微生物學教學組

（二00三年八月二十七日）

一、 本課程的性質(zhì)和任務
    本課程為生物學各專業(yè)本科生的必修基礎課。
    通過學習微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)、生理生化、生長繁殖、遺傳變異、生態(tài)分布、傳染免疫、分類鑒定以及微生物與其他生物的相互關系及其多樣性，在工、農(nóng)、醫(yī)等方面的應用，了解該學科的發(fā)展前沿、熱點和問題，使學生牢固掌握微生物學的基本理論和基礎知識，了解微生物的基本特性及其生命活動規(guī)律，為學生今后的學習及工作實踐打下寬厚的基礎。
二、 教學要求與教學方法
1． 以現(xiàn)代觀點審視和重新組織教學內(nèi)容，使課程的內(nèi)容和結(jié)構(gòu)、概念的提法、名詞的解釋和語言運用等都適合現(xiàn)代生物學迅速發(fā)展的要求，建立新的、優(yōu)化的微生物學課堂教學體系。
2． 在課堂教學中以“打開窗口”、“安裝接口”的方法反映當代微生物學科的成就，使學生在學習基礎知識的同時，通過一定的“窗口”看到學科發(fā)展的前沿，通過“接口”看到目前學的基礎知識與前沿的接軌，看到基礎知識的延伸及與其他相關學科的密切聯(lián)系，使學生在學習基礎知識的同時獲得一定量的最新信息，滿足和激發(fā)學生的求知欲和主動學習的興趣。
3． 采用多媒體等現(xiàn)代化教學手段輔助教學，豐富教學內(nèi)容，提高教學質(zhì)量。
4． 課堂教學與學生的課后復習、討論及專題講座相接合，并注意通過各種渠道保持與學生的聯(lián)系，隨時了解他們對教學的意見和要求，不斷改進教學方法和教學手段。

三、 教學學時分配和安排：
    本課程講授按每周4學時安排，全學時共54學時。
    教學內(nèi)容及具體學時分配如下：
一、緒論（4）
二、純培養(yǎng)和顯微技術（3）
三、微生物類群與形態(tài)（10）
四、微生物的營養(yǎng)（3)
五、微生物的代謝（4）
六、微生物的生長繁殖及其控制（4)
七、病毒（4）
八、微生物遺傳（8）
九、微生物與基因工程（2）
十、微生物的生態(tài)（4）
十一、微生物的進化、系統(tǒng)發(fā)育與分類鑒定（4）
十二、感染與免疫（4）
　
四、教學內(nèi)容和要求：
第1章：緒論
〖目的要求〗
   通過本章的課堂教學，引導學生走進微生物世界，了解微生物是什么？做什么？以及它們與人類的特殊關系；明確微生物學作為一門獨立學科在生命科學發(fā)展中的重要作用和地位；展望未來，激發(fā)學生的學習興趣和明確肩負的重任。
〖教學內(nèi)容〗
1、武漢大學“微生物學” 課程的建設與發(fā)展
2、本學期的教學安排
3、微生物與我們
4、微生物的發(fā)現(xiàn)和微生物學的建立與發(fā)展
5、微生物的類群及特點
思考題：
試根據(jù)微生物的特點，談談為什么說微生物既是人類的敵人，更是人類的朋友。
　
第2章：純培養(yǎng)和顯微技術
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，向?qū)W生介紹進行微生物學研究的基本技術，即無菌技術、純種分離技術、培養(yǎng)技術和顯微技術，使他們了解微生物學的基本研究方法和研究手段，為后面介紹其他微生物學相關知識打下基礎。
〖教學內(nèi)容〗
1、微生物的分離和純培養(yǎng)
1.1無菌技術
1.2用固體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)
1.3用液體培養(yǎng)基分離純培養(yǎng)
1.4單細胞（孢子）分離
1.5選擇培養(yǎng)分離
1.6二元培養(yǎng)物
2、 顯微鏡和顯微技術
2.1 顯微鏡的種類及原理
2.2 顯微觀察樣品的制備
思考題：
1、為什么說Koch等建立的微生物純培養(yǎng)技術是微生物學建立與發(fā)展的基石？一般可用哪些方法獲得微生物的純培養(yǎng)？
2、微生物的最顯著特征就是個體微小，通常只能通過 顯微鏡進行觀察。試列舉在顯微觀察中通過改變樣品的反差以改善觀察效果的技術及方法。
　
第3章：微生物類群與形態(tài)結(jié)構(gòu)

〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，學習各種微生物，包括細菌、古生菌和真核微生物的基本結(jié)構(gòu)特點和生活特性，了解微生物的多樣性。
〖教學內(nèi)容〗
1、真細菌
1.1 一般形態(tài)及細胞結(jié)構(gòu)
1.2 放線菌
1.3 支原體、立克次氏體和衣原體
1.4 粘細菌（myxobacteria）
1.5 蛭弧菌（Bdellovibrio）
1.6 藍細菌（Cyanobacteria）
2、古生菌
2.1 概念的提出
2.2 細胞形態(tài)
2.3 細胞結(jié)構(gòu)
3、真核微生物
3.1 霉菌
3.2 酵母菌
思考題：
1、試根據(jù)細菌細胞結(jié)構(gòu)的特點，分析并舉例說明為什么它們能在自然界中分布廣泛。
2、細菌、粘細菌、放線菌、霉菌、酵母在繁殖方式上各有 什么特點？
　
第4章：微生物的營養(yǎng)
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解微生物營養(yǎng)類型的特點及多樣性，以及根據(jù)不同微生物各自的營養(yǎng)要求，配制相應的培養(yǎng)基對微生物培養(yǎng)的理論知識，為今后對微生物的研究與利用打下基礎。
〖教學內(nèi)容〗
1、 微生物的營養(yǎng)要求
1.1 微生物細胞的化學組成
1.2 營養(yǎng)物質(zhì)及其生理功能
1.3 微生物的營養(yǎng)類型(nutritional types)
2、 培養(yǎng)基
2.1選用和設計培養(yǎng)基的原則和方法
2.2 培養(yǎng)基的類型及應用
3、營養(yǎng)物質(zhì)進入細胞
3.1擴散(diffusion)
3.2促進擴散(facilitated diffusion)
3.3 主動運輸(active transport)
3.4膜泡運輸(memberane vesicle transport)
思考題：
試比較營養(yǎng)物質(zhì)進入微生物細胞的幾種方式的特點。

第5章：微生物的代謝
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解微生物代謝類型的特點及多樣性。
〖教學內(nèi)容〗
1、 代謝概論
2、 生物產(chǎn)能代謝
2.1 生物氧化
2.2 異養(yǎng)微生物的生物氧化
2.3 自養(yǎng)微生物的生物氧化
2.4 能量轉(zhuǎn)換
3、 微生物次級代謝與次級代謝產(chǎn)物
3.1 次級代謝與次級代謝產(chǎn)物
3.2 次級代謝的調(diào)節(jié)
思考題：
不同營養(yǎng)類型的微生物在不同條件下產(chǎn)生ATP和還原力的方式與特點。

