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一種異源表達(dá)和純化人艾滋病病毒輔助受體CCR5的方法

公開(公告)號(hào) CN101148662A  
公開(公告)日 2008.03.26  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200710092672.X  
申請(qǐng)日期 2007.09.06  
專利名稱 一種異源表達(dá)和純化人艾滋病病毒輔助受體CCR5的方法  
主分類號(hào) C12N15/09(2006.01)I  
分類號(hào) C12N15/09(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K19/00(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 重慶大學(xué)  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 胡宗利;陳緒清;陳國(guó)平;潘 宇;楊妤欣;胡廷章  
地址 400044重慶市沙坪壩區(qū)正街174號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 重慶志合專利事務(wù)所  
代理人 胡榮琿  
國(guó)省代碼 重慶;85  
主權(quán)項(xiàng) 一種異源表達(dá)和純化人艾滋病病毒輔助受體CCR5的方法,其特征在于該方法包括以下步驟: (1)構(gòu)建誘導(dǎo)型GST-CCR5融合蛋白表達(dá)載體; (2)將GST-CCR5融合蛋白表達(dá)載體轉(zhuǎn)化粟酒酵母,篩選和鑒定粟酒酵母轉(zhuǎn)化子; (3)GST-CCR5融合蛋白在粟酒酵母中的誘導(dǎo)表達(dá); (4)確證CCR5基因在粟酒酵母中得到表達(dá); (5)分離和純化GST-CCR5融合蛋白; (6)檢測(cè)分離純化的GST-CCR5融合蛋白; (7)鑒定分離純化的GST-CCR5融合蛋白; (8)人類CCR5蛋白從GST-CCR5融合蛋白中的分離和純化。  
摘要 本發(fā)明公開了一種異源表達(dá)和純化人艾滋病病毒輔助受體CCR5的方法,該方法主要包括步驟:構(gòu)建誘導(dǎo)型GST-CCR5融合蛋白表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化粟酒酵母;鑒定粟酒酵母轉(zhuǎn)化子;GST-CCR5融合蛋白在粟酒酵母中的誘導(dǎo)表達(dá);確認(rèn)CCR5基因在粟酒酵母中得到表達(dá);分離和純化GST-CCR5融合蛋白;檢測(cè)分離純化的GST-CCR5融合蛋白;鑒定分離純化的GST-CCR5融合蛋白;從GST-CCR5融合蛋白中的分離和純化人類CCR5蛋白。本發(fā)明的方法可以應(yīng)用于在粟酒酵母中表達(dá)高等動(dòng)植物的膜蛋白,并且獲得的蛋白質(zhì)具有翻譯后的修飾作用和生物活性。表達(dá)的膜蛋白對(duì)于研究其晶體結(jié)構(gòu)和高通量藥物篩選有應(yīng)用價(jià)值。  
國(guó)際公布  
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