放射免疫分析法的建立

　�。ǘ�)順序飽和加樣程序

　　1．基本原理先將標(biāo)準(zhǔn)物或血樣品與抗血清混勻，免疫反應(yīng)6～24h，使抗原與抗體充分結(jié)合，甚至達(dá)到平衡，然后再加入標(biāo)記抗原，與抗體反應(yīng)12～24h，最后分離B與F，這稱為順序飽和分析法。

　　應(yīng)用順序飽和加樣，可以提高測定方法的靈敏度。Utiger在做人促甲狀腺激素（TSH)放射免疫分析時(shí)，將標(biāo)記物延至第2天加入，發(fā)現(xiàn)其靈敏度增加兩倍。如果縮短最后的溫育時(shí)間，仍可取得滿意的結(jié)果。所以一般認(rèn)為，在順序飽和加樣中，第1次溫育時(shí)間可以長，而第2次溫育時(shí)間要短，這樣可以提高靈敏度。但也有相反的意見，認(rèn)為順序飽和加樣，是使用過量抗體，會(huì)使靈敏度受到一定影響。如果使用抗體不過量，溫育時(shí)間縮短，在抗原和抗體結(jié)合未達(dá)到平衡飽和時(shí)就加入標(biāo)記物，這樣既不影響加靈敏度，反而比較穩(wěn)定，甚至可提高靈敏度。

　　2．加樣程序　以人血漿精氨酸加壓素RIA測定程序?yàn)槔�（直接測定)。

　�。�1)加樣（單位μl；總反應(yīng)體積600μl)

　　（2)孵育：4^℃，24h。

　　（3)分離B與F。

　　無肽血漿，用于血漿的直接測定。其制備方法為：在電磁攪拌下，抽取2%加膜活性炭溶液5ml，共兩管，離心、去上清。血漿5ml，倒入上述活性炭管中，加蓋，充分振蕩10min，離心，上清倒入上述另一活性炭管中，振蕩10min，再離心，取上清，即無肽血漿。血漿中的生物活性物質(zhì)被活性炭吸附而去除。

　�。ㄈ�)計(jì)數(shù)、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線與測定樣品含量

　　以活性炭分離B與F，沉淀計(jì)數(shù)是F的cpm。T—F—NSB，得B的cpm數(shù)。

　　計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)管與樣品管結(jié)合（B)的cpm數(shù)及與零標(biāo)準(zhǔn)管結(jié)合（B₀)的比（B/B₀×100%)。

　　用半對數(shù)紙，以標(biāo)準(zhǔn)管的B/B₀為縱座標(biāo)，以各標(biāo)準(zhǔn)管含量為橫座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　根據(jù)樣品的結(jié)合率（B/B₀×100%)，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中找出被測樣品抗原的含量，再換算成每毫升血漿含某抗原的量，或每毫克（組織濕重)含某抗原的量。

　　三、放射免疫分析的質(zhì)量控制

　　（一)質(zhì)量控制的目的和內(nèi)容

　　放射免疫分析的質(zhì)量控制實(shí)際上就是控制測定誤差，監(jiān)督測定結(jié)果。它包括兩方面的內(nèi)容：一方面對測定結(jié)果做精確分析；另一方面鑒定常規(guī)測定方法，對那些測定結(jié)果不好的方法加以改進(jìn)，并建立新的測定方法。質(zhì)量控制分四個(gè)方面：

　　1．在一個(gè)測定方法內(nèi)產(chǎn)生的誤差。

　　2．在同一實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不同方法之間產(chǎn)生的誤差。

　　這兩種情況屬于內(nèi)部質(zhì)量控制。

　　3．用同一測定方法，在各實(shí)驗(yàn)室之間產(chǎn)生的誤差。

　　4．采用不同方法，在各實(shí)驗(yàn)室之間產(chǎn)生的誤差。

　　后兩種情況屬于外部質(zhì)量控制。

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