第6章：微生物的生長繁殖及其控制
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解微生物生長繁殖的規(guī)律，掌握微生物生長的測定方法，及各種物理、化學因素對微生物生長的影響。
〖教學內(nèi)容〗
1、 生物生長的測定
1.1 以數(shù)量變化對微生物生長情況進行測定
1.2 以生物量為指標測定微生物的生長
2、 細菌的群體生長繁殖��
2.1 生長曲線
2.2 同步培養(yǎng)
2.3 連續(xù)培養(yǎng)
3、 微生物生長繁殖的控制��
3.1 控制微生物的化學物質(zhì)��
3.2 控制微生物的物理因素��
思考題：
細菌的生長繁殖與高等動植物的有哪些異同？其典型生長曲線可分幾期，其劃分依據(jù)是什么？
　
第七章：病毒
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解病毒，包括噬菌體、動植物病毒等的生活周期，掌握反映病毒生長繁殖規(guī)律的一步生長曲線的原理和實驗方法，及有關病毒非增殖性感染特別是噬菌體溶原性反應的基本概念。
〖教學內(nèi)容〗
1、概述��
1.1 病毒的發(fā)現(xiàn)和研究歷史
1.2 病毒的特點和定義��
1.3 病毒的宿主范圍��
1.4 病毒的培養(yǎng)和純化
2、 毒粒的性質(zhì)��
2.1 毒粒的形態(tài)結(jié)構(gòu)��
2.2 毒粒的化學組成��
3、 病毒的復制��
3.1 病毒的復制周期��
3.2 病毒感染的起始��
3.3 病毒大分子的合成��
3.4 病毒的裝配與釋放��
4、 病毒的非增殖性感染��
4.1 概念
4.2 溫和噬菌體的溶源性反應。
思 考 題��
試結(jié)合一步生長曲線分析病毒的特點，并與細菌進行比較。
　
第8章：微生物遺傳
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解細菌的染色體基因組及染色體外的遺傳因子（質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座子）的結(jié)構(gòu)和基本特點，掌握微生物基因突變、遺傳的基本規(guī)律，并在此基礎上了解微生物菌種保藏的基本理論和實驗方法。
〖教學內(nèi)容〗
1、 遺傳的物質(zhì)基礎
1.1 DNA作為遺傳物質(zhì)
1.2 RNA作為遺傳物質(zhì)
1.3 朊病毒的發(fā)現(xiàn)與思考
2、 微生物的基因組結(jié)構(gòu)
2.1 概念：
2.2 微生物與人類基因組計劃：
2.3 微生物基因組結(jié)構(gòu)的特點：
3、 質(zhì)粒和轉(zhuǎn)座因子
3.1 質(zhì)粒的分子結(jié)構(gòu)��
3.2 質(zhì)粒的主要類型��
4、 基因突變及修復��
4.1 基因突變的特點��
4.2 幾種常見的微生物突變類型
4.3 誘變劑與致癌物質(zhì)——Ames試驗
5、 細菌基因轉(zhuǎn)移和重組��
5.1 細菌的接合作用(conjugation)��
5.2 細菌的轉(zhuǎn)導(transduction)��
5.3 細菌的遺傳轉(zhuǎn)化(genetic transformation)��
5.4 基因定位和基因組測序��
6、 菌種保藏
6.1 菌種的衰退與復壯
6.2 防止衰退的措施
6.3 菌種保藏
思 考 題：��
1、 如果二個不同營養(yǎng)缺陷標記（a - b - c + d + 和 a + b + c - d - ）的菌株經(jīng)混合后能產(chǎn)生在基本培養(yǎng)基平板上生長的原養(yǎng)型重組菌株，請設計一個實驗來決定該遺傳轉(zhuǎn)移過程是轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導還是接合?
2、 自然遺傳轉(zhuǎn)化與人工轉(zhuǎn)化之間有什么關系?為什么在一般情況下它們轉(zhuǎn)化質(zhì)粒的成功率有如此大的差別?
　
第9章：微生物與基因工程
〖目的要求〗
通過本章的課堂教學，使學生了解微生物學在基因工程技術的建立與發(fā)展中的重要意義，了解并掌握基因工程的基本過程和基本技術。
〖教學內(nèi)容〗
1、基因工程概述
1.1 基因工程的基本過程
1.2 基因工程的發(fā)展歷史
1.3 微生物學與基因工程的關系
2、 微生物與基因工程工具酶
2.1 限制性核酸內(nèi)切酶
2.2 DNA連接酶（DNA ligase）
2.3 其它工具酶
3、 微生物與克隆載體
3.1 質(zhì)�？寺≥d體
3.2 λ噬菌體克隆載體
3.3 柯斯質(zhì)粒載體
3.4 M13噬菌體載體
3.5 噬菌粒載體
3.6 真核生物的克隆載體
3.7 人工染色體
4、 微生物作為克隆載體的宿主
4.1 宿主的基本要求與性質(zhì)
4.2 常用的基因工程宿主
5、 基因工程的常用技術和方法
5.1 PCR的原理和應用
5.2 基因工程技術應用舉例
思 考 題：
1、 基因工程的基本步驟是怎樣的？其中哪些需涉及到微生物的參與？
2、為什么說微生物學不僅為基因工程提供了理論基礎，同時也提供了操作技術？
　
第10章：微生物的進化、系統(tǒng)發(fā)育和分類鑒定

〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解利用現(xiàn)代分子生物學技術建立的有關生物進化和系統(tǒng)發(fā)育的理論，掌握微生物分類的基本原理和技術。
〖教學內(nèi)容〗
1、 進化的測量指征��
1.1 進化指征的選擇��
1.2 RNA作為進化的指征��
1.3 rRNA和系統(tǒng)發(fā)育樹��
2、 細菌分類
1.1 分類單元及其等級��
1.2 微生物的命名��
3、 細菌分類鑒定的特征和技術
3.1 形態(tài)學特征��
3.2 生理生化特征��
3.3 核酸的堿基組成和分子雜交��
3.4 其它��
4、 伯杰氏手冊
思考題
1、 為什么能用生物大分子作為衡量生物進化的標尺？有哪些選用原則？建立16 S r RNA系統(tǒng)發(fā)育樹的意義何在？
2、 為什么在現(xiàn)代微生物分類中，任何能穩(wěn)定地反映微生物種類特征的資料，都有分類學意義，都可以作為分類鑒定的依據(jù)？你知道有哪些項目已被用于細菌學分類和鑒定？
　
第11章：微生物的生態(tài)
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解微生物在自然分布的特點及與人類生活的密切關系，掌握微生物與其生活在一起的其它生物之間的相互關系，及微生物在自然界物質(zhì)循環(huán)中的重要作用。
〖教學內(nèi)容〗
1、 然界中的微生物
1.1 空氣中的微生物
1.2 水體中的微生物
1.3 土壤中的微生物
1.4 工農(nóng)業(yè)產(chǎn)品上的微生物
1.5 極端環(huán)境下的微生物
1.6 不可培養(yǎng)的微生物
2、 微生物與生物環(huán)境間的相互關系
2.1 互生
2.2 共生
2.3 寄生
2.4 拮抗
2.5 競爭
2.6 捕食
3、 微生物在生態(tài)系統(tǒng)中的作用
思考題：
1、試從微生物的特點分析其分布比動植物更廣泛的原因，為什么無菌操作技術是一切微生物學工作的基礎？
2、試論微生物與水體富營養(yǎng)化作用，你認為對此類污染該如何進行防治？
3、試用一些典型例子說明微生物與生物環(huán)境之間的相互關系。
4、微生物在生態(tài)系統(tǒng)中的地位怎樣？
　
第12章：感染與免疫
〖目的要求〗
    通過本章的課堂教學，使學生了解人體的免疫系統(tǒng)與病原微生物之間的相互關系，掌握有關免疫學的基本知識和基本概念。
〖教學內(nèi)容〗
1、 感染的一般概念��
1.1 感染的途徑與方式��
1.2 微生物的致病性��
1.3 傳染的類型
2、 宿主的非特異免疫��
2.1 生理屏障��
2.2 細胞因素��
2.3 體液因素��
2.4 炎癥
3、 宿主的特異性免疫��
3.1 特異性免疫的一般概念��
3.2 抗原和抗體��
3.3 免疫應答
思考題
1.對細菌內(nèi)毒素和細菌外毒素的免疫應答有何不同?��
2.吞噬細胞的功能可因哪些體液因子的作用而增強?��
3.補體激活后可能產(chǎn)生對機體有利的免疫也可能造成自身損傷，試舉例說明。��
4.試舉例說明天然免疫與特異性免疫之間并無截然界限。��
　
五、教材
《微生物學》，沈萍，高等教育出版社，2000
　
六、參考書及多媒體輔助課件
1．《微生物學教程》，周德慶，高等教育出版社，1993
2．“Microbiology : An Introduction : Chemistry of Life : Bacteria ID CD-ROM, and Student Tutorial CD-ROM”， Gerard J. Tortora Berdell R. Funke Christine L. Case，Addison Wesley Longman, Inc.，1999
3．“Brock's Biology of Microorganism 9TH”， Michael T. Madigan John M. Martinko Jack Parker，Prentice Hall，1999
4．“Microbiology”， Lansing M. Prescott,Donald Klein, John Harley，McGraw-Hill Higher Education，2002及其中譯本“微生物學”，沈萍、彭珍榮主譯，高等教育出版社，2003
5．“Microbe Zoo” CD-ROM, the Michigan State University Board of Trustees, 1998

