幽門螺桿菌感染三種檢驗(yàn)方法的比較

　　幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp)是近年認(rèn)識的一類與胃炎、消化性潰瘍等疾病有關(guān)的微生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見生物。眾所周知，胃炎和潰瘍屬于多發(fā)常見病，而Hp的生長需要特殊的微需氧環(huán)境，這在一些基層實(shí)驗(yàn)室較難做到。為尋求簡單、廉價(jià)而又易行的實(shí)驗(yàn)方法，我們試圖用燭缸法對胃活檢標(biāo)本中Hp的分離、鑒定并與尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢對比，報(bào)告如下。

　　1　對象和方法

　　1.1　對象　

　　1990—04～1990—10內(nèi)蒙古蒙醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院做內(nèi)鏡的所有患者，經(jīng)內(nèi)鏡檢查時(shí)均在胃竇部和球部和球部鉗取粘膜組織兩塊，放無菌小瓶內(nèi)，于30min內(nèi)送檢。

　　1.2　方法　

　　①培養(yǎng)與涂片：標(biāo)本采集后，立即接種于含有多粘膜素B、萬古霉素、兩性霉素B、玉米淀粉和藥用炭末的甲氧芐嘧啶（TMP)巧克力培養(yǎng)基中。標(biāo)本接種后將組織塊在干凈玻片上反復(fù)涂抹作細(xì)菌涂片革蘭染鏡檢。②取另一塊組織放入40孔的酶標(biāo)板孔中，每孔含尿素酶試劑100μl（0.1ml)，用透明膠布封閉，置37℃溫箱，分別于1/6h，1/3h，1/2h，1/4h，12h記錄顏色出現(xiàn)變化。變?yōu)榉奂t色者為陽性，無為化者為陰性。③生化及耐受試驗(yàn)按幽門螺桿菌（Hp)生化鑒定常規(guī)進(jìn)行。④藥敏試驗(yàn)對其中30株培養(yǎng)的細(xì)菌按常規(guī)紙片法做藥敏試驗(yàn)。

　　2　結(jié)果

　　本組資料計(jì)254例標(biāo)本，其中直接涂片165例Hp陽性，陽性率為65.0％。在涂片上為優(yōu)勢菌，革蘭陰性，菌體有1～2個(gè)彎曲，呈X形或螺旋形，易于識別。直接尿素酶試驗(yàn)陽性者170份，陽性率66.9％，從時(shí)間上看10min陽性者占40.6％，30min占84.1％，4h為97.7％，12h即100％出現(xiàn)陽性。涂片鏡檢中Hp的數(shù)量愈多尿素酶試驗(yàn)出現(xiàn)陽性所要時(shí)間則愈短。254例全部進(jìn)行燭法Hp培養(yǎng)，結(jié)果有132例分離出Hp，陽性率為52.0％。該菌在TMP巧克力培養(yǎng)基中生長緩慢，3d～4d時(shí)菌落里呈圓點(diǎn)狀，直徑0.2mm～1mm，光滑，透明，無色有光澤、邊緣整齊。生化和耐受試驗(yàn)見表2。本研究所分離出的Hp對痢特靈、四環(huán)素、青霉素、氨芐青霉素敏感，對TMP＋SMZ，多粘菌素B和奈定酸抗藥。

　　三種檢驗(yàn)方示比較　三種方法檢出Hp陽性者173例，陽性率為68.1％。尿素酶試驗(yàn)與鏡檢結(jié)果無顯著性差異（P＞0.05)，二者符合率為95.3％。尿素酶試驗(yàn)與培養(yǎng)檢出率差異有顯著性（P＜0.01)，二者符合率為77.6％，（表3，4)。

表1　直接尿素酶試驗(yàn)結(jié)果

表2　Hp的生化特性

表3　尿素酶試驗(yàn)與鏡檢和培養(yǎng)結(jié)果比較

　　P＞0.05，尿素酶試驗(yàn)與鏡檢X²＝0.22；P＜0.01，尿素酶試驗(yàn)培養(yǎng)，X²＝11.79。

表4　三種試驗(yàn)方法比較

　　3　討論

　　對254例病人的胃粘膜活標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，直接尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢，共檢出Hp陽性者173例，檢出率68.1％，與國內(nèi)一些報(bào)道相符。按12h內(nèi)結(jié)果計(jì)算，尿素酶試驗(yàn)對診斷Hp感染的靈敏度為98.3％，特異試為100％，與涂片鏡檢比較二者符合率為95.3％。說明尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢對診斷Hp感染準(zhǔn)確可靠，快速敏感，簡便易行。Hp是微需氧菌，一般分離鑒定需要微需氧環(huán)境，由于我們無此設(shè)備，燭缸法培養(yǎng)Hp在文獻(xiàn)上目前尚未見報(bào)道，我們受文獻(xiàn)的啟發(fā)，使用燭缸法，并使其保持一定的濕度和恒定的溫度。結(jié)果分離鑒定進(jìn)行比較順利，但陽性率較尿素酶試驗(yàn)和涂片鏡檢低，故此，該方法有待繼續(xù)改進(jìn)。本研究結(jié)果說明，燭缸法是可以用于鑒定Hp的，尤其在無微需氧設(shè)備的基層單位可應(yīng)用此法。藥敏結(jié)果顯示，該菌對痢特靈、四環(huán)素、青霉素、紅霉素、慶大霉素、氨芐青霉素敏感，所以，對伴有Hp陽性的胃炎、胃十二指腸潰瘍病人應(yīng)首選這藥物。

　　本文所做工作承蒙中國預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物學(xué)流行病學(xué)研究所微生物研究室陳晶晶教授指導(dǎo)，分離出的Hp菌株曾送該室鑒定，復(fù)核證實(shí)，特此致謝。

韓淑英¹　李清福²　佟偉軍³　王興⁴　張麗娟³　張文全⁵

¹白球恩醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院（長春 130000)

²內(nèi)蒙古通遼市市政工程處衛(wèi)生所

³內(nèi)蒙古哲盟衛(wèi)生防疫站

⁴內(nèi)蒙古通遼市衛(wèi)生防疫所

⁵內(nèi)蒙古蒙醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院