豬圓環(huán)病毒病的診斷與控制措施
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本文綜述了豬圓環(huán)病毒的特性、致病性，豬圓環(huán)病毒病的
流行病學(xué)、臨床癥狀、病理變化、診斷等的研究進(jìn)展，結(jié)合中國實(shí)際提出了本病的防制對(duì)策�！ CV病毒在獸醫(yī)臨床可致豬發(fā)生：豬斷奶后多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)、豬間質(zhì)性
肺炎(IP)、豬皮炎和
腎病綜合征(PDNS)以及由圓環(huán)病毒引起的母豬繁殖障礙�！ �1 病原學(xué)研究進(jìn)展 1.1 病原分類 PCV在分類學(xué)上屬于新的DNA圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬，即小環(huán)狀病毒屬，這是由國際病毒分類委員會(huì)在第六次學(xué)術(shù)報(bào)告會(huì)上命名的。PCV與雞傳染性貧血病毒(CAV)、
鸚鵡喙羽病毒(PBFDV)及幾種植物病毒共同劃歸環(huán)病毒科(Circoviridae)�！ �1.2 病原結(jié)構(gòu) PCV為無囊膜的正20面體，直徑17～22nm，含有1.76～2.3kb的單鏈環(huán)狀DNA，CsCl浮密度1.33-1.34，相對(duì)分子質(zhì)量5.8×102，沉降系數(shù)為52S。在長度為1758bp的核苷酸序列中，具有4個(gè)開放閱讀框架(ORF)，即Replicase V1(35700)和V2(9800)，Capsid C1(27500)和C2(23200)。衣殼蛋白為1條多肽鏈，其分子量為3600Da。Brina等主張根據(jù)PCV致病性、抗原性及核苷酸序列將PCV分為PCV-1和PCV-2兩個(gè)型。病毒基因組是1條共價(jià)閉合的單股負(fù)鏈環(huán)狀DNA，PCV基因序列已經(jīng)明確。PCV-1型無致病性，包括PCV-PK15及其它無致病性的分離株;PCV-2有致病性，目前歸入PCV-2的有分離自美洲、歐洲等地的PMWS病料中分離的一些毒株。ORF1編碼與病毒復(fù)制相關(guān)的Rep蛋白;ORF2編碼的蛋白為病毒的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有較好的免疫原性，是研制基因工程苗的首選基因�！ �1.3 病原特性 北愛爾蘭學(xué)者Allan等(1994)報(bào)道PCV對(duì)酸性環(huán)境(PH3)、氯仿或者高溫(56℃和70℃)有抵抗作用。PCV在原代胎
豬腎細(xì)胞、恒河猴腎細(xì)胞、BHK-21細(xì)胞上不生長，Tischer等認(rèn)為PCV能在一些來源于豬的細(xì)胞中復(fù)制，并且依賴細(xì)胞周期S期表達(dá)的細(xì)胞蛋白。Tischer等發(fā)現(xiàn)在PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物中加入d-氨基
葡萄糖，可促進(jìn)感染細(xì)胞內(nèi)形成包涵體，提高病毒復(fù)制，使含有PCV抗原的細(xì)胞數(shù)提高30%。Allan等(1994)證明了PCV在源于
