樣本空白:
由于溶血、脂血、黃疸等情況,會(huì)導(dǎo)致樣本本身的吸光度對(duì)測(cè)試結(jié)果造成影響。所以對(duì)樣本本身吸光度的測(cè)量,即樣本空白,可以去除這方面的影響。測(cè)量方法是按照正常測(cè)試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來(lái)進(jìn)行測(cè)量。自動(dòng)生化儀上,很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點(diǎn):
a)在雙試劑測(cè)定時(shí),加入試劑1和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白,所以有單試劑不能扣除樣本空白的說(shuō)法。
b)現(xiàn)在優(yōu)質(zhì)的試劑的抗干擾能力都比較強(qiáng),比如有些雙試劑,R1加入后先和樣本孵育一段時(shí)間,將血紅蛋白、脂肪、膽紅素等反應(yīng)掉,再加入R2開(kāi)始測(cè)定反應(yīng)。在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白。
c)現(xiàn)代全自動(dòng)生化儀大多采用雙波長(zhǎng)測(cè)定。雙波長(zhǎng)測(cè)定的原則是根據(jù)干擾組分和待測(cè)物質(zhì)吸收光譜的峰形特征,選擇兩個(gè)波長(zhǎng)和,使干擾組分在這兩個(gè)波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)相等,而使待測(cè)物質(zhì)在兩波長(zhǎng)處的吸光系數(shù)有顯著差別。以?xún)刹ㄩL(zhǎng)分別測(cè)定分析溶液的吸光度,以?xún)蓚(gè)吸光度值之差(△A)計(jì)算。這也可以扣除一部分樣本空白。
d)有些儀器,例如日立系列,有專(zhuān)門(mén)的“血清信息”功能的設(shè)置。做法都是單獨(dú)占用一個(gè)空白通道來(lái)計(jì)算,這也叫做樣品空白校準(zhǔn)。
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