活血化瘀藥實(shí)驗(yàn)
目的：
了解活血化瘀藥研究中常用的方法，這些方法的基本理論和意義，為進(jìn)一步研究活血化瘀藥打下一定的基礎(chǔ)。
要求：
①了解血瘀同血液流變學(xué)、血流動(dòng)力學(xué)和微循環(huán)障礙的關(guān)系。
②熟悉當(dāng)前活血化瘀藥研究的概況。
�、凼煜ぱ芯炕钛鏊幍某Ｓ梅椒�，并掌握其中一、二種常用指標(biāo)。
項(xiàng)目：
活血化瘀藥的作用常與改善血瘀患者血液流變學(xué)、血流動(dòng)力學(xué)和微循環(huán)有關(guān)。以下著重就這三方面介紹研究活血化瘀藥常用的方法和指標(biāo)。部分活血化瘀藥的功效還同增強(qiáng)子宮活動(dòng)、改善免疫功能或其鎮(zhèn)痛作用有關(guān)，但迄今還不能證明這些是多數(shù)活血化瘀藥所共有的特性，有關(guān)方法此處不予介紹。
�。�1）影響血液流變學(xué)特性的一些客觀指標(biāo)：
�、傺汉脱獫{粘度。血瘀患者的血漿和全血粘度常較正常值為高。液體的粘度取決于其內(nèi)部對(duì)于流動(dòng)起著阻抗作用的內(nèi)摩擦力的大小，內(nèi)摩擦力大則粘度大，反之則小。水具有較低的粘度，故具有較高的流度；相反，油具有較高的粘度，故具有較低的流度。所以液體的粘度是測(cè)度液體流變性的重要指標(biāo)。
測(cè)定液體粘度最簡(jiǎn)單的方法是測(cè)定液體流過(guò)水平圓管時(shí)通過(guò)某一截面積的液體體積，即流量。粘度的測(cè)定多采用兩種液體，即將測(cè)試液體和對(duì)照液體比較的方法。在血液粘度的測(cè)定上，對(duì)照液體多采用凈水或生理鹽水。由于兩種液體通過(guò)同一圓管（毛細(xì)管）時(shí)，如果兩端的壓力差相同，則單位時(shí)間內(nèi)流出的液量同流過(guò)相同體積所需的時(shí)間成反比，所以也可以該時(shí)間t作為液體粘度的量度。例如健康人的血液粘度多在4．0左右，即流過(guò)同樣體積的血液所需的時(shí)間較水大4．0倍左右。
健康人的血液粘度與性別有關(guān)，男性一般高于女性。據(jù)237例健康人測(cè)定結(jié)果，男性4.25土0．41，女性為3．65土0．32。血漿粘度則男女相似，均在1．65左右。全血粘度的性別差異主要是與男女血細(xì)胞數(shù)量不同有關(guān)。
�、谘�(xì)胞壓積。血細(xì)胞壓積反映血液內(nèi)血細(xì)胞成分的多少。血細(xì)胞壓積是影響血液粘度的重要因素，也是反映血液流變學(xué)特性的重要指標(biāo)。
�、垩梁图t細(xì)胞電泳時(shí)間。血液的粘度，除受血細(xì)胞數(shù)量的影響外，還受血細(xì)胞（主要是紅細(xì)胞）的分散狀態(tài)的影響。紅細(xì)胞愈分散則粘度愈小。相反，如處于聚集狀態(tài)則粘度較高。紅細(xì)胞的分散程度又直接取決于紅細(xì)胞表面所帶負(fù)電荷的多少，所帶負(fù)電荷愈多，則紅細(xì)胞間的靜電排斥力愈強(qiáng)，紅細(xì)胞之間也就愈不易發(fā)生聚集。血沉和紅細(xì)胞電泳時(shí)間都是從不同的側(cè)面反映紅細(xì)胞的分散度。血細(xì)胞表面帶電密度愈小，則愈易聚集，故沉降愈快。同樣，如該紅細(xì)胞處于一定的直流電場(chǎng)中，則帶電密度愈高，在電場(chǎng)中移動(dòng)愈快，故紅細(xì)胞電泳時(shí)間成為測(cè)定紅細(xì)胞表面所帶負(fù)電荷密度多寡的一個(gè)重要指標(biāo)。在具體測(cè)量中，紅細(xì)胞電泳時(shí)間與電場(chǎng)強(qiáng)度和電極間距離等條件有關(guān)，條件不同，測(cè)得的數(shù)據(jù)也不同，故對(duì)照樣品與測(cè)試樣品必須控制在相同條件下進(jìn)行，才能得到正確的結(jié)果。
�、苎“寰奂院脱“逖ㄐ纬蓪�(shí)驗(yàn)。血小板聚集性是研究活血化瘀藥的一個(gè)重要指標(biāo)。常用體外比濁法。血小板混懸液的濁度同所含分散狀態(tài)的血小板數(shù)密切相關(guān)。血小板聚集數(shù)愈多，分散狀態(tài)的血小板數(shù)愈少，混懸液濁度愈低。所以可以用濁度變化來(lái)表示血小板的聚集性能�；鞈乙阂话阌枚嘌“逖獫{。常以二磷酸腺苷（ADP）或膠原作為血小板聚集劑。比濁管如為玻璃管，必須先硅化，即以1%硅油甲苯溶液濕潤(rùn)后烤干備用。比較加等量藥液和對(duì)照液（如生理鹽水）后不同時(shí)間的光密度變化。
血小板血栓形成實(shí)驗(yàn)動(dòng)脈血流中的血小板易粘附于粗糙物表面。如將動(dòng)物右頸總動(dòng)脈近心端和左頸外靜脈近心端以聚乙烯管接通形成旁路，聚乙烯管中段放入一根6cm長(zhǎng)的絲線，當(dāng)打開(kāi)血流后，血液從右頸總動(dòng)脈經(jīng)聚乙烯管返回左頸外靜脈，15分鐘后中斷血流，迅速取出絲線秤重，用體重相等的兩個(gè)動(dòng)物配對(duì)比較給藥與不給藥血栓重量，進(jìn)行顯著性測(cè)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須肝素化。
