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您現在的位置: 醫(yī)學全在線 > 理論教學 > 基礎學科 > 免疫細胞與核酸分子雜交 > 正文:放射免疫分析法的建立
    

放射免疫分析法的建立

 

 。ǘ)放射免疫分析中造成測量誤差的因素

  誤差包括系統(tǒng)誤差和隨機誤差。系統(tǒng)誤差發(fā)生在測量過程中由于儀器不準、試劑不純、標準品不穩(wěn)定等原因,使測定結果呈傾向性偏大或偏小,這種誤差應力求避免。隨機誤差是測量過程中各種偶然因素造成的,沒有固定的傾向性,這類誤差是不可避免的,必要時做統(tǒng)計學處理。

  造成誤差的可能來源有以下幾個方面:

  1.各種儀器:設備的準確性、穩(wěn)定性、效率以及被污染等情況帶來的誤差。如:①由于放射性測量儀器的穩(wěn)定性、效率、樣品試管的材料和均勻性及被測物的放射性強度等原因。②由于樣品的自吸收,本底校正,測定時間,可能的污染等原因。③在試驗室中所有的移液管、微量取樣器以及天平的刻度、校準和使用方法等原因。④由于反應試管、移液管以及測定用試管等表面清潔度和所引起的不同吸附等原因都可以對測定結果帶來誤差。

  2.試劑的純度、質量和穩(wěn)定性的影響也是造成誤差的重要因素。如標記抗原的比度、純度,輻射自分解,抗體的穩(wěn)定性,分離劑、阻斷劑及緩沖液等試劑的純度等。

  3.在放射免疫分析中一些基本操作,如取樣、提取、沉淀、分離以及保溫條件不適當等造成的誤差。由于工作人員熟練程度不同也常常帶來誤差,如操作移液管垂直程度、下流速度、吹氣與不吹氣等。工作人員草率、不按規(guī)程操作等也都可以造成誤差。

  4.樣品誤差。樣品的收集方法、貯存溫度、放置條件,微量樣品取樣的準確度,樣品可能造成的污染以及樣品的變性(如免疫反應活性的降低、蛋白質的變性等)也都能造成測量的誤差。

  5.提取及層析分離過程中的丟失。

 。ㄈ)放射免疫分析中測量誤差的控制

  1.選擇準確性高的方法:對各種方法進行比較,淘汰粗糙及難以重復的方法。

  2.建立方法對比。用相同的測量方法和不同的測量方法在同一實驗室和不同實驗室,在同一地區(qū)和不同地區(qū),在同一時間和不同時間,對同一樣品進行對比,檢查產生誤差的原因。

  3.建立各種類型的標準。對標準品應規(guī)定純度及制備方法,使用年限及貯存條件。

  4.建立操作規(guī)程,按章 操作。對使用的試劑、儀器設備要經常檢查其有效性,更換試劑時應進行必要的鑒定,必要時對測定方法要做重復性試驗和回收試驗。

  5.建立可靠的檢查制度。經常對測定結果進行核查,利用控制血清、標準血清檢查每批結果的準確性。

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