豬骨髓、外周血液、肺洗出物和淋巴結(jié)的單核細(xì)胞/巨嗜細(xì)胞中的復(fù)制。用感染PCV的PK-15細(xì)胞接種豬，可以回收到病毒，根據(jù)病毒抗原的出現(xiàn)及抗體的產(chǎn)生，表明豬感染了PCV，但不出現(xiàn)臨床癥狀和病變，說明來源于PK-15細(xì)胞的PCV是非致病性的，即PCV-1。1997年，在加拿大、西班牙及法國相繼報(bào)道了PMWS，且患病豬病變部位免疫組織化學(xué)染色的PCV抗原，通過原位雜交檢出了PCV核酸。1998年，加拿大、美國、法國、西班牙、丹麥、北愛爾蘭等國也相繼從PMWS患豬分離出新的PCV，即PCV-2。利用這些患豬的組織乳劑或細(xì)胞培養(yǎng)分離繼代的病毒接種于仔豬，接種豬出現(xiàn)PMWS的特征病變�！ �1.4 病原致病性 PCV在臨床上主要引起豬的傳染性先天性
震顫和斷乳后全身消耗性衰竭綜合癥(PMWS)。PCV-2是PMWS的主要病因，但不是唯一的病原。用PCV感染材料經(jīng)鼻接種3d無菌豬，5周后除檢出PCV-2外，還檢出豬小RNA病毒，提示PMWS的病因與PCV-2和豬小RNA病毒有關(guān)。用PCV-2和豬小RNA病毒的混合物經(jīng)鼻接種于1～2d的未吸吮
初乳的仔豬，仔豬表現(xiàn)食欲不振、不愿運(yùn)動(dòng)、體重減輕和
嗜睡等癥狀，部分發(fā)生死亡。21～26d后剖檢，病變與臨床上的PMWS病例相似，并從各器官檢出PCV-2和豬小RNA病毒。 2 流行病學(xué)與臨床癥狀 2.1 流行病學(xué) PCV主要易感動(dòng)物是豬，但Tischer等報(bào)道，在人、牛和鼠血清中也存在能與PCV發(fā)生群特異性結(jié)合的低水平抗體。PCV經(jīng)口、呼吸道感染不同日齡的豬，少數(shù)懷孕母豬感染PCV后，經(jīng)胎盤垂直感染給仔豬。感染的豬可通過鼻液、糞便等廢物排出病毒。PCV分布廣泛。在德國，屠宰豬和2～3歲繁殖
豬血清抗體陽性率達(dá)85%。在加拿大，豬血清陽性率在26%～55%。在英國隨機(jī)采集的豬血清中，陽性率為86%。在愛爾蘭，豬血清抗體陽性率達(dá)92%。Allan等(1994)對(duì)荷蘭兩群仔豬血清學(xué)研究表明，仔豬抗PCV母源抗體在出生后8～9周消失，在13～15周時(shí)血清抗體又重新出現(xiàn)，說明仔豬在11～13周受到PCV感染。PMWS可見于5～16周齡的豬，但最常見于6～8周齡。豬群患病率為3%～50%，死亡率在8%～35%。本病發(fā)展緩慢，豬群一次發(fā)病可持續(xù)12～18個(gè)月。我國學(xué)者王永康在上海郊區(qū)觀察發(fā)現(xiàn)，豬皮炎和腎病綜合征的發(fā)病率可達(dá)11%，死亡率達(dá)到40%。此外，本病常與集約化生產(chǎn)方式有關(guān)，飼養(yǎng)管理不善、環(huán)境惡劣、飼養(yǎng)密度過大、應(yīng)激、不同年齡和不同來源的豬編群等，均可誘發(fā)本病。R .Larochelle等(2002)報(bào)道PCV2病毒可間隙性地自公豬精液中排出，感染公豬的精液可看作為一種潛在的PCV2病毒來源。Kiupel M等(2000)報(bào)道，被PCV2感染的小鼠能否排毒尚不清楚，但小鼠的先天性及出生后的感染現(xiàn)象說明，可能由于野生小鼠作為PCV2的宿主或傳媒的潛在危險(xiǎn)及鼠群中感染的流行。 2.2 臨床癥狀 2.2.1 斷乳后全身多系統(tǒng)衰竭綜合征 PMWS主要影響6-8周齡的豬，很少影響吮乳的豬。臨床上表現(xiàn)為多系統(tǒng)進(jìn)行性功能衰弱為特征的癥狀，生長發(fā)育不良，漸進(jìn)性消瘦，體重減輕，皮膚與可視粘膜蒼白或
黃疸，貧血，肌肉萎縮、衰弱無力，呼吸困難、呼吸過速，一些不常見的癥狀有下痢、
咳嗽和中樞神經(jīng)系統(tǒng)紊亂。Harding(1997)報(bào)道，在一些豬群中，斷奶豬的發(fā)病率和死亡率之比為50%。一般而言，患病豬臨床表現(xiàn)為