（2）與血瘀有關(guān)的心血管功能指標(biāo)：
�、倨鞴傺髁康臏y(cè)定。許多活血化瘀藥能擴(kuò)張外周血管，增加有關(guān)器官的血沛量。如增加冠心病患者的心肌血流量，增加閉塞性脈管炎血瘀患者的肢體血流量等，故測(cè)定器官血流量是用以測(cè)定一個(gè)方藥的活血化瘀功效的常用指標(biāo)。測(cè)定的方法很多，可以是非創(chuàng)傷性的，也可以是創(chuàng)傷性的，也可以用營(yíng)養(yǎng)液灌流離休器官，以間接判定藥物對(duì)器官血流量的影響。
非創(chuàng)傷性的方法不僅在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)可用，也可在臨床使用，如用同位素的方法或阻抗血流圖的方法進(jìn)行測(cè)定。
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中常采用創(chuàng)傷性方法。如采用電磁血流量計(jì)或氣泡流量計(jì)方法測(cè)定器官血流量。電磁流量計(jì)法能較正確地反映體內(nèi)各器官的血流量，因而在臨床和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用較廣。其主要優(yōu)點(diǎn)是測(cè)量時(shí)不必切斷血管，只需選擇適當(dāng)大小的探頭嵌套在血管外表面，即能在流量計(jì)上顯示血流速度的讀數(shù)，也可接記錄儀描記。其基本原理是血液成分作為運(yùn)動(dòng)的導(dǎo)體通過(guò)探頭磁場(chǎng)時(shí)可誘導(dǎo)產(chǎn)生電動(dòng)勢(shì)，后者當(dāng)磁場(chǎng)強(qiáng)度和血管直徑不變時(shí)，同血流速度成正比。氣泡流量計(jì)法的基本原理是將血流引入體外玻璃管，注入氣泡，氣泡在已知容積的玻璃管內(nèi)隨血流運(yùn)行，從氣泡運(yùn)行速度計(jì)算血流速度。
在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，還可采用離體器官灌流以了解藥物對(duì)于血管的作用，從而間接判定對(duì)器官流量的影響。如Langendorff離體哺乳類(lèi)心臟灌流法。配制好適當(dāng)?shù)男募I(yíng)養(yǎng)液，在恒定的壓力下，通過(guò)恒溫裝置后，使?fàn)I養(yǎng)液經(jīng)冠脈灌流整個(gè)心臟。具有冠脈擴(kuò)張作用的藥物可使灌流量增加。
�、诳剐募∪毖毖踉囼�(yàn)。
垂體后葉素法腦垂體后葉素可使包括冠脈在內(nèi)的全身血管收縮，造成急性心肌供血不足，在心電圖上可有特異的缺血變化，如ST-T波變化等，比較給藥組與對(duì)照組陰性率差異，判定藥物是否具有抗心肌缺血作用。
異丙腎上腺素法異丙腎上腺素可增強(qiáng)心肌收縮力，加速心率，增加心肌耗氧量，連續(xù)使用可形成實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞，用心電圖和病理切片方法均可檢測(cè)，比較給藥組與對(duì)照組病變程度的差異，判定藥物作用。
冠脈結(jié)扎法結(jié)扎動(dòng)物冠脈的一個(gè)分支，如冠狀動(dòng)脈前降支，造成實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞。根據(jù)心電圖ST段和Q波標(biāo)測(cè)或硝基四氮唑藍(lán)大體標(biāo)本染色，判定病變程度及范圍大小。比較給藥組與對(duì)照組的差異，判定藥效。常用動(dòng)物為家兔或狗。
(3)對(duì)微循環(huán)影響的實(shí)驗(yàn)：
甲皺、球結(jié)膜、舌、唇、齒齦等是目前作微循環(huán)觀察時(shí)常用的部位。其中人體最常用的是甲皺。兔常采用眼球結(jié)膜，或用金黃色地鼠夾裹。
觀察微循環(huán)常用的指標(biāo)包括微血管形態(tài)、密度，微血流的流態(tài)、流速，以及微血管周?chē)袩o(wú)滲出、出血。如正常人甲皺微血管呈襻狀（發(fā)夾形），微血流呈線狀快速流動(dòng)，微血管周?chē)鸁o(wú)滲出和出血。微循環(huán)障礙時(shí)，畸形微血管襻的比例增加、微血管痙攣、血流緩慢、流態(tài)異常（虛線狀、顆粒狀或絮狀）、微血管周?chē)袧B出、出血。皮膚溫度的高低對(duì)于微循環(huán)的影響很大，尤以流速、流態(tài)對(duì)溫度變化最為敏感，溫度升高，流速加快，聚集的血細(xì)胞可發(fā)生解聚。所以如用作動(dòng)態(tài)對(duì)比，前后皮膚溫差不能超過(guò)30C。微循環(huán)可通過(guò)微循環(huán)顯微鏡觀察。
