血漿中的脂類包括膽固醇、膽固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。
目前,對有關(guān)脂類代謝疾患的診斷和治療過程,均必須檢測血漿(清)中的脂類,通過其含量的變化,對臨床疾患提供協(xié)助診斷的依據(jù)。有關(guān)醫(yī)學(xué)科研工作,脂類的定量檢測也是一項(xiàng)必備的研究項(xiàng)目。
1.膽固醇測定
血漿中膽固醇及其酯的含量檢測,從方法學(xué)上可分為兩大類:一類是化學(xué)法包括抽提法和直接測定法,這類方法目前仍在沿用;另一類是酶法測定,方法敏感特異快速,并能自動(dòng)化分析,已常規(guī)應(yīng)用;瘜W(xué)測定法種類多,由于顯色反應(yīng)的特異性不同,其結(jié)果有一定的差異。目前公認(rèn)的參考方法是Abell-Kendall(L-B反應(yīng))法www.med126.com。另外,三氯化鐵-硫酸反應(yīng)法(Zak法)具有顯色穩(wěn)定法、操作簡便、靈敏度約5倍于L-B反應(yīng)法,膽固醇酯與游離膽固醇顯色程度比較接近等優(yōu)點(diǎn),缺點(diǎn)是特異性差,干擾因素比L-B法多,如冰醋酸中含有的乙醛酸,血清樣品中的血紅蛋白,膽紅素以及硫酸的質(zhì)量等因素均可影響Zak方法的準(zhǔn)確性,Zak法更適合于科研使用。酶法測定血清膽固醇的方法已被廣泛采用,國產(chǎn)試劑已能滿足臨床的需要。膽固醇測定用的標(biāo)準(zhǔn)品,按美國國家標(biāo)準(zhǔn)局(NBS)出品純度達(dá)99.8%,是國際公認(rèn)的參考物,國內(nèi)李健齋等已純化制成符合這一要求的膽固醇純品,已供臨床檢測血清膽固醇使用。
2.甘油三酯測定
血漿甘油三酯的測定,目前多以化學(xué)法和酶法定量;瘜W(xué)法測定甘油三酯是以脂蛋白變性,水解成甘油,并以甘油為計(jì)算依據(jù)。酶法是以特異酶水解甘油三酯,除去脂肪酸,再測定甘油,方法特異,準(zhǔn)確而快速,臨床廣為應(yīng)用。目前甘油三酯測定的方法主要以定量甘油為依據(jù),然而血清樣品中存在有游離甘油,如何從反應(yīng)過程中的總甘油中減去游離甘油,多年來一直在研究討論這一問題。若不減去,其測定值將會(huì)高于血清樣品中的真值,如果要減去,就必須先測出血清樣品中的游離甘油,甘油三酯的測定方法將增加一個(gè)繁雜的步驟,實(shí)際工作中難以做到。有報(bào)道血清樣品中的游離甘油實(shí)際量是0.07~0.13mmol/L,相當(dāng)于甘油三酯的0.5~6.0mmol/L,為此建議,實(shí)測的甘油三酯量減去一個(gè)校正系數(shù)即:
甘油三酯(mmol/L)=[0.98×總甘油(mmol/L)]-0.07(mmol/L)。
這一校正系數(shù)也僅適用于健康人,對臨床病人并不一定適用。據(jù)報(bào)道,血清樣品的游離甘油一直是個(gè)未知數(shù),無法測準(zhǔn)。為此,目前臨床測定血清甘油三酯時(shí),基本上未考慮游離甘油,因?yàn)槠浜亢苌伲瑫呵液雎圆挥。甘油三酯測定的參考物,推薦三油酸甘油酯和三軟脂酸甘油酯混合物(2:1,W/W),此參考物適用于化學(xué)法。在酶法測定中,仍以高純度的三油酸甘油酯為參考物。
3.磷脂測定
血清磷脂包括卵磷脂、溶血卵磷脂、神經(jīng)磷脂、腦磷脂和其他少量磷脂。如需要分別檢測各種磷脂,可以通過薄層層析法、柱層析法和高壓液相色譜法。目前,臨床僅測定血清磷脂總量。血清磷脂總量的測定方法有化學(xué)方法和酶法兩大類;瘜W(xué)法是以磷脂中的磷為定量依據(jù),因?yàn)槊苛字肿又卸己幸粋(gè)磷酸根,故將磷脂的磷稱為脂性磷。由于血清中磷脂大部分為卵磷脂,其分子量中磷約占4%,故將脂www.med126.com性磷換算成磷脂的系數(shù),一般為25。由于化學(xué)法均需要抽提,再測抽提液中的磷脂的磷,血清中的磷酸鹽不可能混入抽提液中,因此血清中的磷酸鹽對磷脂測定的干擾很少。酶法是利用磷脂酶進(jìn)行定量測定。生物體中磷脂酶包括磷脂酶A1、A2、C和D四種。磷脂酶D特異性差,均可水解卵磷脂、溶血卵磷脂和神經(jīng)磷脂,三者約占血清總磷脂的95%,臨床多用含磷脂酶d 的試劑進(jìn)行磷脂的定量測定。
4.游離脂肪酸測定
游離脂肪酸屬于未酯化的一類脂肪酸,故又稱為非酯化脂肪酸,其量很少,采用方法必須是靈敏的方法,還需要避免脂肪水解產(chǎn)生脂肪酸的干擾。測定方法有:①滴定法需要微量滴定裝置,因?yàn)橐ㄟ^肉眼觀察顏色,難免會(huì)有主觀因素的影響,所以難以測定準(zhǔn)確,很難用于常規(guī);②光度法,以銅皂法常用;③酶法,主要采用特異性不強(qiáng)的脂肪酶D進(jìn)行檢測,方法特異,快速準(zhǔn)確,已常規(guī)應(yīng)用于臨床。