| 公開(公告)號 | CN1246331C |
| 公開(公告)日 | 2006.03.22 |
| 申請(專利)號 | CN200310106725.0 |
| 申請日期 | 2003.10.29 |
| 專利名稱 | 利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法 |
| 主分類號 | C07K14/56(2006.01)I |
| 分類號 | C07K14/56(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I;A61P31/12(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 天津大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 孫 彥;趙雪雁;張 磊;史清洪;董曉燕;白 姝 |
| 地址 | 300072天津市衛(wèi)津路92號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 天津市學苑有限責任專利代理事務所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項 | 一種利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法，該方法是采用柱內(nèi)裝填辛巴藍修飾的石英核瓊脂糖介質(zhì)的膨脹床色素親和色譜，其過程包括介質(zhì)的修飾、吸附和脫附，其特征在于：介質(zhì)的修飾是以1-3mol/L的氯化鈉溶液配制成含辛巴藍濃度0.35-9g/L和含氫氧化鈉的濃度為3.5-36g/L的溶液，在該溶液中加入等體積的粒徑為80-500μm密度為15-3g/mL的石英核瓊脂糖介質(zhì)，并在40-70℃水浴搖床中反應10h以上，得到辛巴藍修飾的石英核瓊脂糖介質(zhì)；吸附工藝是：采用pH為6.0-8.0的0.002mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液稀釋細胞破碎液，配制成活性值為2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液；將辛巴藍修飾石英核瓊脂糖介質(zhì)裝柱后用pH為6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液平衡，于20-30℃，以流速為80-260cm/h從膨脹床底部通入原料液，上樣量為每升柱體積1-5L原料液，并控制床層膨脹比為5-3.0進行吸附操作；以pH為6.0-8.0的0.001-0.02mol/L的磷酸鈉鹽緩沖液，以80-260cm/h的流速在膨脹床狀態(tài)下清洗1-4個柱體積，包括去除雜蛋白和細胞碎片固形物；在固定床操作狀態(tài)用pH為9-13的0.002-0.03mol/L甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液洗脫目標蛋白，在洗脫過程中，觀察色譜峰值，當色譜峰響應值達到基線位置時洗脫完畢。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種利用膨脹床色素親和色譜純化重組人干擾素α-2b的方法。該方法包括介質(zhì)的制備、吸附和脫附，其特征在于，以粒徑為80-500μm密度為1.15-1.3g/mL的石英核瓊脂糖介質(zhì)，在堿性條件下修飾辛巴藍配基，合成介質(zhì)；采用磷酸鈉鹽緩沖液稀釋細胞破碎液，配制成活性值為2.5×105-2.5×107IU/mL的原料液；并以流速為80-260cm/h從膨脹床底部通入原料液，控制床層膨脹比為1.5-3.0進行吸附操作；用磷酸鈉鹽緩沖液在膨脹床狀態(tài)下清洗雜蛋白；之后在固定床操作狀態(tài)用甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液洗脫目標蛋白。該純化方法大大縮短了分離過程的時間，提高產(chǎn)品活性收率，降低能耗。本發(fā)明在重組人干擾素α-2b的純化過程中具有廣闊的應用前景。 |
| 國際公布 |