附：
一、 承擔的教學研究項目
“微生物學”課程如何現(xiàn)代化的研究,國家理科人才培養(yǎng)基地創(chuàng)建名牌課程項目，1999～2001
“微生物學”課程如何現(xiàn)代化的研究,國家理科人才培養(yǎng)基地創(chuàng)建名牌課程項目(繼續(xù)資助)，2002～
“充分利用現(xiàn)代化手段、提高微生物學教學水平”，湖北省高等學校教學改革項目， 2000，9-2002，9
"現(xiàn)代化教學手段在微生物學教學中的適應與提高"，湖北省高等學校教學改革項目， 2002，9～2004，9

《微生物學實驗》教學大綱

微生物學教學組

（二00三年八月二十八日）

一、本課程的性質(zhì)和任務

    微生物學實驗是生物學重要的基礎課之一，特別是隨著分子生物學的發(fā)展與拓寬，微生物學方法與技術顯得尤為重要。此外，醫(yī)學、農(nóng)學、林學等學科，甚至地質(zhì)學、太空學等也需微生物的方法與技術。因此，熟悉掌握微生物學方法與技術，對其它很多學科的發(fā)展有直接的影響。無菌操作技能和無菌概念的建立是微生物學實驗中最重要的內(nèi)容，由于微生物學實驗結(jié)果的觀察有的需幾天后再觀察，這樣學生需常到實驗室來，花費時間較多。

本課程的任務：

1. 微生物學實驗主要任務是使學生掌握研究與應用微生物的主要方法與技術，包括經(jīng)典的、常規(guī)的、以及現(xiàn)代的方法與技術，使學生具有適應于從事相關學科的基礎理論研究與實際生產(chǎn)應用的微生物學實驗技能。

2.     與微生物學基礎理論課緊密結(jié)合，使學生將理性知識與感性認識有機地結(jié)合，將書本知識用于實驗，在實驗中更深地理解基礎理論，提高學生的綜合能力與創(chuàng)新意識。

3.     提高學生分析問題和解決問題的能力。根據(jù)本學科的特點，逐步使學生認識微生物的基本特性，比較它們與其它生物的相似和不同之處，知道如何研究微生物以及對研究中所出現(xiàn)的問題點樣分析，并加以解決。

二、教學要求與教學方法

1. 教學要求

1)  注重微生物學基礎實驗技能的掌握與提高，克服盲目追求新穎而忽視基礎的傾向；

2)     實驗課前要預習，明確每次實驗的目的與基本步驟；

3)     在實驗中要有嚴緊的科學態(tài)度，尊重事實與實驗結(jié)果，要善于發(fā)現(xiàn)新現(xiàn)象；

4)     樹立密切合作的風氣，包括學生與老師、班與班、組與組、組長與組員之間的密配合。

2. 教學方法

1)     以學生自己動手為主，老師在適當時間予以提示；

2)     對實驗中所出現(xiàn)的一些現(xiàn)象多向?qū)W生提出問題，使它們學會分析結(jié)果，并與理論知識有機結(jié)合；

3)     根據(jù)實驗的進行程度，引導學生更深入思考，逐步樹立他們的創(chuàng)新意思；

4)     嚴格要求使操作技能規(guī)范化，老師作示范，強調(diào)其要點學生自己練。

三. 教學學時分配與安排

      本課程講授按每周4學時安排， 全學期共16周。

實驗一 ： 1.本學期教學計劃安排及要求；2.環(huán)境微生物的檢測；3.滅菌器皿的準備

實驗二  ：  1. 微生物菌落形態(tài)的觀察；2. 細菌簡單染色及個體形態(tài)的觀察

實驗三： 1. 酸奶的制作；  2. 革蘭氏染色 (革蘭氏陽性菌、陰性菌)       

實驗四：培養(yǎng)基的配制         

實驗五：神農(nóng)架自然保護區(qū)土壤樣品中微生物的分離與純化     

實驗六：  1.放線菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)（試管法）；2.霉菌形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察(壓片法等)    

