突發(fā)性細(xì)菌性食物中毒事件時(shí)有發(fā)生，如何快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)病原微生物致關(guān)重要。開(kāi)展模擬食物中毒的室間質(zhì)控工作，既鍛煉了各級(jí)衛(wèi)生檢驗(yàn)工作者的快速反應(yīng)能力，又提高了衛(wèi)生檢驗(yàn)的質(zhì)量，可保證結(jié)果的快速、準(zhǔn)確和科學(xué)。現(xiàn)將本次質(zhì)控考核檢驗(yàn)及相關(guān)問(wèn)題報(bào)告如下。
1.材料與醫(yī).學(xué)全在線方法
1.1 材料
1.1.1 質(zhì)控考核盲樣機(jī)井水樣1份(已染菌)，要求做細(xì)菌分離鑒定。
附流行病學(xué)調(diào)查資料：某月下旬，某建筑工地陸續(xù)出現(xiàn)腹瀉病人，其主要癥狀為頭痛、發(fā)燒(38～40℃)、嘔吐、腹痛、腹瀉(多為黃綠色水樣便)，嚴(yán)重者有粘血便�，F(xiàn)場(chǎng)調(diào)查，建筑工地使用自備機(jī)井水。曾有一急性胃腸炎病人，其沾有嘔吐物和糞便的衣物用具曾在井邊清洗。其后一場(chǎng)暴雨，3天后工地出現(xiàn)首例病人。
1.1.2 試劑 培養(yǎng)基：由杭州天和微生物試劑有限公司和杭州微生物試劑廠生產(chǎn)。微量生化鑒定管：由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。診斷血清：由蘭州生物制品研究所生產(chǎn)。API20E生化鑒定基條：由法國(guó)梅里埃公司生產(chǎn)。上述各種試劑均在有效期內(nèi)。
1．2 方法按照中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 4789-2003《食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法微生物學(xué)部分》和《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第2版微生物學(xué)檢驗(yàn)進(jìn)行，同時(shí)作室內(nèi)質(zhì)量控制，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。
2..結(jié)果
2.1 病例討論根據(jù)流調(diào)資料提供的病史、臨床癥狀、糞便顏色、發(fā)病時(shí)間等，可排除霍亂弧菌、球菌和病毒污染機(jī)井水的可能。
2.2 增菌培養(yǎng)根據(jù)病例討論，再結(jié)合水樣沉淀涂片G染色為G-桿菌，故選擇1% NaCl肉湯、GN、SF、氯化鈉、結(jié)晶紫4種增菌培養(yǎng)基增菌，經(jīng)(36±1)℃、22小時(shí)培養(yǎng)后觀察，結(jié)果見(jiàn)表l。
2.3 分離培養(yǎng) 將增菌后1％NaC1肉湯轉(zhuǎn)種普瓊、血平板、EMB、MAC、HE、KS、TCBS各種培養(yǎng)基，經(jīng)(36±1)℃ ．22 h培養(yǎng)后觀察菌落生長(zhǎng)情況，結(jié)果見(jiàn)表2。
2.4 形態(tài)學(xué)檢查挑取各平板上不同菌落特征的單個(gè)菌落分別涂片作革蘭染色，鏡檢可見(jiàn)兩種形態(tài)，表2中菌① 形態(tài)為：G-短桿菌，其兩端鈍圓；菌②形態(tài)為：G-直桿菌。
2.5 初步生化反應(yīng)
2.5.1 氧化酶試驗(yàn)采用紙片法，菌① 和菌②氧化酶均為陰性(紙片顯淡黃色)
2.5.2 接種三糖鐵(TSI)和動(dòng)力靛基質(zhì)尿素(MlU)培養(yǎng)基將純培養(yǎng)平板上菌①和菌②分別接種TSI、MIU培養(yǎng)基，經(jīng)(36±1)℃、22小時(shí)培養(yǎng)后觀察，結(jié)果見(jiàn)表3。從初步生化反應(yīng)可知：菌①疑為埃希菌屬或者志賀菌屬細(xì)菌；菌②疑為枸櫞酸桿菌屬或沙門菌屬細(xì)菌。
2.6 進(jìn)一步鑒定
2.6.1 血清學(xué)試驗(yàn) 菌①僅與腸侵襲性大腸埃希菌(EIEC)中OK多價(jià)血清發(fā)生強(qiáng)凝集(3+)，進(jìn)一步與其單價(jià)血清028ac∶K73發(fā)生強(qiáng)凝集(3+)；菌②不與沙門菌A-F群O多價(jià)血清發(fā)生凝集反應(yīng)。
2.6.2 鑒別試驗(yàn)
