四、結(jié)果的可比性
1．陽(yáng)性結(jié)果的判斷要正確判斷陽(yáng)懷結(jié)果，必須掌握研究對(duì)象的組織學(xué)和病理學(xué)知識(shí)及光鏡下的形態(tài)特點(diǎn)。如研究胃粘膜中抗體產(chǎn)生細(xì)胞應(yīng)當(dāng)掌握在HE染色時(shí)的車輪狀核位于胞漿一側(cè)，胞漿特別豐富，染色時(shí)僅胞漿著色而核不著色等特點(diǎn)。同時(shí)應(yīng)了解所研究的抗原在組織中的大致定位及分布規(guī)律。如分泌5-羥色胺的內(nèi)分泌細(xì)胞多位于固有層間質(zhì)內(nèi)，VIP和SP分布在固有層神經(jīng)末梢及粘膜下層的神經(jīng)元，胃泌素細(xì)胞分布胃腸腺體細(xì)胞之間。CEA多分布在腺癌細(xì)胞，如果在固有層內(nèi)出現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞，要謹(jǐn)慎對(duì)待，必須排除污染、內(nèi)源酶或自發(fā)熒光，同時(shí)與連續(xù)切片的HE染色切片對(duì)比觀察才能作出判斷。
2．陽(yáng)性結(jié)果的定量分析免疫細(xì)胞化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色受到的影響因素較多，最好在相同組織加工方面、統(tǒng)一批號(hào)抗血清和標(biāo)記抗體、統(tǒng)一染色技術(shù)和結(jié)果判定方法，同時(shí)對(duì)病態(tài)和正常組織進(jìn)行對(duì)照觀察才能增加可比性。用免疫組織化學(xué)進(jìn)行抗原定量分析時(shí)，可根據(jù)著色程度，選用某一基點(diǎn)為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行半定量計(jì)數(shù)，但容易受主觀因素的影響。近年來(lái)，數(shù)字減影技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了定量研究的準(zhǔn)確性。對(duì)陽(yáng)性細(xì)胞的計(jì)數(shù)，多采取以下幾種方法：
（1)直接計(jì)數(shù)法：以10～20個(gè)隨意選擇的高倍視野直接進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)，或計(jì)算100～200個(gè)總細(xì)胞中陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量。由于陽(yáng)性細(xì)胞分布的不均勻性，可能存在一定誤差。
�。�2)體積計(jì)數(shù)法：測(cè)定單位面積內(nèi)的細(xì)胞數(shù)，再算出每立方毫米體積內(nèi)陽(yáng)性細(xì)胞總數(shù)。一般組織切片只有5～7μm厚，與1mm厚度組織切片的細(xì)胞密度不可能完全一致。
�。�3)細(xì)胞密度計(jì)數(shù)法：即計(jì)算單位粘膜面積的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。有人提出以0.5mm寬，粘膜切面會(huì)層（約0.6mm)作為一個(gè)單位。因內(nèi)窺鏡取材時(shí)，組織塊不規(guī)則，顯微鏡下要具體選擇有一定困難，。我們用改良的Dellesses公式進(jìn)行計(jì)算比較方便。原公式NV=N（P∑r2)×109，NV代表每立方毫米體積細(xì)胞數(shù)；N代表細(xì)胞總數(shù)，r為測(cè)微器小方格邊長(zhǎng)（μm)；∑為切片厚度（μm)；P為小方格數(shù)。我們只計(jì)算每平方毫米面積細(xì)胞數(shù)，即D=N/（P∑r2)（r單位為mm)。方和邊長(zhǎng)為0.5mm的測(cè)微器放在目鏡下，物鏡放大4倍，即用測(cè)微器去量放大4倍的物體，測(cè)出的邊長(zhǎng)必須縮小4倍才是物體的真正面積，已知r為0.5mm，將上述數(shù)據(jù)代入公式，得D=N（r/4)2=16N/(Pr2)=16N/(P(0.5)2)=64N/P。只要計(jì)算整個(gè)組織切片的細(xì)胞數(shù)和所占小方格數(shù)，即可得出陽(yáng)性細(xì)胞密度（細(xì)胞數(shù)/mm2)。組織分離細(xì)胞可通過(guò)流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。