實驗七：  1.酵母菌死活染色及形態(tài)觀察；2.細菌的鞭毛染色與運動性觀察    

實驗八：  1.平板計數(shù)法；2.光電計數(shù)法；3.直接計數(shù)法(顯微鏡)        

實驗九： 1. 大分子物質(zhì)的水解試驗；2. 糖發(fā)酵試驗；3. IMViC試驗    

實驗十：  1. 化學因素；2. 生物因素；3. 物理因素    

實驗十一-----十二：1. 東湖水體中微生物的檢測；2. 純凈水中微生物的檢測；3. 自來水中微生物的檢

                      測；4. 酸奶中細菌的檢查

實驗十三：DNA轉(zhuǎn)化(固體轉(zhuǎn)化法)    

實驗十四： Ames試驗     

實驗十五：1. 實驗問題解答；2. 本學期教學總結(jié)      

實驗十六：期末考試

四．教學內(nèi)容和要求

實驗一 

[目的要求]

1. 證明實驗室環(huán)境與體表存在微生物。

2. 比較來自不同場所與不同條件下細菌的數(shù)量和類型。

3. 觀察不同類群微生物的菌落形態(tài)特征。

4. 體會無菌操作的重要性。

[實驗原理]

平板培養(yǎng)基含有細菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在合宜溫度下培養(yǎng)，1-2天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體的集落，稱為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通過平板培養(yǎng)來檢查環(huán)境中細菌的數(shù)量和類型。

[教學內(nèi)容] 

實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查

                        實驗二

[目的要求]   

1.明確培養(yǎng)基的配制原理。

    2.通過對基礎培養(yǎng)基的配制，掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。

[實驗原理]

    牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基，由于這種培養(yǎng)基中含有一般細菌生長繁殖所需要的最基本的營養(yǎng)物質(zhì)，所以可供作微生物生長繁殖之用�；�礎培養(yǎng)基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏為微生物提供碳源、能源、磷酸鹽和維生素，蛋白胨主要提供氮源和維生素，而NaCl提供無機鹽。由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。

[教學內(nèi)容]

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備

                       實驗三 

[目的要求]

    通過對高氏Ⅰ號培養(yǎng)基的配制、掌握配制合成培養(yǎng)基的一般方法。

[實驗原理]

    高氏Ⅰ號培養(yǎng)基是用來培養(yǎng)和觀察放線菌形態(tài)特征的合成培養(yǎng)基。如果加入適量的抗菌藥物(如各種抗生素、酚等)，則可用來分離各種放線菌。此合成培養(yǎng)基的主要特點是含有多種化學成分已知的無機鹽，這些無機鹽可能相互作用而產(chǎn)生沉淀。此外，合成培養(yǎng)基有的還要補加微量元素。

[教學內(nèi)容]

    高氏Ⅰ號培養(yǎng)基的制備

實驗四 

[目的要求]

通過對分離真菌的馬丁氏(Martin)培養(yǎng)基配制、掌握選擇培養(yǎng)基的配制方法，并確選擇的原理。

[實驗原理]

馬丁氏培養(yǎng)基是一種用來分離真菌的選擇性培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基的特點是培養(yǎng)基中加入的孟加拉紅和鏈霉素能有效的抑制細菌和放線功菌的生長，而對真菌無抑制作用，因而真菌在這種培養(yǎng)基上可以得到優(yōu)勢生長，從而達到分離真菌的目的。

[教學內(nèi)容]

     馬丁氏培養(yǎng)基的制備

實驗五 

[目的要求]

1.了解干熱滅菌的原理和應用范圍。

2.學習干熱滅菌的操作技術。

[實驗原理]

干熱滅菌是利用高溫使微生物細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內(nèi)含水量越大，則蛋白質(zhì)凝固就越快，反之含水量越小，凝固緩慢。

[教學內(nèi)容]

干熱滅菌

實驗六

[目的要求]

1.了解高壓蒸汽滅菌的基本原理及應用范圍。

2.學習高壓蒸汽滅菌的操作方法。

[實驗原理]

