亞葉酸鈣片－亞葉酸鈣－高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定亞葉酸鈣片中亞葉酸鈣的含量。

本方法適用于亞葉酸鈣片。

供試品加水溶解并定量稀釋，進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長280nm處檢測亞葉酸鈣的峰面積，計算出其含量。

1.甲醇

2.含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液

取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調節(jié)pH值至7.8。

1.儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，理論塔板數按亞葉酸鈣峰計算應不低于1000。

1.3 紫外吸收檢測器

2.色譜條件

2.1 流動相：甲醇 含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液=22 78

2.3 柱溫：40℃

1.含0.1%四丁基氫氧化銨的磷酸氫二鈉緩沖液

取10%四丁基氫氧化銨水溶液8.0mL和磷酸氫二鈉2.2g加水溶解使成780mL，并用磷酸調節(jié)pH值至7.8。

2. 對照品溶液的制備

精密稱取亞葉酸鈣對照品適量，加水溶解并定量稀釋制成每1mL中約含0.1mg的溶液，即為對照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

取供試品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于亞葉酸20mg)，置200mL量瓶中，加水適量，振搖，使亞葉酸鈣溶解，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，即為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10mL，注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器于波長280nm處測定亞葉酸鈣（C₂₀H₂₁CaN₇O₇·5H₂O)的峰面積，計算出其含量，并將結果乘以0.9256。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編，化學工業(yè)出版社，2005版，二部，p.187。