發(fā)熱、精神不振、被毛粗亂、皮膚蒼白、進(jìn)行性消瘦、發(fā)育障礙，而且表現(xiàn)以咳嗽、噴嚏、呼吸加快及呼吸困難為特征的呼吸器官障礙。體表淋巴結(jié)，特別是腹股溝淋巴結(jié)腫大，部分病例可見皮膚、可視粘膜黃疸，下痢，嗜睡。再一個(gè)特征就是豬群的死亡率增加。約20%的豬咳嗽、噴嚏、呼吸困難，死亡率約為8%～35%，10～20%豬皮膚和可視粘膜可見黃疸。由于細(xì)菌、病毒的二重感染，常常使PMWS的癥狀復(fù)雜化、嚴(yán)重化。 2.2.2 傳染性先天性震顫 先天性震顫的臨床變化很大，其震顫為從輕度到重度。在出生后第一周，嚴(yán)重的震顫可因不能吃奶而死亡，活一周的仔豬可以存活下來，但多數(shù)在3周時(shí)間恢復(fù)。震顫為雙側(cè)，影響骨骼肌肉，當(dāng)臥下或睡覺時(shí)震顫消失，外界刺激可引發(fā)或加重震顫，如聲音或溫度刺激;有的在整個(gè)生長和發(fā)育期間都不斷發(fā)生震顫。主要是母豬在懷孕階段感染了病毒。Allan等(1995)認(rèn)為，PCV病毒通過胎盤感染胎兒的可能性很小，或者感染發(fā)生在胎兒免疫功能形成以前。Gustafson和Kanit(1974)曾報(bào)道母豬在不同的懷孕階段感染類似PCV病毒時(shí)，可引起震顫發(fā)生�！ �3 病理變化 3.1 斷乳后全身多系統(tǒng)衰竭綜合征 Clark(1997)和Daft等(1996)描述了PMWS的大體和組織病變�；糚MWS豬的尸體營養(yǎng)狀況差，表現(xiàn)出不同程度的肌肉消耗，皮膚中度蒼白，20%的病例呈黃疸。剖檢變化主要表現(xiàn)多種組織器官的廣泛性病理損傷，最顯著的變化是全身淋巴結(jié)，特別是腹股溝淺淋巴結(jié)、腸系膜淋巴結(jié)、氣管支氣管淋巴結(jié)及下頜淋巴結(jié)腫大2～5倍，有時(shí)可達(dá)10倍。切面硬度增大，可見均勻的白色。集合淋巴小結(jié)也腫大。發(fā)生細(xì)菌二重感染的，則淋巴結(jié)可見炎癥和化膿病變，使病變復(fù)雜化。 所有病例幾乎都可以見到肺萎縮不全，重量和硬度增加，部分病例尖葉有固質(zhì)化致密的病灶，肺彌散性病變，肺表面呈花斑狀，灰棕色肺葉與正常的黃到粉紅肺葉相間。在嚴(yán)重病例，可以觀察到黑紅或棕色的肺泡出血斑�！ “霐�(shù)病例的肝臟肉眼觀察呈不同程度的花斑狀，為輕度到中度的肝萎縮。肝小葉間結(jié)締組織明顯，嚴(yán)重病例的肝小葉，結(jié)締組織非常明顯。脾臟增大，切面呈肉狀，無充血。半數(shù)病例的腎臟被膜下呈現(xiàn)可見的白色灶，所有可見病變的腎臟都腫大、白色，有的因
水腫可達(dá)正常的5倍�！ ∽匀桓腥静±校s有半數(shù)豬在胃無腺部形成潰瘍。少數(shù)病例還見到皮膚出血和壞死、腎衰竭、漿液纖維素性多發(fā)性漿液。部分病例回腸可出現(xiàn)花斑狀區(qū)域，結(jié)腸粘膜可能充血或出現(xiàn)瘀血斑�！ ★@微病變可見淋巴細(xì)胞-組織細(xì)胞浸潤，在巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞內(nèi)形成包涵體。在小腸固有層、腹股溝淋巴結(jié)內(nèi)形成合胞體�！ �3.2 先天性震顫 唯一有關(guān)先天性震顫的病理學(xué)變化為
