免疫膠體金銀染色和其它免疫細(xì)胞化學(xué)方法一樣，要想得到好的染色效果，關(guān)鍵取決于標(biāo)本處理是否合適，只有使抗原性及組織結(jié)構(gòu)保存的好，才能使以后的染色成功成為可能，其次要用高特異性和高效價(jià)的一抗，選擇合適的稀釋度。由于免疫組化方法廣泛應(yīng)用于不同的生物學(xué)科，所要檢出的抗原種類繁多，性質(zhì)也各不相同。因此，不可能有一種適用于所有抗原的固定劑，而是根據(jù)不同的抗原性質(zhì)區(qū)別對(duì)待。根據(jù)我們使用的固定劑介紹如下，供參考。
一、固定劑的選擇及固定時(shí)間（詳見表5-9)
（1)Karovsky＇s 液pH7.3。
（2)PAP液（Periodate—lysine – paraformaldehyde fixative)
配制見附錄一。
表5-9 各種抗原固定劑的選擇及固定時(shí)間
| 待檢抗原 | 固定劑的種類 | 固定時(shí)間 |
| 蛋白質(zhì) | ||
| 酶 | 冰凍切片不固定，或用95%乙醇，B5固定液 | 10 min |
| 激素 | 冰凍切片，涂片，印片，不固定或丙酮，甲 | 10 min |
| 醇，乙醇，PEG固定，B5固定液固定 | 4℃30 min | |
| 免疫球蛋白 | 中性福爾馬林，四氯化碳（1%甲醛) | 30 min |
| 白蛋白 | 95%乙醇含1～5%冰醋酸 | 30 min |
| 纖維蛋白元 | 同上 | 30 min |
| 病毒 | 丙酮，100%乙醇，甲醇，乙醚 | 30 min |
| 糖蛋白 | PLP，丙酮 | 30 min |
| 脂質(zhì)Forssman | 中性福爾馬林 | 20 min |
| 抗原 | 2.5%硫代硫酸鈉，冰凍切片不固定 | 20 min |
| 免疫電鏡 | PLP，戊二醛，戊二醛—多聚甲醛（Kacnovsky’s 液pH7.3)PEG、ECD-G等 | 30min |
二、切片的處理與粘附。
免疫組化染色過程較長(zhǎng)，洗的次數(shù)很多，而且均在振蕩洗滌，抗原片附貼不緊，往往在最后的時(shí)刻，還沒有等顯色就會(huì)脫落導(dǎo)致前功盡棄，這個(gè)環(huán)節(jié) 雖小卻會(huì)影響大局，因此，為了保證切片染色成功必須把切片處理好，解除掉片的后顧之憂（方法見第一章 )。
