香連丸—黃連的測定—薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定香連丸中黃連的含量。

本方法適用于香連丸中黃連含量的測定。

供試品于索氏提取器中經(jīng)鹽酸-甲醇混合溶液適量加熱回流提取，過濾，濾液加甲醇定量稀釋，制成供試液，鹽酸小檗堿對照品加甲醇溶解并定量稀釋。點樣、展開，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)為展開劑，在另一槽中加入濃氨試液，欲飽和15分鐘，展開，展距10cm，取出，涼干，用薄層掃描儀進(jìn)行熒光掃描，于激發(fā)波長λ=366nm，測得供試品熒光強度的積分值與對照品熒光強度的積分值，計算其含量。

1 .甲醇

2 .甲苯

3 .乙酸乙酯

4 .異丙醇

5. 濃氨試液

1 儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器

應(yīng)能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點樣器材。

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部雙槽，蓋子須密閉。

2 材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.02mg溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品，研碎，精密稱取約0.2g，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100)適量，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100)混合液適量，加熱回流提取至提取液無色，提取液移至100mL量瓶中，用少量鹽酸-甲醇（1：100)混合液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加混合液至刻度，精密量取10mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對該體積移液管的精度要求。

1. 薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2. 點樣

精密吸取供試品溶液 2μL、對照品溶液 1μL與 4μL，分別交叉點于同一硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴(kuò)散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3, 展開

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)，展開，取出，晾干。

4. 含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進(jìn)行掃描，波長：λs=530nm，λ_R=680nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編、化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部p.521。