脊髓髓磷脂沉著遲緩。Lamar(1971)報(bào)道了感染1～13日齡脊髓神經(jīng)缺乏髓磷脂化。先天性震顫的豬無肉眼變化。在脊髓細(xì)胞中未檢測到PCV抗原，也未從這些組織中分離出病毒。 4 診斷 對(duì)PCV感染的診斷可以通過原代豬腎細(xì)胞或豬腎細(xì)胞株培養(yǎng)分離病毒，利用免疫染色確定病毒的存在。檢測到PCV抗體水平提高也說明最近受到感染。對(duì)先天性震顫排除遺傳性和化學(xué)原因引起的震顫外，可以通過臨床癥狀進(jìn)行診斷�！ �4.1 臨床診斷 PMWS的臨床癥狀具有特征性，有較高的診斷價(jià)值。Rosell等在有PMWS發(fā)病史的養(yǎng)豬場挑選出具有發(fā)育不良、皮膚蒼
白及腹股溝淋巴結(jié)腫大癥狀的15頭仔豬，進(jìn)行病理檢查、PCV抗原及核酸檢驗(yàn)，結(jié)果所有仔豬都患有PMWS。傳染性先天性震顫的震顫為從輕度到重度。在出生后第一周，嚴(yán)重的震顫可因不能吃奶而死亡，活一周的仔豬可以存活下來，但多數(shù)在3周時(shí)間恢復(fù)。震顫為雙側(cè)，影響骨骼肌肉，當(dāng)臥下或睡覺時(shí)震顫消失，外界刺激可引發(fā)或加重震顫，如聲音或溫度刺激;有的在整個(gè)生長和發(fā)育期間都不斷發(fā)生震顫�！ �4.2 病理學(xué)診斷 當(dāng)發(fā)現(xiàn)全身淋巴結(jié)腫大，肺退化不全或形成固化、致密病灶時(shí)，應(yīng)懷疑本病。病理組織學(xué)檢查可見全身淋巴組織的
淋巴細(xì)胞減少，單核吞噬細(xì)胞類細(xì)胞浸潤及形成多核巨細(xì)胞，如在這些細(xì)胞中觀察到嗜堿性或兩性染色的細(xì)胞質(zhì)內(nèi)包涵體，則基本可以確診。 4.3 病毒分離及電鏡觀察 將病料制成100g/L的組織懸液，加
青霉素(100IU/ml)、
鏈霉素(100ug/ml)，4℃3000r/min離心20min，取上清液接種于Dulac細(xì)胞。接種后6h用300mmol/LD-
葡萄糖胺37℃處理30min，再培養(yǎng)72～96h，將增殖病毒的細(xì)胞凍融3次，收集細(xì)胞病毒液，用細(xì)胞病毒液再接種細(xì)胞傳代6次。第6代細(xì)胞病毒液反復(fù)凍融3次，按5g/L加Trition114，37℃處理30min，10000g離心30min，棄沉淀;將上清液加入盛有300g/L蔗糖墊的離心管中，15000g離心3h;棄上清，用0.01mmol/LpH8.0的TE緩沖液重懸并收集病毒，乙酸雙氧鈾負(fù)染色后電鏡觀察�！ �4.4 間接免疫過氧化物酶技術(shù) 將PK-15細(xì)胞在96孔微量培養(yǎng)板上長成單層后，加入10倍稀釋的待檢豬血清，作用一定時(shí)間后吸干洗滌，每孔加入50ul1000倍稀釋的HRP標(biāo)記的
兔抗豬IgG，30℃孵育15min， 吸干洗滌后加入50ul底物溶液，然后，終止反應(yīng)。用顯微鏡讀取結(jié)果，如觀察到棕色感染細(xì)胞即為陽性�！ �4.5 DNA原位雜交實(shí)驗(yàn) 用特異性核酸探針檢測感染病料中的PCV。尤其在感染的淋巴結(jié)和
肺臟組織中經(jīng)常出現(xiàn)明顯的雜交信號(hào)�！ �5 防制對(duì)策 5.1 實(shí)施嚴(yán)格的生物安全措施 Kiupel M等(2000)報(bào)道，PCV2病毒能夠在BALB/C系小鼠中復(fù)制并產(chǎn)生輕微的病變，這種傳染是直接的，能經(jīng)過胎盤感染。相對(duì)于自然發(fā)生PMWS的豬及PCV2感染的豬而言，感染小鼠體內(nèi)則沒有那樣廣泛而嚴(yán)重的病理變化，通過胎盤感染PCV可復(fù)制出豬的生殖道先天性震顫A2病例。被PCV2感染的小鼠能否排毒尚不清楚，但小鼠的先天性及出生后的感染現(xiàn)象說明，可能由于野生小鼠作為PCV2的宿主或傳媒的潛在危險(xiǎn)及鼠群中感染的流行。因此要避免鼠、飛鳥及其它動(dòng)物接近豬場�！ �5.2 加強(qiáng)良好的飼養(yǎng)管理 在國外，有人嘗試使用血清療法，在降低死亡率方面獲得一定成功。具體做法是：采取PMWS豬場健康成年豬的血，抽出血清，每毫升加0.25mg蒽諾沙星或
