| 公開(公告)號 | CN1147588C |
| 公開(公告)日 | 2004.04.28 |
| 申請(專利)號 | CN01131855.4 |
| 申請日期 | 2001.12.21 |
| 專利名稱 | 一種高效表達(dá)生產(chǎn)肽抗生素的方法 |
| 主分類號 | C12P21/02 |
| 分類號 | C12P21/02;C12N15/11;C12N15/31;C12N15/63;C12N15/64 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 饒賢才;胡福泉 |
| 地址 | 400038 重慶市沙坪壩區(qū)高灘巖正街30號 |
| 頒證日 | 2004.04.28 |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | |
| 代理人 | |
| 國省代碼 | 重慶;85 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種高效表達(dá)生產(chǎn)肽抗生素的方法，其具體步驟為：(a)設(shè)計一個承載蛋白(carrier protein)編碼序列，具體序列為：ctcctatctaagagcctagaggatcatgaggcgggggtatgccctttgggctgcccctactgcttagctgactatgagagaatttggggtgtacgagtggtaagttctgtagctgcatctaatgataaggtagaggtggatcccaatggaatcaaagcaggagatccgggggctaagctcgataaggcaaggtggatgttggaatcatcttcgaagcgttcccgagagctctttatgcggtggcacaagttgctaacttcggagcaagcaaatatagtcgcgggggttggaggttcgtcgagaacggaatacagcgatatgatgctgccttcggacgacacctccttgagcgacacaagggtgaggttttggacccccaaagtagtttacccaccggtatcacgaagtttggaacgccctagcagccctagagctggtaatccaacaagaggagggttctaatggaacttctactggatccgagggc(489bp)；(b)將(a)所述的承載蛋白編碼序列插入一表達(dá)載體，使該序列處于表達(dá)載體啟動子的控制之下；(c)將(b)所述的構(gòu)建了承載蛋白的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化微生物宿主細(xì)胞，篩選并鑒定陽性重組子；(d)克隆準(zhǔn)備生產(chǎn)的肽抗生素(peptide antibiotics)編碼基因；(e)將(d)所述的肽抗生素編碼基因插入(c)所述的陽性重組子中，使肽抗生素位于承載蛋白的羧基端，其基因與承載蛋白編碼序列融合成為一個融合基因；(f)將(e)所述的構(gòu)建了融合基因的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化微生物宿主細(xì)胞，篩選并鑒定陽性細(xì)胞克��；(g)培養(yǎng)(f)所述的陽性微生物細(xì)胞克隆并進(jìn)行融合蛋白表達(dá)；(h)收集表達(dá)產(chǎn)物，純化肽抗生素。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種利用DNA重組技術(shù)高效表達(dá)生產(chǎn)肽抗生素(Peptideantibiotics)的方法。還提供了一個可高效融合表達(dá)肽抗生素的承載蛋白(Carrierprotein)序列，通過構(gòu)建承載蛋白與肽抗生素的融合蛋白表達(dá)載體，轉(zhuǎn)化微生物宿主細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化細(xì)胞克隆并進(jìn)行融合蛋白表達(dá)，表達(dá)的融合蛋白可占微生物宿主細(xì)胞總蛋白的40～45％。 |
| 國際公布 |
