公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1743457A
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公開(kāi)(公告)日
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2006.03.08
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN200410073165.8
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申請(qǐng)日期
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2004.10.11
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌高表達(dá)載體和制備方法
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主分類(lèi)號(hào)
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C12N15/70(2006.01)I
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分類(lèi)號(hào)
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C12N15/70(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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陳蘇民;秦 云;陳南春
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地址
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710049陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路15號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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西安通大專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
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代理人
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孫 楓
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國(guó)省代碼
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陜西;61
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主權(quán)項(xiàng)
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一種人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體,其特征在于:所述的人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體是指用分子克隆技術(shù)將從人體組織cDNA文庫(kù)中擴(kuò)增得到人骨形成蛋白-4成熟肽的cDNA序列,再克隆重組獲得的大腸桿菌表達(dá)載體pDH2-hB4m,該載體能夠在大腸桿菌中高水平表達(dá)出人骨形成蛋白-4成熟肽,載體DNA全長(zhǎng)4,014個(gè)核苷酸對(duì),全部核苷酸序列如下: 1AGATCTCTCTCACCTACCAAACAATGCCCCCCTGCAAAAAATAAATTCATATAAAAAACA TCTAGAGAGAGTGGATGGTTTGTTACGGGGGGACGTTTTTTATTTAAGTATATTTTTTGT 61TACAGATAACCATCTGCGGTGATAAATTATCTCTGGCGGTGTTGACATAAATACCACTGG ATGTCTATTGGTAGACGCCACTATTTAATAGAGACCGCCACAACTGTATTTATGGTGACC 121CGGTGATACTGAGCACATCAGCAGGACGCACTGACCACCATGAAGGTGACGCTCTTAAAA GCCACTATGACTCGTGTAGTCGTCCTGCGTGACTGGTGGTACTTCCACTGCGAGAATTTT 181ATTAAGCCCTGAAGAAGGGCAGCATTCAAAGCAGAAGGCTTTGGGGTGTGTGATACGAAA TAATTCGGGACTTCTTCCCGTCGTAAGTTTCGTCTTCCGAAACCCCACACACTATGCTTT 241CGAAGCATTGGTTAAAAATTAAGGAGAATTCATGAAGCATCACTCACAGCGGGCCAGGAA GCTTCGTAACCAATTTTTAATTCCTCTTAAGTACTTCGTAGTGAGTGTCGCCCGGTCCTT 301GAAGAATAAGAACTGCCGGCGCCACTCGCTCTATGTGGACTTCAGCGATGTGGGCTGGAA CTTCTTATTCTTGACGGCCGCGGTGAGCGAGATACACCTGAAGTCGCTACACCCGACCTT 361TGACTGGATTGTGGCCCCACCAGGCTACCAGGCCTTCTACTGCCATGGGGACTGCCCCTT ACTGACCTAACACCGGGGTGGTCCGATGGTCCGGAAGATGACGGTACCCCTGACGGGGAA 421TCCACTGGCTGACCACCTCAACTCAACCAACCATGCCATTGTGCAGACCCTGGTCAATTC AGGTGACCGACTGGTGGAGTTGAGTTGGTTGGTACGGTAACACGTCTGGGACCAGTTAAG 481TGTCAATTCCAGTATCCCCAAAGCCTGTTGTGTGCCCACTGAACTGAGTGCCATCTCCAT ACAGTTAAGGTCATAGGGGTTTCGGACAACACACGGGTGACTTGACTCACGGTAGAGGTA 