高壓蒸汽滅菌是將待滅菌的物品放在一個密閉的加壓滅菌鍋內(nèi)，通過加熱，使滅菌鍋隔套間的水沸騰而產(chǎn)生蒸汽。從而使沸點增高，得到高于100℃的溫度。導致菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達到滅菌的目的。

[教學內(nèi)容]

高壓蒸汽滅菌

實驗七 

[目的要求]

了解紫外線滅菌的原理和方法

[實驗原理]

紫外線滅菌是用紫外線燈進行的。波長為200-300nm的紫外線都有殺菌能力，其中以260nm的殺菌力最強。在波長一定的條件下，紫外線的殺菌效率與強度和時間的乘積成正比。紫外線殺菌機制主要是因為它誘導了胸腺嘧啶二聚體的形成和DNA鏈的交聯(lián)，從而抑制了DNA的復制。另一方面，由于輻射能使空氣中的氧電離成［O］，再使O2氧化生成自臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成過氧化氫(H2O2)。O3和H2O2均有殺菌作用。

[教學內(nèi)容]

紫外線滅菌

實驗八

[目的要求]

了解過濾除菌的原理；掌握微孔濾膜過濾除菌的方法。

[實驗原理]

過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法。根據(jù)不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。此法除菌的最大優(yōu)點是可以不破壞溶液中各種物質(zhì)的化學成分，但由于濾量有限，所以一般只適用于實驗室中小量溶液的過濾除菌。

[教學內(nèi)容]

微孔濾膜過濾除菌

實驗九 

[目的要求]

掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化微生物的基本操作技術。

[實驗原理]

從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。常用的方法有：1).簡易單細胞挑取法; 2).平板分離法。

土壤是微生物生活的大本營，它所含微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。因此土壤是微生物多樣性的重要場所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離、純化得到許多有價值的菌株。

[教學內(nèi)容]

微生物的分離與純化

實驗十 

[目的要求]

1.了解不同的微生物在斜面上、半固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基中的生長特征。

2.進一步熟練和掌握微生物無菌操作技術。

[實驗原理]

微生物的培養(yǎng)特征是指微生物在固體培養(yǎng)基上、半固體和液體培養(yǎng)基中生長后所表現(xiàn)出的群體形態(tài)特征。不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征，這些特征一般用固體、半固體和液體培養(yǎng)基來進行檢測。

檢測微生物的培養(yǎng)特征時，接種和培養(yǎng)過程中必須保證不被其他微生物所污染，因此，除工作環(huán)境要求盡可能地避免或減少雜菌污染外，熟練地掌握各種無菌操作接種技術是很重要。

[教學內(nèi)容]

微生物的培養(yǎng)特征

                          實驗十一

[目的要求]

1.學習微生物涂片、染色的基本技術，掌握細菌的簡單染色法。

2.初步認識細菌的形態(tài)特征。

3.鞏固顯微鏡(油鏡)的使用方法和無菌操作技術。

[實驗原理]

簡單染色法是利用單一染料對細菌進行染色的一種方法。此法操作簡便，適用于菌體一般形狀和細菌排列的觀察。常用堿性染料進行簡單染色，這是因為：在中性、堿性或弱酸性溶液中，細菌細胞通常帶負電荷，而堿性染料在電離時，其分子的染色部分帶正電荷(酸性染料電離時，其分子的染色部分帶正電荷)，因此堿性染料的染色部分很容易與細菌結(jié)合使細菌著。染色后的細菌細胞與背景形成鮮明的對比，在顯微鏡下更易于識別。常用作簡單染色的染料有：美藍、結(jié)晶紫、堿性復紅等。

當細菌分解糖類產(chǎn)酸使培養(yǎng)基pH下降時，細菌所帶正電荷增加，此時可用伊紅、酸性復紅或剛果紅等酸性染料染色。

[教學內(nèi)容]

細菌的簡單染色法

實驗十二

[目的要求]

1.  學習并初步掌握革蘭氏染色法。

2.  了解革蘭氏染色法的原理及其在細菌分類鑒定中的重要性。

[實驗原理]

革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家Christain Gram氏創(chuàng)立的，而后一些學者在此礎上作了某些改進。革蘭氏染色法是細菌學中最重要的鑒別染色法。

[教學內(nèi)容]

