乙型肝炎病毒(hepatitis B virus ,HBV) 感染后血清標(biāo)志物的模式表現(xiàn)呈多樣化。本科血清免疫室2004 年共檢測到42例少見模式,占陽性總例數(shù)的0.6 %(42/6744) ,其中HBsAg(-)、抗-HBs(-)、HBeAg (+)、抗-HBe (-) 、抗-HBc (+) 者33例, HBsAg(十)、抗-HBs (-)、HBeAg(+)、抗-HBe(+)、抗-HBc (+) 者9例。更換不同廠家試劑檢測得到相同結(jié)果。HBV DNA 采用PCR檢測42例均呈陽性�，F(xiàn)分別對(duì)上述兩種少見模式的HBsAg (-)(P/N 0.1～2.0) 和抗-HBe(+) (抑制率0.6～0.8)作進(jìn)一步檢測分析。
資料與執(zhí)業(yè)醫(yī)師網(wǎng)方法
1.材料:42例樣本采自本院門診及住院患者,男30例,女12例,年齡16～65歲。經(jīng)復(fù)檢證實(shí)后,取血清置加蓋試管內(nèi)-20℃保存?zhèn)錂z。
2. 試劑:乙型肝炎“兩對(duì)半”檢測用上�？迫A公司試劑,復(fù)檢用深圳月亮灣試劑,美國產(chǎn)MR500 酶標(biāo)儀。HBV DNA2PCR 檢測用杭州高樂公司試劑,美國產(chǎn)DE9600基因擴(kuò)增儀。
結(jié) 果
1. 33 例HBsAg(-) 樣本用生理鹽水按1∶8、16、⋯⋯128等比稀釋,分別檢測各管HBsAg ,其中陽性11例(各稀釋度最大P/N 3.7～23.6);其余22例陰性者用酸解離HBsAg免疫復(fù)合物法處理, 檢測得到HBsAg陽性19例( P/N 2.6～25.8), 22例中3 例HBsAg 陰性者因樣本已用盡, 無法進(jìn)一步檢測。
2. 9 例抗-HBe (+)的樣本改用二步法檢測:孔底加50μl樣本及中和HBeAg液50μl混勻,置37℃水浴30 min。洗板3次,扣干。再加辣根過氧化物酶( horseradish peroxidase,HRP)-抗-HBe 50μl ,37℃水浴30 min ,洗板扣干。接下來按說明書操作。結(jié)果抗-HBe 9 例全部陰性。
討 論
1. HBV 感染后,血清中HBeAg 在HBsAg之后出現(xiàn)。偶爾出現(xiàn)HBsAg(-)、HBeAg (+) 情況,首先考慮有少數(shù)病例會(huì)出現(xiàn)窗口期,其血液中同時(shí)存在HBsAg 和抗-HBs ,若濃度正好合適全部形成免疫復(fù)合物,導(dǎo)致游離的HBsAg 消失或濃度降低, HBsAg和抗-HBs 都不能被檢出。其次, 部分病例HBsAg濃度過高發(fā)生大劑量前帶現(xiàn)象,致使檢測呈假陰性,適當(dāng)稀釋樣本即可避免。再者,由于HBV基因組具有高度變異性,S區(qū)基因突變可致HBsAg氨基酸序列改變而無法檢出。X區(qū)突變則抑制X蛋白的轉(zhuǎn)錄活性及激活HBV增強(qiáng)子的作用,使病毒蛋白表達(dá)減少,造成血清中各指標(biāo)滴度下降,甚至不能檢出。
2. 目前市售ELISA 試劑多為一步法,其弊端多見報(bào)道�？�-HBe檢測時(shí),若血清中含有濃度較高的HBeAg ,相當(dāng)于加入了過量的中和抗原,同步加入定量的HRP-抗-HBe ,會(huì)形成大量游離的HBeAg-HRP2抗-HBe, 而與固相化的抗-HBe-HBeAg結(jié)合,形成抗-HBe-HBeAg-HRP-抗-HBe的量減少,導(dǎo)致假陽性。改用兩步法,在固相化抗-HBe-HBeAg形成后再加入HRP-抗-HBe試劑,無游離的HBeAg-HRP-抗-HBe形成,可避免和減少假陽性的發(fā)生。