氧氟沙星或氟苯尼考，也可以按每毫升血清加入歐孢美諾或華西經(jīng)典4萬IU，混勻后分裝冷凍保存，在仔豬出生7d后皮下注射3ml/頭，有一定效果。但是，本病沒有十分有效的治療方法，抗生素對(duì)PMWS患豬無效。但抗生素(如附紅散、百草圣等)和免疫增強(qiáng)藥物(如
黃芪多糖、流行針等)的使用以及良好的飼養(yǎng)管理有助于控制二重感染。良好的飼養(yǎng)管理主要包括：合適的飼養(yǎng)密度;良好的圈舍通風(fēng);減少環(huán)境應(yīng)激;合理分群與混養(yǎng);注意豬只引種;用高迪-HB按1：800兌水加強(qiáng)有效消毒等等。 5.3 有效預(yù)防和控制其它感染性疾病 G.W.Stevenson等(2000)報(bào)道，對(duì)新生仔豬接種PCV2，誘導(dǎo)了典型PMWS的肉眼損害和顯微損害，但在接種后第7周僅表現(xiàn)輕微的臨床癥狀。與此相反，接種含有PCV2和PRRSV的TH可在接種后13天產(chǎn)生嚴(yán)重的消耗性病癥和典型的PMWS病損。有研究認(rèn)為，PMWS、PDNS和IP三種由圓環(huán)病毒引起的病例中，病原都不是單一的，其中PCV2約占了90%以上，是主要的病原體，但PRRSV各占有60%左右，是主要的協(xié)同病原體。在PDNS中，細(xì)小病毒(PPV)占了30%。這說明，防止PCV和使其感染惡化的二重因子，特別是細(xì)菌、支原體及其它病毒侵入豬群加重病理損傷�！ �5.4 加強(qiáng)流行病學(xué)和發(fā)病機(jī)理的進(jìn)一步研究 目前對(duì)本病的流行病學(xué)和致病機(jī)理還缺乏全面、系統(tǒng)的研究，因此很難提出對(duì)PCV有效的預(yù)防和控制感染的措施�！ �5.5 加強(qiáng)疫苗的研究開發(fā) 目前，尚沒有疫苗，也沒有實(shí)驗(yàn)性試用過。吳金花、布日額等(2003)建議：研究一整套完善的檢測方法和技術(shù)體系，搞清楚PCV在我國的流行分布情況;其次是尋找致弱該病毒的有效方法來制備可行的疫苗或根據(jù)對(duì)PCV全序列的分析，克隆具有免疫原性的基因并進(jìn)行表達(dá)，制備基因工程苗。 5.6 全面評(píng)估公共安全 Tischer等(1995)用電子顯微鏡對(duì)
人尿進(jìn)行檢查時(shí)，發(fā)現(xiàn)了類似PCV的小球形粒子，此后對(duì)人、牛、鼠的血清進(jìn)行PCV抗體檢查，發(fā)現(xiàn)伴有原因不明發(fā)熱的人抗體陽性率最高達(dá)30%，正常人為20%，牛約35%，鼠12%～69%。Nishizawa等(1997)從人輸血后肝炎病例中分離出TT病毒也屬于圓環(huán)病毒屬;Nayar G P等(1999)、佐藤勝哉等(2000)分別報(bào)道了牛、
鴿感染圓環(huán)病毒。因此，對(duì)PCV作為一種人獸共患病病原進(jìn)行危險(xiǎn)性評(píng)估十分重要。
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做好疫苗接種，增強(qiáng)抵抗力
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做好免疫
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