革蘭氏染色法

                         實驗十三

[目的要求]

1.  學習并初步掌握鞭毛染色法，觀察細菌鞭毛的形態(tài)特征。

2.  學習用壓滴法和懸滴法觀察細菌的運動性。

[實驗原理]

鞭毛是細菌的運動“器官”，細菌是否具有鞭毛，以及鞭毛著生的位置和數(shù)目是細菌的一項重要形態(tài)特征。細菌的鞭毛很纖細，其直徑通常為0.01～0.02微米，所以，除了很少數(shù)能形成鞭毛束(由許多根鞭毛構(gòu)成)的細菌可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛束的存在外，一般細菌的鞭毛均不能用光學顯微鏡直接觀察到，而只能用電子顯微鏡觀察。要用普通光學顯微鏡觀察細菌的鞭毛，必須用鞭毛染色法。

[教學內(nèi)容]

    鞭毛染色法及細菌運動性的觀察

實驗十四

[目的要求]

1．  學習并掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法。

2．  初步了解放線菌的形態(tài)特征。

[實驗原理]

放線菌是指能形成分枝絲狀體或菌絲體的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，緊貼培養(yǎng)基表面或深入培養(yǎng)基內(nèi)生長的叫基內(nèi)菌絲(簡稱“基絲”)，基絲生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲(簡稱“氣絲”)，并進一步分化產(chǎn)生孢子絲及孢子。為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們設計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征。本實驗介紹其中幾種常用方法。

[教學內(nèi)容]

放線菌形態(tài)的觀察

實驗十五

[目的要求]

學習并掌握用測微尺測定微生物大小的方法。增強微生物細胞大小的感性認識。

[實驗原理]

微生物細胞的大小是微生物基本的形態(tài)特征，也是分類鑒定的依據(jù)之一。微生物大小

的測定在顯微鏡下，借助于特殊的測量工具—測微尺，包括目鏡測微尺和鏡臺測微尺。

[教學內(nèi)容]

  微生物大小的測定

實驗十五 

[目的要求]

1.  觀察酵母菌的形態(tài)及出芽生殖方式，學習區(qū)分酵母菌死活細胞的實驗方法。

2.  掌握酵母菌的一般形態(tài)特征及其與細菌的區(qū)別。

[實驗原理]

酵母菌是不運動的單細胞真核微生物，其大小通常比常見細菌大幾倍甚至十幾倍。

美藍是一種無毒性的染料，它的氧化型呈藍色，還原型無色。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內(nèi)具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型，因此，具有還原能力的酵母活細胞是無色的、而死細胞或代謝作用微弱的衰老細胞則呈藍色或淡藍色，借此即可對酵母菌的死細胞和活細胞進行鑒別。

[教學內(nèi)容]

酵母菌的形態(tài)觀察及死活細胞的鑒別

                         實驗十六

[目的要求]

學習并掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法；了解四類常見霉菌的基本形態(tài)特征。

[實驗原理]

霉菌可產(chǎn)生復什分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據(jù)。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多(約為3～10微米)，常是細菌菌體寬度的幾倍至幾十倍，因此，用低倍顯微鏡即可觀察。

[教學內(nèi)容]

霉菌的形態(tài)觀察

實驗十七

  [目的要求]

1.明確血球計數(shù)板計數(shù)的原理

2.掌握使用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。

[實驗原理]

顯微鏡直接計數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻上(又稱計菌器)，于顯微鏡下直接計數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。

[教學內(nèi)容]

顯微鏡直接計數(shù)法

                      實驗十八 

[目的要求]

學習平板菌落計數(shù)的基本原理和方法。

[實驗原理]

平板菌落計數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個細胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個單細胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落。為了清楚地闡述平板菌落計數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colony -forming units, cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。

[教學內(nèi)容]

平板菌落計數(shù)法

實驗十九 

[目的要求]

1.了解光電比濁計數(shù)法的原理

2.學習、掌握光電比濁計數(shù)法的操作方法。

[實驗原理]

當光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。在一定的范圍內(nèi)，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖Ⅷ-4)。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度--菌數(shù)標準曲線。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標準曲線。

[教學內(nèi)容]

光電比濁計數(shù)法

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