細(xì)胞因子及其受體的免疫學(xué)檢測法

　　免疫學(xué)檢測法的基本原理是細(xì)胞因子（或受體)與相應(yīng)的特異性抗體（單克隆抗體或多克隆抗體)結(jié)合，通過同位素、熒光或酶等標(biāo)記技術(shù)加以放大和顯示，從而定性或定量顯示細(xì)胞因子（或受體)的水平。這類方法的優(yōu)點(diǎn)是實(shí)驗(yàn)周期短，少受抑制物或相似生物池功能因子的干擾，如抗體的特異性高可區(qū)分不同型或亞型的細(xì)胞因子（如IFN)，一次能檢測大量標(biāo)本，易標(biāo)準(zhǔn)化。與生物學(xué)活性檢測方法相比，免疫學(xué)檢測法在許多情況下敏感性低于前者，所得結(jié)果不表示生物學(xué)活性，有的McAb只能識(shí)別重組的細(xì)胞因子，在檢測天然的細(xì)胞因子中受到限制。

　　免疫學(xué)檢測的方法多采用ELISA和RIA法，可以分為平心法、競爭法和間接法。

　�。ㄒ�)ELISA（或RIA)平心法

　　根據(jù)抗體性質(zhì)和特異性不同可有以下幾種不同的平心法ILISA。

　　1.PcAb與McAb夾心法　用純化的多克隆抗體（PcAb)包被板子，加待檢細(xì)胞因子（或可溶性受體)和標(biāo)準(zhǔn)品，上層加酶標(biāo)記的McAb。有時(shí)為了增加敏感性，上層加McAb后再用酶標(biāo)記第二抗體顯色。

　　2.McAb與PcAb夾心法　用McAb包被板子，加待檢樣品，上層加酶標(biāo)記的PcAb。有時(shí)為了增加敏感性，上層加PcAb后再用釗對PcAb的酶標(biāo)記抗抗體。

　　3.雙McAb夾心法 選擇和應(yīng)用識(shí)別同一個(gè)細(xì)胞因子（或受體)分子上不同表位的兩種McAb，其中一種包被板子，另一種McAb標(biāo)記酶。由于單克隆抗體親和力識(shí)別表位地勻一，從質(zhì)量控制角度來看，一般比上兩種夾心法易控制。如目前已商品化檢測細(xì)胞因子（或其受體)的檢測盒大多采用雙單克隆抗體夾心法。

　　4.細(xì)胞、McAb夾心法 用表達(dá)IL-2R的MT-1細(xì)胞包被板子，加入待檢IL-2或標(biāo)準(zhǔn)品，上層加¹²⁵I標(biāo)記的McAb，根據(jù)γ計(jì)數(shù)cpm值推算出待檢IL-2含量。

　�。ǘ�)競爭法

　　有報(bào)道用況爭法檢測IL-2水平。用免抗IL-2PcAb包袱板子，同時(shí)加入¹²⁵I標(biāo)記的IL-2和待測IL-2，根據(jù)γ計(jì)數(shù)cpm值得知待檢IL-2對¹²⁵I-IL-2與PcAb競爭結(jié)合的程度，從而推算出待測標(biāo)本IL-2的含量。這種方法檢測IL-2的敏感性可達(dá)50pg/ml。

　　為了增加敏感性，在上述系統(tǒng)中可再連接上生物素，再用鏈霉親和素（streptavidin)酶標(biāo)記物進(jìn)行放大。此外，還可用化學(xué)發(fā)光、改進(jìn)顯色底物等措施提高檢測方法的敏感性。

表4-23 細(xì)胞因子生物學(xué)活性與免疫學(xué)檢測方法的比較