2.6.2.1 枸櫞酸桿菌屬與沙門菌屬的鑒別試驗(yàn) 菌②作補(bǔ)充生化試驗(yàn)，結(jié)果分別為β-半乳糖苷酶(+)，賴氨酸脫羧酶(-)、丙二酸鹽(-)，明膠液化(-)，綜合考慮菌②為枸櫞酸桿菌屬細(xì)菌。枸櫞酸桿菌屬種的鑒別菌②作生化試驗(yàn)：側(cè)金盞花醇(-)，并結(jié)合丙二酸鹽，H2S，靛基質(zhì)試驗(yàn)結(jié)果，可判定菌②為弗勞地氏枸櫞酸桿菌。
2.7 系統(tǒng)生化反應(yīng)制備一定濃度菌①和菌② 的生理鹽水菌懸液，分別接種AP120E生化鑒定基條，經(jīng)(36±1)℃、72小時(shí)培養(yǎng)。連續(xù)觀察結(jié)果獲得兩菌的數(shù)碼。查AP120E生化圖譜索引手冊(cè)可知：菌①：數(shù)碼為1144552；菌名為大腸埃希氏菌1型；％id=89.9。T=0.93。菌②：數(shù)碼為1744552；菌名為弗勞地氏枸櫞酸桿菌；％id=98.8，T=0.73。
2.8 最終鑒定結(jié)果機(jī)井水樣中已污染兩種細(xì)菌。分別為腸桿菌科埃希菌屬中EIEC的028ac∶K73血清型和枸櫞酸桿菌屬的弗勞地枸櫞酸桿菌。
3.討論
細(xì)菌性食物中毒是常見(jiàn)的食物中毒類型，我國(guó)每年發(fā)生的此類中毒事件占食物中毒事件總數(shù)的30%～90%。人數(shù)占食物中毒總?cè)藬?shù)的60%～90%。細(xì)菌性食物中毒具有全年易發(fā)性和發(fā)病普遍性的特點(diǎn)，對(duì)人群危害性大。加強(qiáng)對(duì)此類突發(fā)事件的應(yīng)急處理，提高應(yīng)對(duì)能力和病原菌分離鑒定水平是本次室間質(zhì)控考核的目的。由于盲樣基質(zhì)為井水，營(yíng)養(yǎng)條件較差，且樣品中細(xì)菌量少，實(shí)驗(yàn)室收到樣品后應(yīng)及時(shí)進(jìn)行增菌培養(yǎng)，使其恢復(fù)生物活性，然后分離病原菌作進(jìn)一步鑒定。樣品的及時(shí)處理。同時(shí)反映了衛(wèi)生檢驗(yàn)工作者的應(yīng)急反應(yīng)能力，為日常工作中快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)食物中毒病原菌打下基礎(chǔ)。模擬食物中毒事件進(jìn)行室間質(zhì)控考核尚屬首次。作者認(rèn)為衛(wèi)生檢驗(yàn)工作者除了具備過(guò)硬的微生物檢驗(yàn)操作技能外，還必須全面掌握食品衛(wèi)生檢驗(yàn)及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的相關(guān)知識(shí)。從分析食物中毒的流行特征和病人的臨床病史、癥狀和體征入手，全面考慮污染樣品中可能存在的病原菌，合理選擇增菌和分離培養(yǎng)基，力求不漏檢，提高檢出率，并把這一思路貫穿于常規(guī)工作中。無(wú)論是室間質(zhì)控考核，還是常規(guī)樣品檢測(cè)，都必須有室內(nèi)質(zhì)量控制的保證。室內(nèi)質(zhì)量控制應(yīng)有合適的質(zhì)控頻率；應(yīng)與常規(guī)工作一起進(jìn)行，不能為質(zhì)控菌株設(shè)計(jì)單獨(dú)的操作程序。更不能固定專人操作；當(dāng)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株的內(nèi)在敏感性發(fā)生改變時(shí)要及時(shí)更換新的菌種。只有這樣，才能保證樣品處理、細(xì)菌染色、培養(yǎng)基和試劑使用、培養(yǎng)條件選擇等準(zhǔn)確可靠，最終確保樣品檢測(cè)結(jié)果的正確無(wú)誤。本次質(zhì)控考核樣品無(wú)背景干擾，而常規(guī)工作中樣本含雜菌較多。這在一定程度上增加了檢測(cè)的難度。根據(jù)各類食物中毒的流行特征與病人的臨床特點(diǎn)，有針對(duì)性地采集標(biāo)本，首先直接涂片染色鏡檢，篩選出優(yōu)勢(shì)菌和非優(yōu)勢(shì)菌分別作進(jìn)一步鑒定，避免分離培養(yǎng)鑒定過(guò)程中遺漏病原菌。影響食物中毒樣本的檢出率。同時(shí)。應(yīng)注意非典型菌株的存在，本次質(zhì)控樣品中菌①即為不產(chǎn)氣和乳糖遲緩發(fā)酵的埃希氏菌屬非典型菌株。
室間質(zhì)控的目的在于鍛煉衛(wèi)生檢驗(yàn)工作者。保證常規(guī)工作的快速、準(zhǔn)確，尤其是對(duì)于食物中毒事件，能盡快為衛(wèi)生監(jiān)督執(zhí)法者提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，最終確保食品衛(wèi)生的安全性。
