn)中心的距離／原點(diǎn)至溶劑前沿的距離。 在薄層、溶劑、溫度等各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件恒定的情況下，各物質(zhì)的Rf值是不變的，它不隨溶劑移動(dòng)距離的改變而變化。Rf與分配系數(shù)K的關(guān)系： Rf＝1／(1+αK)，
α是由薄層性質(zhì)決定的一個(gè)常數(shù)。由此可見(jiàn)，K值愈大，溶質(zhì)分配于固定相的趨勢(shì)愈大，而Rf值愈小；反之，K值愈小，則分配于流動(dòng)相的趨勢(shì)愈大，Rf值定性分析的重要指標(biāo)。
在樣品所含溶質(zhì)較多或某些組分在單相薄層層析中的Rf比較接近，不易明顯分離時(shí)，可采用雙相薄層層析法。該法是將濾紙?jiān)谀骋惶厥獾娜軇┫到y(tǒng)中按一個(gè)方向展層以后，即予以干燥，再轉(zhuǎn)向90度，在另一溶劑系統(tǒng)中進(jìn)行展層，待溶劑到達(dá)所要求的距離后，取出薄層，干燥顯色，從而獲得雙相層析譜。應(yīng)用這種方法，如果溶質(zhì)在第一種溶劑中不能完全分開(kāi)，而經(jīng)過(guò)第二種溶劑的層析能得以完全分開(kāi)，大大地提高了分離效果。
由于薄層層析在分析定量時(shí)需注意以下幾點(diǎn)：
(1)在噴霧顯色時(shí)，不加粘合劑的薄層要小心操作，以免吹散吸附劑。
(2)薄層層析還可以用強(qiáng)腐蝕性顯色劑，如硫酸、硝酸、鉻酸或其他混合溶液。這些顯色劑幾乎可以使所有的有機(jī)化合物轉(zhuǎn)變?yōu)樘�，如果支持劑是無(wú)機(jī)吸附劑，薄層板經(jīng)此類(lèi)顯色劑噴霧后，被分離的有機(jī)物斑點(diǎn)即顯示黑色。此類(lèi)顯色劑不適用于定量測(cè)定或制備用的薄層上。
(3)如果樣品斑點(diǎn)本身在紫外光下不顯熒光，可采用熒光薄層檢測(cè)法，即在吸附劑中加入熒光物質(zhì)，或在制備好的薄層上噴霧熒光物質(zhì)，制成熒光薄層。這樣在紫外光下薄層本身顯示熒光，而樣品斑點(diǎn)不顯熒光。吸附劑中加入的熒光物質(zhì)常用的有1．5％硅酸鋅鎘粉，或在薄層上噴霧0．04％熒光素鈉、0．5％硫酸奎寧醇溶液或1％磺基水楊酸的丙酮溶液。
(4)由于薄層邊緣含水量不一致，薄層的厚度、溶劑展開(kāi)距離的增大，均會(huì)影響Rf值，因此在鑒定樣品的某一成分時(shí)，應(yīng)用已知標(biāo)準(zhǔn)樣作對(duì)照。
(5)定量時(shí)，可對(duì)斑點(diǎn)作光密度測(cè)定，也可將一個(gè)斑點(diǎn)顯色，而將與其相同Rf值的另一未顯色斑點(diǎn)從薄層板上連同吸附劑一起刮下，然后用適當(dāng)?shù)娜軇⿲⒈环蛛x的物質(zhì)從吸附劑上洗脫下來(lái)，進(jìn)行定量測(cè)定。
(七)薄層層析法的近代發(fā)展
薄層層析法由于其本身所具有的許多優(yōu)點(diǎn)，幾十年來(lái)，在混合物的分離、定性及定量分析中的應(yīng)用相當(dāng)普遍，并逐漸取代了紙層析分離技術(shù)。為了克服薄層層析法存在的某些不足，獲得更有效的分離效果，在薄層制備、展開(kāi)方式、分析鑒定手段以及相配套的儀器設(shè)備等方面近年來(lái)進(jìn)行了許多革新，其中最根本的是支持劑的改進(jìn)。以一種直徑更小的支持劑顆粒替代常規(guī)的支持劑劑型所制備的薄層，比常規(guī)的薄層具有所需樣品少、展開(kāi)速率快、距離短、分辨力高等優(yōu)點(diǎn)；而且此種新型的薄層具有較好的光學(xué)特性，更有利于對(duì)分離斑點(diǎn)進(jìn)行光密度掃描。為了區(qū)別于常規(guī)的薄層層析分析法，通常將此種新方法稱(chēng)為高效薄層層析法(high performance thin—layer chromatography，HPTLC)，也稱(chēng)現(xiàn)代薄層層析法(modern TLC)。