541GCTGTACCTGGATGAGTATGATAAGGTGGTACTGAAAAATTATCAGGAGATGGTAGTAGA CGACATGGACCTACTCATACTATTCCACCATGACTTTTTAATAGTCCTCTACCATCATCT 601GGGATGTGGGTGCCGCTGATAATCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTTCTGTTTTG CCCTACACCCACGGCGACTATTAGATCTCAGCTGGACGTCCGTACGTTCGAAGACAAAAC 661GCGGATGAGAGAAGATTTTCAGCCTGATACAGCTTAAATCAGAACGCAGAAGCGGTCTGA CGCCTACTCTCTTCTAAAAGTCGGACTATGTCGAATTTAGTCTTGCGTCTTCGCCAGACT 721TAAAACAGAATTTGCCTCCCGGCAGTAGCGCGGTGGTCCCACCTGACCCCATGCCGAACT ATTTTGTCTTAAACGGAGGGCCGTCATCGCGCCACCAGGGTGGACTGGGGTACGGCTTGA 781CAGAAGTGAAACGCCGTAGCGCCGATGGTAGTGTGGGGTCTCCCCATGCGAGAGTAGCCA GTCTTCACTTTGCGGCATCGCGGCTACCATCACACCCCAGAGGGGTACGCTCTCATCGGT 841ACTGCCAGGCATCAAATAAAACGAAAGGCTCAGTCGAAAGACTGGGCCTTTCGTTTTATC TGACGGTCCGTAGTTTATTTTGCTTTCCGAGTCAGCTTTCTGACCCGGAAAGCAAAATAG 901TGTTGTTTGTCGGTGAACGCTCTCCTGAGTAGGACAAATCCGCCGGGAGCGGATTTGAAC ACAACAAACAGCCACTTGCGAGAGGACTCATCCTGTTTAGGCGGCCCTCGCCTAAACTTG 961GTTGCGAAGCAACGGCCCGGAGGGTGGCGGGCAGGACGCCCGCCATAAACTGCCAGGCAT CAACGCTTCGTTGCCGGGCCTCCCACCGCCCGTCCTGCGGGCGGTATTTGACGGTCCGTA 1021CAAATTAAGCAGAAGGCCATCCTGACGGATGGCCTTTTTGCGTTTCTACAAACTCTTTGT GTTTAATTCGTCTTCCGGTAGGACTGCCTACCGGAAAAACGCAAAGATGTTTGAGAAACA 1081TTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATG AATAAAAAGATTTATGTAAGTTTATACATAGGCGAGTACTCTGTTATTGGGACTATTTAC 1141CTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATT GAAGTTATTATAACTTTTTCCTTCTCATACTCATAAGTTGTAAAGGCACAGCGGGAATAA 1201CCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTA GGGAAAAAACGCCGTAAAACGGAAGGACAAAAACGAGTGGGTCTTTGCGACCACTTTCAT 1261AAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGC TTTCTACGACTTCTAGTCAACCCACGTGCTCACCCAATGTAGCTTGACCTAGAGTTGTCG 1321GGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAA CCATTCTAGGAACTCTCAAAAGCGGGGCTTCTTGCAAAAGGTTACTACTCGTGAAAATTT 1381GTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGC CAAGACGATACACCGCGCCATAATAGGGCATAACTGCGGCCCGTTCTCGTTGAGCCAGCG 1441CGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTT GCGTATGTGATAAGAGTCTTACTGAACCAACTCATGAGTGGTCAGTGTCTTTTCGTAGAA 1501ACGGATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACT TGCCTACCGTACTGTCATTCTCTTAATACGTCACGACGGTATTGGTACTCACTATTGTGA 1561GCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCAC CGCCGGTTGAATGAAGACTGTTGCTAGCCTCCTGGCTTCCTCGATTGGCGAAAAAACGTG 1621AACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATA TTGTACCCCCTAGTACATTGAGCGGAACTAGCAACCCTTGGCCTCGACTTACTTCGG
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摘要
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本發(fā)明涉及人骨形成蛋白-4成熟肽的大腸桿菌表達(dá)載體及其所表達(dá)的人骨形成蛋白4成熟肽的制備方法。所述的載體是指用分子克隆技術(shù)重組獲得的大腸桿菌表達(dá)載體pDH2-hB4m,載體全長(zhǎng)4,014個(gè)核苷酸對(duì);所述利用表達(dá)載體pDH2-hB4m制備具有生物學(xué)活性人骨形成蛋白-4成熟肽的方法,包括宿主菌轉(zhuǎn)化表達(dá)、培養(yǎng)、純化、復(fù)性、活性鑒定步驟。本發(fā)明所提供的大腸桿菌高表達(dá)載體和用該載體轉(zhuǎn)化宿主菌表達(dá)人骨形成蛋白-4成熟肽的制備方法,可以作為新的基因工程產(chǎn)品及其方法推向臨床治療、診斷和科學(xué)研究應(yīng)用,并推向市場(chǎng)。
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國(guó)際公布
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