一、標(biāo)本采集
許多無(wú)牙胞厭氧菌是人體的正常菌群，在采集標(biāo)本時(shí)盡量避免正常菌群的污染。應(yīng)該采取沒(méi)有正常菌群污染的標(biāo)本。標(biāo)本采取后應(yīng)迅速送檢，立即接種，放入?yún)捬醐h(huán)境中培養(yǎng)，盡量減少空氣接觸，以免厭氧菌死亡。
二、涂片鏡檢
膿液標(biāo)本可直接涂片染色后觀察細(xì)菌形態(tài)特征、染色性、菌數(shù)多少等供選擇培養(yǎng)基和判定結(jié)果時(shí)參考。
三、接種培養(yǎng)
厭氧菌在有氧的情況下不能生長(zhǎng)。要培養(yǎng)厭氧菌，必須創(chuàng)造一個(gè)無(wú)氧的環(huán)境。通常用培養(yǎng)基中加入還原劑，或用物理、化學(xué)方法去除環(huán)境中的游離氧，以降低氧化還原電勢(shì)。如皰肉培養(yǎng)基、硫基乙酸鈉培養(yǎng)基，牛心腦浸液培養(yǎng)基等。常用的厭氧培養(yǎng)方法有許多，可根據(jù)實(shí)際情況選用。
1．厭氧缸法接種好標(biāo)本的平板或液體培養(yǎng)基試管，可放入?yún)捬醺變?nèi)培養(yǎng)，厭氧缸是普通的干燥缸，用物理化學(xué)的方法使缸內(nèi)造成厭氧環(huán)境，從而將厭氧菌培養(yǎng)出來(lái)。
2．厭氧袋（Bio-bag)即在塑料袋內(nèi)造成厭氧環(huán)境來(lái)培養(yǎng)厭氧菌。塑料袋透明而不透氣，內(nèi)裝氣體發(fā)生管（有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后，盡量擠出袋內(nèi)空氣，然后密封袋口。先折斷氣體發(fā)生管，后折斷美蘭指示劑管，命名袋內(nèi)在半小時(shí)內(nèi)造成無(wú)氣環(huán)境。如不突變表示袋內(nèi)已達(dá)厭氧狀態(tài)，可以孵育。
3．厭氧手套箱（Anaerobie glove box)是迄今為止國(guó)際上公認(rèn)的培養(yǎng)厭氧菌最佳儀器之一。它是一個(gè)密閉的大型金屬箱，箱的前面有一個(gè)有機(jī)玻璃做的透明面板，板上裝有兩個(gè)手套，可通過(guò)手套在箱內(nèi)進(jìn)行操作，故名。箱側(cè)有一交換室，具有內(nèi)外二門，內(nèi)門通箱內(nèi)先關(guān)著。欲放物入箱，先打開(kāi)外門，放入交換室，關(guān)上外門進(jìn)行抽氣和換氣（H2，CO2，N2)達(dá)到厭氧狀態(tài)，然后手伸入手套把交換室內(nèi)門打開(kāi)，將物品移入箱內(nèi)，關(guān)上內(nèi)門。箱內(nèi)保持厭氧狀態(tài)，也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調(diào)節(jié)溫度，本身是孵箱或孵箱即附在其內(nèi)，還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落，這種厭氧箱適于作厭氧細(xì)菌的大量培養(yǎng)研究，大量培養(yǎng)基可放入作預(yù)還原和厭氧性無(wú)菌試驗(yàn)。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環(huán)境和溫度等均系自動(dòng)調(diào)節(jié)。
