| 公開(公告)號 | CN1641025A |
| 公開(公告)日 | 2005.07.20 |
| 申請(專利)號 | CN200410097557.8 |
| 申請日期 | 2004.11.29 |
| 專利名稱 | 真鯛抗菌肽基因和重組酵母表達載體及其制備方法 |
| 主分類號 | C12N15/12 |
| 分類號 | C12N15/12;C12N15/81;C12N15/10;C07K14/46;C12N15/66;C12N15/09;C12P21/02 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國水產(chǎn)科學研究院黃海水產(chǎn)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 陳松林;徐美瑜;隋少飛 |
| 地址 | 266071山東省青島市南京路106號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 青島聯(lián)智專利商標事務(wù)所有限公司 |
| 代理人 | 袁和善 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項 | 一種真鯛抗菌肽基因和重組酵母表達載體及制備方法，其特征在于它的真鯛抗菌肽基因的克隆主要包括cDNA文庫構(gòu)建、EST序列測定和DNA序列分析與比對：cDNA文庫構(gòu)建：用TRIzol試劑盒從真鯛脾臟中提取總RNA，用OligotexTM離心柱試劑盒分離Poly-(A)RNA，用pBluescriptIIXRcDNA文庫試劑盒構(gòu)建cDNA文庫；EST序列測定：用快速微量制備方法制備質(zhì)粒DNA，質(zhì)粒制備在96孔板上完成；用T3定序試劑盒測定cDNA片段的序列，用T3和T7引物從cDNA片段的兩端分別進行測序，從而獲得全長序列；DNA序列分析與比對：在測定EST序列后，用Cross-Match軟件掩蓋載體序列，然后將從cDNA文庫中獲得的序列與美國GENBANK序列數(shù)據(jù)庫中已存的DNA序列進行比對，用PHRAP聚類程序鑒定共同序列和單一序列；用BLASTN和BLASTX程序計算我們獲得的cDNA克隆片段與GENBANK序列數(shù)據(jù)庫中已存的DNA序列的同源性。 |
| 摘要 | 一種真鯛抗菌肽基因和重組酵母表達載體及其制備方法，通過文庫篩選和EST序列分析，克隆出真鯛抗菌肽(hepcidin)基因，將該基因重組到酵母表達載體pPICZαA，構(gòu)建成抗菌肽基因表達質(zhì)粒pPICZ-rsbHEPC1，轉(zhuǎn)化畢赤酵母后，獲得了穩(wěn)定表達真鯛抗菌肽的酵母菌株。細菌生長抑制實驗表明重組抗菌肽對大腸桿菌，綠膿桿菌和嗜水氣單胞菌等4種細菌均具有劑量依存的抑制活性。本發(fā)明首次構(gòu)建了魚類抗菌肽(hepcidin)基因酵母表達質(zhì)粒并研制了重組抗菌肽表達產(chǎn)物，該表達質(zhì)粒在酵母體內(nèi)表達穩(wěn)定，重組抗菌肽分子量小，抑菌活性明顯，適宜用作魚類等水產(chǎn)動物的飼料添加劑。本發(fā)明適用于各種魚類抗菌肽基因克隆和表達載體的構(gòu)建，生產(chǎn)的基因工程魚類抗菌肽可作為飼料添加劑，用于魚類等水產(chǎn)動物的疾病防治。 |
| 國際公布 |
