公開(公告)號(hào)
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CN1325651C
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公開(公告)日
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2007.07.11
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN01112983.2
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申請(qǐng)日期
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2001.05.24
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專利名稱
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人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用
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主分類號(hào)
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C12N15/63(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/63(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/20(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;A61P19/02(2006.01)I;A61P17/06(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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大連金威基因技術(shù)有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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秦 瑩
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地址
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116001遼寧省大連市民意街40號(hào)海景花園大廈25樓
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司
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代理人
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董 梅
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國(guó)省代碼
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遼寧;21
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主權(quán)項(xiàng)
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一種高效表達(dá)人重組乙型干擾素的方法,其特征在于:通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素,真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體或酵母菌表達(dá)載體中的一種,其中: 所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞,克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列,代之以新的桿狀病毒信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾,這些嵌合基因被引入桿狀病毒表達(dá)載體后,桿狀病毒多角體蛋白啟動(dòng)子指導(dǎo)被感染的昆蟲細(xì)胞中重組乙型干擾素蛋白的表達(dá),而由18個(gè)氨基酸組成的桿狀病毒信號(hào)肽僅指導(dǎo)人乙型干擾素的翻譯進(jìn)入昆蟲細(xì)胞的糖基化途徑,其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上; 所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是酵母菌,克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列,代之以新的分泌型酵母菌信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾,這些嵌合基因被引入酵母菌表達(dá)載體后,被轉(zhuǎn)化到酵母菌中發(fā)酵,同時(shí)生產(chǎn)重組人乙型干擾素,分泌型酵母菌信號(hào)肽指導(dǎo)乙型干擾素的翻譯進(jìn)入酵母細(xì)胞的糖基化途徑,并分泌至培養(yǎng)上清中,其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上。
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摘要
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本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用涉及采用生物基因工程的方法在真核細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)重組人乙型干擾素,以及重組人乙型干擾素的用途。本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)系通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素,所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是昆蟲細(xì)胞;所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是酵母菌。本發(fā)明利用具有糖基化功能的昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和酵母菌表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)人乙型干擾素基因,所表達(dá)和生產(chǎn)的蛋白量相對(duì)量大、純度高。本發(fā)明中所描述的表達(dá)高產(chǎn)量重組人乙型干擾素的方法可以使臨床應(yīng)用所需要的重組蛋白藥物的制備簡(jiǎn)單化和廉價(jià)化。
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國(guó)際公布
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