| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1136317C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2004.01.28 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN99115730.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 1999.03.12 |
| 專利名稱 | 單克隆抗體雙段和單段的制備方法 |
| 主分類號(hào) | C12P21/02 |
| 分類號(hào) | C12P21/02 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 米力;陳志南;馮強(qiáng);余曉玲 |
| 地址 | 710032 陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路17號(hào) |
| 頒證日 | 2004.01.28 |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 單克隆抗體雙段和單段的制備方法，其特征是：?jiǎn)慰寺】贵w腹水，用50％的飽和硫酸胺粗提二次，抗體蛋白沉淀物用0.1M檸檬酸緩沖液(PH3.5)充分溶解后，調(diào)正濃度為10-20mg/ml，再離心去除不溶物；F(ab’)2制備用胃蛋白酶與IgG酶切比例為1∶100，37℃反應(yīng)2-3h，用3M Tris調(diào)正PH7左右，以終止反應(yīng)；Fab用木瓜蛋白酶，酶與IgG的比例1∶100，37℃反應(yīng)1-2h，0.25％(W/V)碘乙酰胺終止反應(yīng)；HPLC疏水液相色譜法純化F(ab’)2，F(xiàn)ab片段抗體，用Phenyl Sepharose High Performance疏水色譜柱(Pharmacia)分二次純化：一次純化A液為1～1.4M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液，B液為0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液；二次純化A液用0.7～1.0M硫酸胺0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液，B液為0.05M PH5.0醋酸鈉緩沖液，線性梯度洗脫時(shí)間30-40分鐘；純化后立即凍干，加10％低分子右旋糖酐做復(fù)性劑。 |
| 摘要 | 單克隆抗體雙段和單段的制備方法。涉及生物技術(shù)工程，其主要技術(shù)路線是：粗提抗體→酶切→二次純化→凍干，制備的F(ab’)2、Fab的純度可大于98％，回收率大于50％，且可有效去除熱原質(zhì)，核酸、病毒等雜質(zhì)，在安全、有效、穩(wěn)定、一致性上，均達(dá)到中國(guó)藥品生物制品鑒定所人用鼠源性單抗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 |
| 國(guó)際公布 |
