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1?直接染色法剖檢病犬取大小腦、延腦等,最好取海馬回,各切取lcm3小塊,置滅菌容器,在冷藏條件下運(yùn)送至實(shí)驗(yàn)室。若檢查內(nèi)基氏小體,可切取海馬回,置吸水紙上,切面向上,載玻片輕壓切面,制成壓印標(biāo)本,室溫自然干燥后染色鏡檢,檢查有無(wú)特異包涵體。內(nèi)基氏小體位于神經(jīng)細(xì)胞胞漿內(nèi),直徑3?20fxm不等,呈橢圓形,呈嗜酸性著染(鮮紅色),檢出內(nèi)基氏體,即可診斷為狂犬病。犬腦的陽(yáng)性檢出率為70%左右,在檢查犬腦時(shí)還應(yīng)注意與犬瘟熱病毒引起的包涵體相區(qū)別。熒光抗體法也是一種特異而快速的直接染色檢查診斷法。將本病高免血清用熒光色素標(biāo)記,制成熒光抗體。取可疑病例腦組織或唾液腺制成壓印片或冰凍切片,用熒光抗體染色,在熒光顯微鏡下觀察,胞漿內(nèi)出現(xiàn)亮綠色熒光顆粒者為陽(yáng)性。該方法用于動(dòng)物腦組織陽(yáng)性檢出率很高,可達(dá)95%,是狂犬病的一種較好的診斷方法。2.病毒分離取患病動(dòng)物的腦或唾液腺等材料并用緩沖鹽水或含10%滅活豚鼠血清的生理鹽水研磨成乳劑,腦內(nèi)接種5?7日齡乳鼠,每只注射0.03mL。接種后繼續(xù)由母鼠同窩哺養(yǎng),3?4天后如發(fā)現(xiàn)母鼠哺乳力減弱、痙攣、麻痹死亡,即可取其腦組織檢查包涵體,并制成抗原,做病毒鑒定。如經(jīng)7天仍不發(fā)病,可殺死其中2只,剖取鼠腦做成懸液,如上傳代。如第二代仍不發(fā)病,可再傳代。連續(xù)盲傳三代,觀察4周而仍不發(fā)病者可判作陰性。也可應(yīng)用3周齡以內(nèi)的幼鼠,如上做腦內(nèi)接種,每只0.03mL。如有條件,可同時(shí)接種倉(cāng)鼠腎原代細(xì)胞或倉(cāng)鼠腎繼代細(xì)胞和BHK-21細(xì)胞等。新分離的病毒可用電子顯微鏡直接觀察,或者應(yīng)用抗狂犬病特異免疫血清進(jìn)行中和試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)加以鑒定。3.血清學(xué)檢驗(yàn)常用的血清學(xué)方法主要有中和試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、間接熒光抗體試驗(yàn)、交叉保護(hù)試驗(yàn)、血凝抑制試驗(yàn)以及間接免疫酶試驗(yàn)等。一般實(shí)驗(yàn)室常用的血清學(xué)診斷法為中和試驗(yàn)。近年來(lái)已將單克隆抗體技術(shù)用于狂犬病的診斷,特別適用于區(qū)別狂犬病病毒與該病毒屬的其他相關(guān)病毒。此外,還有斑點(diǎn)免疫測(cè)定、核酸雜交技術(shù)、PCR技術(shù)、對(duì)流免疫電泳、Western印跡等新型診斷方法。
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