免疫放射分析（IRMA)是從放射免疫分析（RIA)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核素標(biāo)記免疫測定，其特點(diǎn)為用核素標(biāo)記的抗體直接與受檢抗原反應(yīng)并用固相免疫吸附劑作為B或F的分離手段。IRMA于1968年由Miles和Heles改進(jìn)為雙位免疫結(jié)合，在免疫檢驗(yàn)中取得了廣泛應(yīng)用。
一、基本原理
IRMA屬固相免疫標(biāo)記測定，其原理與ELISA極為相似，不同點(diǎn)主要為標(biāo)記物為核素及最后檢測的為放射性量。單位點(diǎn)IRMA的反應(yīng)模式如圖16-4。
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圖16-4 單位點(diǎn)IRMA原理示意圖
抗原與過量的標(biāo)記抗體在液相反應(yīng)后加入免疫吸附劑，即結(jié)合在纖維素粉或其他顆粒載體上的抗原。游離的標(biāo)記抗體與免疫吸附劑結(jié)合被離心除去，然后測定上清液的放射性量。
雙位點(diǎn)IRMA的反應(yīng)模式（圖16-5)與雙抗體夾心ELISA的模式相同，可參見圖15-4。
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圖16-5 雙位點(diǎn)IRMA原理示意圖
受檢抗原與固相抗體結(jié)合后，洗滌，加核素標(biāo)記的抗體，反應(yīng)后洗滌除去游離的標(biāo)記抗體，測量固相上的放射性量。
不論是單位點(diǎn)還是雙位點(diǎn)IRMA，最后測得的放射性與受檢抗原的量呈正比。
二、IRMA與RIA的異同點(diǎn)
1．標(biāo)記物在RIA中核素標(biāo)記抗原，在IRMA中核素標(biāo)記抗體�？乖胁煌N類，根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，標(biāo)記時(shí)需用不同的核素和不同的方法�？贵w為蛋白質(zhì)，有利于碘化標(biāo)記，不同抗體標(biāo)記方法基本相同。標(biāo)記抗體的比活度高，提高了分析的靈敏度。
2．反應(yīng)速率反應(yīng)速度與反應(yīng)物的濃度呈正比，在IRMA中標(biāo)記抗體是過量的，而且不存在競爭性結(jié)合復(fù)雜的反應(yīng)，所以反應(yīng)速度較RIA快。在RIA中抗體量是微量的，所以一定要用高親和力的多克隆抗體，而在IRMA中應(yīng)用親和力較低的單克隆體也能得到滿意的結(jié)果。
3．反應(yīng)模式RIA為競爭抑制，測得放射性的量與受檢抗原呈反比。IRMA為非競爭結(jié)合，劑量反應(yīng)曲線為正相關(guān)的直線關(guān)系。
4．特異性在比位點(diǎn)IRMA中，一般均應(yīng)用針對不同位點(diǎn)的單克隆抗體，其交叉反應(yīng)率低于應(yīng)用多克隆抗體的RIA。
5．標(biāo)準(zhǔn)曲線的工作濃度通常RIA的工作范圍為2～3個(gè)數(shù)量級，而RIMA可達(dá)3個(gè)數(shù)量級以上。
6．分析誤差RIA中加入的抗體和標(biāo)記抗原都是定量的，加樣誤差可嚴(yán)重影響測zxtf.net.cn/wszg/定結(jié)果。IRMA中標(biāo)記和固相抗體在反應(yīng)中都是過量的，只有受檢標(biāo)本的加樣誤差才會(huì)影響分析結(jié)果。因此zxtf.net.cn，IRMA的批內(nèi)和批間變異均比較小。
7．其他RIA可以測定大分子量與小分子量的物質(zhì)，雙位點(diǎn)IRMA只能測定在分子上具有2個(gè)以上抗原表位的物質(zhì)。
在RIA中應(yīng)用的多為克隆抗體，親和力和特異性要求較高，但用量很少。IRMA中標(biāo)記抗體和固相抗體用量較多，一般均用來源豐富、特異性較高的單克隆抗體。