在進(jìn)行HPTLC時(shí)，為了保證恒定的吸附劑活性和薄層板的相對(duì)濕度，預(yù)制板可用固定相浸漬劑加以處理。經(jīng)處理后的薄層板一般不再受外界濕度的影響。固定相浸漬劑分兩類(lèi)：①親水性固定相，多數(shù)用甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙二醇和不同相對(duì)分子質(zhì)量的聚乙二醇或不同種類(lèi)的鹽溶液浸漬；②親脂性固定相，一般作反向?qū)游鲇�，多�?shù)用液體石蠟、十一烷、十四烷、礦物油、硅酮油或乙基油酸鹽等浸漬。也有利用與浸漬劑形成絡(luò)合物或加成物得以分離的，如經(jīng)三硝基苯或苦味酸浸漬的，可利用絡(luò)合反應(yīng)分離多環(huán)化合物。用NaHSO3浸漬，可與含有羰基化合物生成加成物而得以分離。 三、實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 玻板（12×5cm) 干燥器 培養(yǎng)皿（10～12cm) 燒杯（100ml) 量筒（25ml) 小木架 涂鋪薄層板玻棒 毛細(xì)管 米尺 濾紙 細(xì)線(xiàn) 薄層色譜用堿性氧化鋁 展開(kāi)劑 飽和KCl水溶液 碘片 咖啡堿溶液（2%) 茶堿溶液（2%) 混合生物堿溶液 四、實(shí)驗(yàn)步驟 ⑴制板 用玻棒在玻板上均勻地鋪上一層活性三氧化二鋁。 ⑵點(diǎn)樣 先用細(xì)線(xiàn)在薄層板上距下端1～1.5cm處壓一條線(xiàn)，注意不要把三氧化二鋁壓斷，用毛細(xì)管蘸取少量樣品點(diǎn)于線(xiàn)上，樣點(diǎn)之間及樣點(diǎn)與薄層板邊緣之間距離都不宜太近，且樣點(diǎn)的形狀越規(guī)則越好，大小不宜超過(guò)3mm。 ⑶展開(kāi) 晾干樣點(diǎn)，斜著放入置于干燥器中盛有展開(kāi)劑的培養(yǎng)皿中。展開(kāi)劑要接觸到吸附劑下沿，但切勿接觸到樣點(diǎn)。蓋上干燥器蓋子，展開(kāi)。待展開(kāi)劑上行到一定高度（由試驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)高度)，取出薄層板，再畫(huà)出展開(kāi)劑的前沿線(xiàn)。 ⑷顯色，計(jì)算Rf值 將展開(kāi)的薄層板揮發(fā)干展開(kāi)劑后，放在盛有碘晶體的封閉容器中，升華產(chǎn)生的碘蒸氣能與有機(jī)物分子形成有色的締合物，完成顯色。計(jì)算Rf值。 五、思考題 1、展開(kāi)時(shí)，展開(kāi)劑的高度超過(guò)了點(diǎn)樣原點(diǎn)，這對(duì)薄層色譜產(chǎn)生什么影響？ 2、運(yùn)用薄層色譜定性鑒定時(shí)，只用一種展開(kāi)劑展開(kāi)，然后根據(jù)Rf值作判定是否可靠？ 3、為什么在薄層色譜時(shí)，不能讓展開(kāi)劑從薄板上蒸發(fā)掉？ | 
