銀杏葉片－總黃酮醇苷的測(cè)定－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測(cè)定銀杏葉片中總黃酮醇苷的含量。

本方法適用于中成藥銀杏葉片。

本品粉末加甲醇超聲處理，放冷，補(bǔ)重，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液加甲醇、25%鹽酸溶液加熱回流，冷卻，用甲醇定容，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測(cè)器，于波長(zhǎng)360nm處檢測(cè)槲皮素、山柰素、異鼠李素的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 甲醇

2. 甲醇-25%鹽酸溶液（4：1)混合溶液

3. 0.4%磷酸溶液

1 儀器

1.1高效液相色譜儀

1.2色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數(shù)按槲皮素峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

1.3 紫外吸收檢測(cè)器

2色譜條件

2.1流動(dòng)相：甲醇 0.4%磷酸溶液＝50 50

2.2檢測(cè)波長(zhǎng)：360nm

2.3柱溫：室溫

1. 稱取供試品

取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約相當(dāng)于總黃酮醇苷19.2mg的粉末，精密稱定，為供試品。

2. 對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取槲皮素對(duì)照品、山柰素對(duì)照品、異鼠李素對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含30mg、30mg、20mg的混合溶液。或取已標(biāo)示槲皮素、山柰素、異鼠李素含量的銀杏葉對(duì)照提取物35mg，精密稱定，加甲醇-25%鹽酸溶液（4：1)混合溶液25mL，照供試品溶液的制備方法，自‘置水浴中加熱回流30分鐘’起，同法制成對(duì)照提取物溶液。

3. 供試品溶液的制備

取本品10片，除去包衣，精密稱定，研細(xì)，取約相當(dāng)于總黃酮醇苷19.2mg的粉末，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率33kHz)20分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10 mL，置100 mL錐形瓶中，加甲醇10 mL、25%鹽酸溶液5 mL，搖勻，置水浴中加熱回流30分鐘，迅速冷卻至室溫，轉(zhuǎn)移至50 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對(duì)照品溶液（或?qū)φ仗崛∥锶芤?和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測(cè)器于波長(zhǎng)360nm處測(cè)定槲皮素（C₁₅H₁₀O₇)、山柰素（C₁₅H₁₀O₆)和異鼠李素（C₁₆H₁₂O₇)的峰面積，計(jì)算出其含量。